Summary

सेल अस्तित्व पर बैक्टीरिया और उनके प्रभाव से फ्रीज सुखाने के लिए योगों

Published: August 03, 2013
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Summary

फ्रीज सुखाने अक्सर व्यवहार्य बैक्टीरियल कोशिकाओं की सूखी उत्पादों को प्राप्त करने के लिए एक आसान और सुविधाजनक तरीका है. इस प्रक्रिया का एक मुद्दा सेल अस्तित्व है. यहाँ हम विस्तार फ्रीज सुखाने के दौरान सेल अस्तित्व इस्तेमाल किया सूत्रीकरण के गुणों से प्रभावित है कैसे की जांच के लिए एक प्रक्रिया है.

Abstract

सेलुलर पानी reversibly भंडारण की सुविधा के लिए सूक्ष्म जीवाणुओं को निष्क्रिय करने के लिए हटाया जा सकता है. हटाने की एक ऐसी विधि एक सज्जन निर्जलीकरण विधि माना जाता है जो फ्रीज सुखाने, है. सुखाने के दौरान सेल अस्तित्व की सुविधा के लिए, कोशिकाओं अक्सर पहले से तैयार कर रहे हैं. निर्माण कोशिकाओं embeds और ठंड और सुखाने के दौरान कोशिकाओं पर लगाए गए विभिन्न हानिकारक तनाव से बचाता है कि एक मैट्रिक्स रूपों. हम यहाँ फ्रीज सुखाने के बाद कोशिकाओं के जीवित रहने की दर मूल्यांकन करने के लिए एक सामान्य तरीका मौजूद है और हम चार विभिन्न योगों के साथ प्राप्त परिणामों की तुलना द्वारा इसे उदाहरण देकर स्पष्ट करना: disaccharide सूक्रोज, बहुलक Ficoll PM400 व्युत्पन्न सूक्रोज, और संबंधित पॉलीसैकराइड hydroxyethyl सेलूलोज़ (एचईसी बैक्टीरिया के दो उपभेदों, पी. पर) और Hydroxypropyl मिथाइल सेलूलोज (HPMC), putida KT2440 और ए chlorophenolicus ए 6. इस काम में हम फ्रीज सुखाने के लिए योगों तैयार करने के लिए कैसे और mechan जांच करने के लिए वर्णन कैसेअंतर स्कैनिंग उष्मामिति (डीएससी), सतह तनाव माप, एक्स – रे विश्लेषण, और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर और जीवित रहने की दरों के लिए उन डेटा संबंधित निर्माण निस्र्पक द्वारा पुनर्जलीकरण के बाद सेल अस्तित्व का वाद. पॉलिमर एक डिग्री बदलती करने के लिए संबंधित पॉलीसैक्राइड जैसी सुक्रोज के एक मोनोमेरिक संरचना पाने के लिए चुने गए हैं. इस विधि का उपयोग कर सेटअप हम तैयार करने के कुछ भौतिक गुणों 1 नियंत्रित कर रहे हैं अगर पॉलिमर डिसैक्राइड के रूप में के रूप में प्रभावी रूप से सेल अस्तित्व का समर्थन कर सकते हैं दिखाया.

Protocol

1. पी. की खेती और फसल putida पी. की एक कॉलोनी के साथ tryptic सोया शोरबा के 100 मिलीलीटर (टीएसबी) inoculating द्वारा स्यूडोमोनास putida की एक स्टार्टर संस्कृति तैयार putida कोशिकाओं tryptic सोया शोरबा (टीएसए) के साथ पू…

Representative Results

1 टेबल निर्माण संरचना पर डेटा, स्थिर योगों, शुष्क नमूनों की संरचना और निर्माण के समाधान की सतह तनाव के हीटिंग के दौरान डीएससी द्वारा दर्ज थर्मल घटनाओं को प्रदर्शित करता है. सुक्रोज की टी जी</sub…

Discussion

इस अध्ययन के लिए मकसद फ्रीज सुखाने के दौरान सेल अस्तित्व के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है कि कुछ निर्माण संपत्तियों की जांच के लिए किया गया था. आंतरिक सुखाने सहिष्णुता विभिन्न प्रजातियों के बीच होती है, के…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

काम डोम कार्यक्रम और यूरोपीय संघ समुदाय के FP7 फ्रेमवर्क कार्यक्रम से अनुदान 211684 (BACSIN) के माध्यम से सामरिक पर्यावरण अनुसंधान के लिए स्वीडिश फाउंडेशन (MISTRA) द्वारा समर्थित किया गया था. हम वैचारिक कथा के साथ मदद करने के लिए एक्स – रे विश्लेषण और एल तांग फिल्माने में सहायता के लिए जे Engstrand धन्यवाद.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Ficoll PM 400 GE-healthcare 17-0300-10  
HEC (Natrosol-M Pharm Grade) Ashland   Gift from Ashland
HPMC (Methocel F4M) Dow   Gift from the Department of Pharmacy, Uppsala University
Sucrose Sigma-Aldrich S2395  
NaCl Sigma-Aldrich 71376  
Tryptic Soy broth Merck 105459  
Tryptic Soy Agar Merck 105458  
Lyostar II FTS Kinetics N.A.  
Pyris Diamond DSC Perkin-Elmer N.A.  
Bruker AXS SMART CCD 1k Diffractometer Bruker N.A  
Dual-beam FEI Strata DB235 FIB/SEM FEI N.A  
Krüss Educational Tensiometer Krüss N.A.  

References

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Cite This Article
Wessman, P., Håkansson, S., Leifer, K., Rubino, S. Formulations for Freeze-drying of Bacteria and Their Influence on Cell Survival. J. Vis. Exp. (78), e4058, doi:10.3791/4058 (2013).

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