Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em> In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında> Bioluminescent Görüntüleme
Summary
Biz çıplak farelerin ve sonraki seri beyinlerine insan glioblastoma multiforme hücrelerinin hassas, stereotaktik implantasyon için tümleşik bir yöntem tarif<em> In vivo</em> Görüntüleme büyüme ve sonuç xenografts tedaviye cevabına izlemek için.
Abstract
Glioblastoma multiforme (GBM) cerrahi rezeksiyon, post-operatif radyasyon tedavisi ve kemoterapi temozolomide 1 oluşan standart üçlü tedavi şekillerinden rağmen insanlarda sadece 14.6 aylık medyan sağkalım ile yüksek dereceli primer beyin kanseri olduğunu. Yeni tedavi yaklaşımları açıkça hastaların yaşam süresini ve yaşam kalitesini artırmak için ihtiyaç vardır. Daha etkili tedavi stratejilerinin geliştirilmesi insan hastalık recapitulate henüz tümör büyümesini ve tedaviye yanıtı izlemek için seri görüntüleme izin GBM hayvan modelleri yardımıyla olacaktır. Bu yazıda, GBM 2 temel klinik özellikleri özetlemek tümör xenografts sonuçlanan çıplak farelerin beyinlerine biyo-resimlenebilir GBM kanser hücrelerinin hassas stereotaktik implantasyonu için bizim teknik tarif. Bu yöntem tekrarlanabilir tümörler verir ve seri içi izlemek için in vivo bioluminescent görüntüleme sağlarken hassas anatomik konumlarda bulunankranial ksenogreft büyüme ve tedavileri 3-5 yanıt. Bu yöntem aynı zamanda düşük perioperatif morbidite ve mortalite ile hayvanlar tarafından iyi tolere edilir.
Protocol
Discussion
Bu yazıda anlatılan farelerde kanser hücrelerinin stereotaktik implantasyon yöntemi tekrarlanabilir makul klinik multiformenin 2, 6-8 infiltratif ve hızlı büyüme paterni recapitulate tümörler oluşturur. Bu teknik, özellikle benzer boyutlara ve biyolojik özellikleri ve spesifik anatomik bölgelerde tekrarlanabilir tümörler arzu vardır farklı tedavi gruplarına eşit fareler katlama deneyleri için çok uygundur. Biz tarif teknikleri kullanılarak tümör hücrelerinin Stereotaktik implantasyon…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz Dr Andrew Hollander, Sara Davis, Lee Shuman, Tim Jenkins, ve uzman yardımı için Dr Xiangsheng Xu minnettarız. Biz Dr Ann Kennedy destek için minnettarım. BCB Radyasyon Biyolojisi Eğitimi Hibe C5T32CA009677 tarihinde desteklenmiştir. Jfd Medical Bilim Adamları (1006792) için Burroughs Wellcome Kariyer Ödülü desteklenmiştir. JLB supers hibe (5 R25 CA140116-03) üzerinde desteklenmiştir. Biz kimin teşvik ve desteği bizim araştırma mümkün kılmak yardımcı olan Dr Steve Hahn kabul etmek istiyorum. Biz de cesaret ve yararlı yorumlar için Pennsylvania Nano-Biyo Arayüz Merkezi (NBIC) ve Dr Dennis Discher Üniversitesi teşekkür etmek istiyorum. Biz onların MRG ve Optik / Biyoparlaklık Çekirdek Hizmetleri kullanımı için Pennsylvania Üniversitesi Küçük Hayvan Görüntüleme Tesis (Saif) kabul etmektesiniz. Bu teknikler, Ulusal Sağlık Enstitüleri (RC1 CA145075 ve K08 NS076548-tarafından desteklenen projelerin bir parçası olarak geliştirilmiştir01).
Materials
| Description | Supplier | Catalogue Number | Comments |
| Digital Just for Mouse Stereotaxic Instrument | Stoelting | 51730D | Stereotactic platform for mouse implantation |
| Ketamine/xylazine | Injectable anesthesia | ||
| Puralube Vet Ointment (ophthalmic) | Amazon.com | To prevent drying of the mouse’s eyes | |
| drill holder for the stereotactic platform | Stoelting | 51681 | |
| Micromotor Electric Drill | Stoelting | 51449 | For drilling through the skull |
| .45 mm carbide drill bit | Stoelting | 514551 | |
| Sterile cotton swabs | Fisher Scientific | 23-400-100 | |
| Glass bead dry sterilizer (Germinator 500) | Braintree Scientific | GER-5287 | To sterilize metal surgical instruments |
| Mouse rectal probe | Braintree Scientific | RET-3-ISO | Compatible with the temperature controller |
| Temperature Controller (TCAT-2DF) | Harvard Apparatus | 727561 | Temperature controller to maintain animal’s temperature during surgery |
| Small heating plate | Harvard Apparatus | 727617 | For use with temperature controller to warm mouse during surgery. The heating plate fits under the mouse on the stereotaxic platform. |
| Disposable Scalpels | BD Bard-Parker | 2015-11 | #10 scalpel |
| 10 microliter syringe | Hamilton | 7635-01 | For injection of tumor cells |
| 30 gauge needles, 1″ long, with flat point | Hamilton | Various | Must be compatible with the 10 μl syringe |
| Nanomite Programmable Syringe Pump | Harvard Apparatus | 704507 | Digital motorized syringe injector for stereotaxic device |
| Cellulose sterile surgical spear sponges | Ultracell | 40410 | To dry the surgical field |
| Bone wax | Ethicon | W31 | To seal the burr hole |
| Tissumend II synthetic absorbable tissue adhesive | Veterinary Products Laboratories | 3002931 | To seal the incision |
| Hot water pump with warming pad | Gaymar | TP-650 | Warms mice in post-operative period |
| IVIS Lumina II | Caliper Life Science | Bioluminescent imager | |
| D-Luciferin potassium salt | Gold Biotechnology | LUCK-1 | Luciferin for bioluminescent imaging |
References
- Stupp, R. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).
- Jacobs, V. L., Valdes, P. A., Hickey, W. F., De Leo, J. A. Current review of in vivo GBM rodent models: emphasis on the CNS-1 tumour model. ASN Neuro. 3, e00063 (2011).
- Shelton, L. M. A novel pre-clinical in vivo mouse model for malignant brain tumor growth and invasion. J. Neurooncol. 99, 165-176 (2010).
- Brehar, F. M. The development of xenograft glioblastoma implants in nude mice brain. J. Med. Life. 1, 275-286 (2008).
- Ozawa, T., James, C. D. Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging. J. Vis. Exp. (41), e1986 (2010).
- Radaelli, E. Immunohistopathological and neuroimaging characterization of murine orthotopic xenograft models of glioblastoma multiforme recapitulating the most salient features of human disease. Histol. Histopathol. 24, 879-891 (2009).
- Baumann, B. C. Enhancing the efficacy of drug-loaded nanocarriers against brain tumors by targeted radiation therapy. , (2012).
- Baumann, B. C. An integrated method for reproducible and accurate image-guided stereotactic cranial irradiation of brain tumors using the Small Animal Radiation Research Platform (SARRP). Transl. Oncol. , (2012).
- Park, S. S. MicroPET/CT imaging of an orthotopic model of human glioblastoma multiforme and evaluation of pulsed low-dose irradiation. Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 80, 885-892 (2011).
- Szentirmai, O. Noninvasive bioluminescence imaging of luciferase expressing intracranial U87 xenografts: correlation with magnetic resonance imaging determined tumor volume and longitudinal use in assessing tumor growth and antiangiogenic treatment effect. Neurosurgery. 58, 365-372 (2006).
- Dinca, E. B. Bioluminescence monitoring of intracranial glioblastoma xenograft: response to primary and salvage temozolomide therapy. J. Neurosurg. 107, 610-616 (2007).
