विकिरण और निर्जलीकरण बाष्पीकरणीय फ्लक्स विधि (EFM) का उपयोग करने के लिए पत्ता हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व और रंध्रीय प्रवाहकत्त्व और उनके जवाब के मापन

Summary

हम पत्ता हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व के एक साथ माप के लिए एक अपेक्षाकृत (30 मिनट) तेजी से और यथार्थवादी विधि का वर्णन (<em> कश्मीर</em_{पत्ता}) और रंध्रीय प्रवाहकत्त्व (<em> छ</em_S) Transpiring excised पत्तियों के लिए. विधि करने के लिए प्रकाश और निर्जलीकरण प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए संशोधित किया जा सकता है<em> कश्मीर</em_{पत्ता} और<em> छ</em_S.

Abstract

Water is a key resource, and the plant water transport system sets limits on maximum growth and drought tolerance. When plants open their stomata to achieve a high stomatal conductance (g_s) to capture CO₂ for photosynthesis, water is lost by transpiration^1,2. Water evaporating from the airspaces is replaced from cell walls, in turn drawing water from the xylem of leaf veins, in turn drawing from xylem in the stems and roots. As water is pulled through the system, it experiences hydraulic resistance, creating tension throughout the system and a low leaf water potential (Ψ_leaf). The leaf itself is a critical bottleneck in the whole plant system, accounting for on average 30% of the plant hydraulic resistance³. Leaf hydraulic conductance (K_leaf = 1/ leaf hydraulic resistance) is the ratio of the water flow rate to the water potential gradient across the leaf, and summarizes the behavior of a complex system: water moves through the petiole and through several orders of veins, exits into the bundle sheath and passes through or around mesophyll cells before evaporating into the airspace and being transpired from the stomata. K_leaf is of strong interest as an important physiological trait to compare species, quantifying the effectiveness of the leaf structure and physiology for water transport, and a key variable to investigate for its relationship to variation in structure (e.g., in leaf venation architecture) and its impacts on photosynthetic gas exchange. Further, K_leaf responds strongly to the internal and external leaf environment³. K_leaf can increase dramatically with irradiance apparently due to changes in the expression and activation of aquaporins, the proteins involved in water transport through membranes⁴, and K_leaf declines strongly during drought, due to cavitation and/or collapse of xylem conduits, and/or loss of permeability in the extra-xylem tissues due to mesophyll and bundle sheath cell shrinkage or aquaporin deactivation^5-10. Because K_leaf can constrain g_s and photosynthetic rate across species in well watered conditions and during drought, and thus limit whole-plant performance they may possibly determine species distributions especially as droughts increase in frequency and severity^11-14.

We present a simple method for simultaneous determination of K_leaf and g_s on excised leaves. A transpiring leaf is connected by its petiole to tubing running to a water source on a balance. The loss of water from the balance is recorded to calculate the flow rate through the leaf. When steady state transpiration (E, mmol • m^-2 • s^-1) is reached, g_s is determined by dividing by vapor pressure deficit, and K_leaf by dividing by the water potential driving force determined using a pressure chamber (K_leaf= E /- Δψ_leaf, MPa)¹⁵.

This method can be used to assess K_leaf responses to different irradiances and the vulnerability of K_leaf to dehydration^14,16,17.

Protocol

1. हाइड्रेटेड पत्तियां को मापने के लिए पत्ता हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व (कश्मीर अधिकतम) शूटिंग जैसे कि जाइलम तनाव कम कर रहे हैं, हवा और अंधेरे प्लास्टिक गीला कागज तौलिये के साथ भरा बैग में जगह में कटौती शाम या रात में अधिमानतः ले लीजिए. प्रयोगशाला में, पानी के नीचे हर शूटिंग के अंत से कम से कम दो नोड्स recut. शुद्ध पानी, या अन्य कश्मीर पत्ता मापन के लिए इस्तेमाल किया जा समाधान में रातोंरात rehydrate गोली मार. Ultrapure पानी की एक प्रवाह समाधान के रूप में सिफारिश की है, जब तक कि अलग अलग समाधान के प्रभावों के लिए एक कारक के रूप में जांच की जानी हैं. शूटिंग से आंशिक रूप से degassed प्रवाह समाधान के तहत एक ताजा रेजर ब्लेड के साथ पत्ता कट. Ultrapure पानी की एक प्रवाह समाधान के रूप में सिफारिश की है, जब तक कि अलग अलग समाधान के प्रभावों के लिए एक कारक के रूप में जांच की जानी हैं. हम समाधान रातोंरात degassing एक फ्लास्क में एक वैक्यूम पंप का उपयोग करने की सलाह देते हैं, लेकिन अन्य तरीकों का इस्तेमाल किया जा सकता है. लपेटें petio के आसपास पूर्व बढ़ाकर parafilmके डंठल और टयूबिंग के बीच एक अच्छा मुहर सुनिश्चित ले. इस कदम विशेष रूप से गैर दौर petioles के लिए उपयोगी है, के रूप में अतिरिक्त parafilm लपेटकर टयूबिंग के अंदर फिट डंठल दौर में मदद मिलेगी. चिकित्सकीय पेस्ट parafilm लपेटकर petioles में grooves भर पहले डंठल के लिए लागू किया जा सकता है. सिलिकॉन टयूबिंग ultrapure पानी के नीचे पत्ते को हवा को रोकने के लिए सिस्टम में प्रवेश करने से कनेक्ट करें. पत्ती के रूप में पानी के स्रोत से ऊपर उठाया है, ट्यूबिंग में पानी subatmospheric दबाव के तहत है, और इस प्रकार सील अच्छा है अगर कोई हवा टयूबिंग में माप के दौरान तैयार की है. Omnifit, कैम्ब्रिज, यूके), इस दृष्टिकोण petioles के लिए विशेष रूप से जटिल आकार के साथ उपयोगी है, या घास ब्लेड के लिए वैकल्पिक रूप से डंठल सिलिकॉन टयूबिंग में सीधे सील, रबर गैसकेट के साथ एक संपीड़न फिटिंग (जैसे, (Omnifit A2227 बोर अनुकूलक इस्तेमाल किया जा सकते हैं , जो एक गिलास छड़ी के चारों ओर लपेटा जा सकता है और संपीड़न फिटिंग के साथ बंद जब संभव., डंठल सी में सीधे सीलतेजी से किया जा रहा है और छोड़ने के एक जंक्शन डंठल टयूबिंग कि पारदर्शी है, बुलबुले अधिक आसानी से देखा जा करने के लिए अनुमति की licone टयूबिंग फायदा है. ट्यूबिंग मुश्किल (± 10 ग्राम संकल्प) संतुलन है, जो डेटा हर 30 सेकंड लॉग एक कंप्यूटर (; GmbH Mettler Toledo, Greifensee, स्विट्जरलैंड जैसे "शेष लिंक" सॉफ्टवेयर का उपयोग) पर एक स्नातक सिलेंडर चल टयूबिंग पत्ती जोड़ता पत्ती के माध्यम से प्रवाह की दर की गणना के लिए. पत्तियां लकड़ी एक बड़े बॉक्स प्रशंसक से ऊपर मछली पकड़ने की रेखा के साथ और एक प्रकाश स्रोत (1000> μmol • 2 मीटर • उच्च विकिरण मापन के लिए photosynthetically सक्रिय विकिरण -1), थोड़ा के स्तर से ऊपर के तहत भावुक फ्रेम में मध्यतल की ओर सतह ऊपर आयोजित किया जाना चाहिए स्नातक की उपाधि प्राप्त सिलेंडर में meniscus. पत्ता स्नातक की उपाधि प्राप्त सिलेंडर में पानी के ऊपर रखा जाना चाहिए करने के लिए सुनिश्चित करें कि पत्ते को पानी स्वेद द्वारा संचालित है, और प्रवेश के दबाव के तहत पत्ती गुरुत्वाकर्षण के कारण नहीं है, के रूप में होगामामले में अगर पत्ता सिलेंडर में पानी की meniscus नीचे रखा गया हो. छोटे गीला कागज तौलिया के साथ भरा कंटेनर संतुलन कक्ष के अंदर रखा जाता है संतुलन में हवा पानी से संतृप्त करने के लिए सुनिश्चित है, इस प्रकार के संतुलन में पानी के स्रोत से वाष्पीकरण वातावरण से बचने. इस संभावना टयूबिंग में एक पानी निकलने की टोंटी चार रास्ता वाल्व का उपयोग पत्ती में प्रवाह लंगड़ा, और जाँच है कि संतुलन पर पानी सिलेंडर की बड़े पैमाने पर गिरावट नहीं करता द्वारा जाँच की जा सकती है. दीपक की गर्मी को अवशोषित करने के लिए एक स्पष्ट Pyrex पत्ती ऊपर पानी से भरा कंटेनर रखें. Pyrex कंटेनर अधिक ठंडा पानी जोड़ने ऐसी है कि गर्मी दीपक Pyrex कंटेनर पर्याप्त गर्मी नहीं करता पत्ती चारों ओर हवा नीचे गर्म ° C प्रयोग भर पत्ता तापमान 23 डिग्री सेल्सियस और 28 के बीच में बनाए रखें. तंत्र पर कम से कम 30 मिनट के लिए भाप बनकर उड़ के पत्ते की अनुमति दें, इस प्रकार उच्च विकिरण acclimate करने के लिए पर्याप्त समय दे रही है, और additiजब तक onally प्रवाह दर, कोई ऊपर या नीचे की प्रवृत्ति के साथ स्थिर हो गया है, और विभिन्नता का गुणांक <कम से कम 5-10 30 सेकंड प्रवाह अंतराल पर किए गए माप के लिए 5% के साथ. यह आवश्यक है के लिए प्रवाह दर एक स्थिर अवस्था तक पहुंचने के लिए क्योंकि इस प्रक्रिया में एक स्थिर Ψ पत्ता मानता है. पिछले अध्ययनों से इन मानदंडों को प्रवाह की दर (ई), Ψ पत्ती और कश्मीर पत्ती के स्थिरीकरण के लिए पर्याप्त हो पाया, अब स्थिर प्रवाह के बाद माप के समय के साथ परीक्षण स्थापित किया गया था माप समय की एक विस्तृत सात प्रजातियों में से प्रत्येक के लिए कश्मीर पत्ती का कोई रिश्ता दिखाया पत्ती 17,18 समाई की सीमा होती है. स्थिरीकरण आम तौर पर 30 मिनट या उससे कम समय लगता है, लेकिन कुछ प्रजातियों में कुछ प्रजातियों के लिए एक घंटे से भी अधिक की आवश्यकता हो सकती है. नोट: जब प्रवाह की दर बहुत कम (<8 ग्राम -1) है, स्थिरता पिछले पाँच 30 सेकंड अंतराल के चल औसत का उपयोग निर्धारित किया जा सकता है. </p> अगर अचानक प्रवाह परिवर्तन, या तो अचानक रंध्रीय बंद करने के लिए कारण, या सील या कणों या हवाई बुलबुले द्वारा प्रणाली में रुकावट से स्पष्ट रिसाव माप त्यागें. जब प्रवाह स्थिर, एक thermocouple के साथ पत्ता तापमान रिकॉर्ड. जल्दी टयूबिंग से पत्ता निकालने, थपका डंठल सूखी पत्ती और एक sealable बैग जो पहले किया गया था में exhaled में जगह है, स्वेद को रोकने. चलो कम से कम 20 मिनट के लिए अपने बैग में पत्ती समभार बनाना. अंतिम 10 प्रवाह की दर माप औसत. यह आपके ई माप होगा. जब पत्ती equilibrated है, एक दबाव कक्ष के साथ अंतिम पत्ता पानी संभावित उपाय (Ψ अंतिम). एक flatbed स्कैनर और इमेज प्रोसेसिंग सॉफ्टवेयर, के साथ या एक पत्ती क्षेत्र मीटर के साथ पत्ता क्षेत्र मापें. कश्मीर पत्ती ई / ΔΨ पत्ती (जहां ΔΨ पत्ती = Ψ अंतिम रूप में गणना की है </उप -> 0) MPa और आगे पत्ती क्षेत्र द्वारा सामान्यीकृत. इकाइयों mmol में m -2 एस -1 MPa -1. पत्ती स्नातक सिलेंडर में पानी के स्तर से ऊपर तैनात है, क्योंकि पानी के दबाव को कम करने पत्ती में प्रवेश करने में गुरुत्वाकर्षण के प्रभाव नगण्य हो सकता है, विशेष रूप से Ψ अंतिम, जो हमेशा> -0.1 MPa के सापेक्ष होता है. पानी 15,19,20 चिपचिपापन का तापमान निर्भरता द्वारा प्रेरित कश्मीर पत्ती में परिवर्तन के लिए सही है, निम्न समीकरण का उपयोग कर 25 डिग्री सेल्सियस के लिए कश्मीर पत्ती मूल्यों मानकीकरण: रंध्रीय प्रवाहकत्त्व (एस जी) के रूप में ई पत्ती के लिए हवा में वाष्प दबाव अंतर, वाष्प pressu बराबर द्वारा विभाजित निर्धारित किया जा सकता हैफिर (VPD) घाटा, एक तापमान और सापेक्ष आर्द्रता सेंसर पत्ते के निकट का उपयोग कर निर्धारित किया. VPD निम्न समीकरण 21 का उपयोग कर की गणना की है जहां आरएच सापेक्ष आर्द्रता, उपाध्यक्ष हवा की संतृप्ति वाष्प दबाव है (kPa में, तापमान के एक समारोह, आर्डेन बक 22 समीकरण के अनुसार), और वायुमंडलीय दबाव (kPa में) एपी. 2. निर्जलित पत्तियां के लिए पत्ती हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व मापने शूटिंग जैसे कि जाइलम तनाव कम कर रहे हैं, हवा और अंधेरे प्लास्टिक गीला कागज तौलिये के साथ भरा बैग में जगह में कटौती शाम या रात में अधिमानतः ले लीजिए. प्रयोगशाला में, पानी के नीचे हर शूटिंग के अंत से कम से कम दो नोड्स recut. शुद्ध पानी, या अन्य समाधान के लिए कश्मीर ले लिए इस्तेमाल किया जा में रातोंरात rehydrate गोली मारवायुसेना माप. Ultrapure पानी की एक प्रवाह समाधान के रूप में सिफारिश की है, जब तक कि अलग अलग समाधान के प्रभावों के लिए एक कारक के रूप में जांच की जानी हैं. Ultrapure पानी के तहत कम से कम तीन पत्तियों के साथ खंडों में शूटिंग कट और निर्जलीकरण Ψ पत्ती मूल्यों की एक श्रृंखला के लिए समय के विभिन्न अवधियों के लिए एक प्रशंसक के साथ गोली मारता है. शूटिंग के प्रत्येक पत्ते के आसपास) जो पहले किया गया है में exhaled, और फिर एक बड़ी sealable बैग में गीला कागज के साथ पूरी शूटिंग के जगह, एक बार गोली मारता निर्जलित हैं, sealable बैग (Nasco, किले एटकिंसन, WI, संयुक्त राज्य अमेरिका चक्कर – पाक) जगह तौलिया. शूटिंग में कम से कम 30 मिनट (दृढ़ता से निर्जलित शूटिंग के लिए अब संतुलन बार आवश्यक हो सकता है) के लिए संतुलन में लाना है. संतुलन के बाद, उत्पाद ऊपर और नीचे की पत्ती और उपाय प्रारंभिक Ψ पत्ती (= Ψ ओ) एक दबाव कक्ष का उपयोग कर. शूटिंग के त्यागें अगर उन दो पत्तियों का Ψ पत्ती में अंतर से अधिक 0.1 MPa (stron के लिए हैGly निर्जलित पत्तियों, इस रेंज 0.3 MPa के लिए बढ़ाया जा सकता है). तीसरे पत्ता तो EFM के साथ कश्मीर पत्ती और छ ऊपर -1.18 1.2 चरणों का पालन निर्धारित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. विशेष रूप से, स्थिर राज्य ई पत्ते कि गंभीर निर्जलित पत्तियों किया गया है, के रूप में रंध्र अभी भी खुला है और छ काफी चर्म संबंधी 17 प्रवाहकत्त्व से उच्च मूल्यों उत्पन्न के लिए भी प्राप्त कर सकते हैं. हाइड्रोलिक भेद्यता घटता का निर्माण करने के लिए, कश्मीर पत्ती का उपयोग कर के रूप में 1.16 कदम में Ψ अंतिम गणना करने के लिए, और फिर साजिश कश्मीर पत्ती मूल्यों के खिलाफ जो भी सबसे कम है, Ψ ओ या Ψ अंतिम, यानी, प्रयोग के दौरान मजबूत पत्ता द्वारा अनुभवी निर्जलीकरण (Ψ = सबसे कम). इसी तरह, पत्ती निर्जलीकरण के जवाब में जी की गिरावट जी सबसे कम Ψ के खिलाफ साजिश रचने के द्वारा निर्धारित किया जा सकता है. पिछले काम श है स्वयं कि निर्जलीकरण कश्मीर पत्ती और जी एस 14,16 में कम से कम आंशिक रूप से अपरिवर्तनीय गिरावट लाती है. हम Ψ सबसे कम 0.5 MPa अंतराल के प्रति कम से कम 6 कश्मीर पत्ती मान प्राप्त करने की सलाह देते हैं (0.25 MPa इस अंतराल को कम किया जा सकता है अगर प्रजातियों के साथ आप काम कर रहे हैं वास्तव में निर्जलीकरण की चपेट में है). डिक्सन ग़ैर परीक्षण कश्मीर पत्ती मूल्यों पर सबसे कम Ψ के प्रत्येक 0.5 MPa जल क्षमता अंतराल अपने भेद्यता 23 वक्र से outliers हटाने के लिए प्रदर्शन. क्योंकि प्रजातियों कश्मीर पत्ती और जी अपनी प्रतिक्रिया में 14,16 निर्जलीकरण के लिए अलग, प्रत्येक प्रजाति के लिए विभिन्न कार्यों को फिट करने के लिए और अधिकतम संभावना (न्यूनतम AIC मूल्य, 14 जानकारी के लिए देखें) का चयन करें. हम कम से कम चार फिटिंग कार्य पहले साहित्य में इस्तेमाल की सलाह देते हैं: (रैखिक1.4in "के लिए: src =": स्नातकोत्तर "सामग्री चौड़ाई = लिए" files/ftp_upload/4179/4179eq3highres.jpg / "> /), sigmoidal ( ), रसद ( ) और घातीय ( ). 3. प्रतिनिधि परिणाम निर्जलीकरण साथ पत्ती हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व की गिरावट (1 छवि) प्रजातियों भर में दृढ़ता से भिन्न होता है. सूखा संवेदनशील प्रजातियों अधिक सूखा सहिष्णु प्रजातियों की तुलना में एक कम नकारात्मक पानी क्षमता पर मजबूत गिरावट का अनुभव है, जब उच्च विकिरण मापा के तहत (PAR १,०००> μmol • मीटर -2 • एस -1). पानीहाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व के 80% mesic जड़ी बूटी हेलियनथस annuus के लिए (80 पी) नुकसान में संभावित 3 कम कि Heteromeles arbutifolia की तुलना में नकारात्मक MPa, कैलिफोर्निया शैपरेल देशी था Heteromeles arbutifolia पानी की क्षमता में गिरावट के लिए रैखिक जवाब दिया, हेलियनथस annuus जबकि एक गैर दिखाया. गिरावट रेखीय. दोनों रंध्रीय (जी) प्रवाहकत्त्व और पत्ती हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व (कश्मीर पत्ती) भी नाटकीय रूप से प्रतिक्रिया करने के लिए ज्योति – दान कर सकते हैं (2 छवि). Raphiolepis इंडिका के लिए, रंध्रीय प्रवाहकत्त्व उच्च विकिरण मापा के तहत पत्तियों के लिए निर्जलीकरण के साथ मजबूती से गिरावट आई है (PAR हज़ार> μmol • मीटर -2 • -1) और प्रयोगशाला प्रकाश के तहत (PAR <6 μmol • मीटर -2 • एस -1). उच्च विकिरण के तहत, कि जल क्षमता है कि अच्छी तरह से जलाया घास का मैदान के लिए विशिष्ट है निर्जलित किया गया था EFM मापा के साथ पत्तेमिड – डे पर बरकरार पौधों पर ves एक porometer (छवि में सितारा 2.) के साथ बरकरार पौधों पर मापा पत्तियों के लिए के रूप में इसी तरह जी दिखाया. विशेष रूप से, अधिकतम जलयोजन में पत्तियों के लिए, कश्मीर का पत्ता कम विकिरण (11 बनाम 2.8 mmol मीटर -2 एस -1 -1 MPa) की तुलना में उच्च करने के लिए संपर्क में पत्तियों के लिए चार गुना अधिक था, और इसलिए कश्मीर पत्ती में प्रकाश में अच्छी तरह से एक मजबूत प्रतिक्रिया से पता चला जी से हाइड्रेटेड पत्तियों. इसके अलावा, उच्च विकिरण के तहत, कश्मीर का पत्ता निर्जलीकरण के साथ और अधिक दृढ़ता से मना कर दिया. पी 80 के तहत कम विकिरण की तुलना में उच्च 0.93 MPa कम नकारात्मक था. चित्रा 1 पत्ता एक संवेदनशील सूखा (ऊपर) और एक सूखा सहिष्णु (नीचे) प्रजातियों (14,24 से) के लिए हाइड्रोलिक भेद्यता घटता. प्रत्येक बिंदु एक पाप का प्रतिनिधित्व करता हैपत्ता बाष्पीकरणीय प्रवाह (EFM) विधि का उपयोग कर एक अलग पत्ते पर हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व (कश्मीर पत्ती) की gle माप. ऊर्ध्वाधर सलाखों जल क्षमता, जिस पर प्रजातियों प्रारंभिक पत्ती हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व (80 पी) के 80% खो का प्रतिनिधित्व करते हैं. सबसे अच्छा फिट अधिकतम संभावना का उपयोग कर कार्यों दोनों प्रजातियों के लिए योजना बनाई है. चित्रा 2 के लिए गिरावट Raphiolepis इंडिका पत्ती पानी संभावित रंध्रीय प्रवाहकत्त्व (जी) और पत्ता हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व (कश्मीर पत्ती) की प्रतिक्रिया उच्च बनाम कम विकिरण (16) के तहत मापा. (PAR> 1000 और <6 mmol -2 मीटर •-1). प्रत्येक बिंदु एक अलग बाष्पीकरणीय प्रवाह विधि (EFM) का उपयोग करते हुए, सफेद और काले डॉट्स के साथ क्रमशः उच्च और निम्न विकिरण मापा के तहत पत्तियों का प्रतिनिधित्व पत्ती पर एक ही माप का प्रतिनिधित्व करता है. रंध्रीय प्रवाहकत्त्व उच्च बनाम कम विकिरण में घटता के लिए समीकरण: और . उच्च बनाम कम विकिरण में जोखिम घटता के लिए समीकरण: और . ऊपरी पैनल में ग्रे सितारा मतलब ± स्टेशन का प्रतिनिधित्व करता हैजी और पत्ता पानी बरकरार पौधों की मिड – डे में एक porometer के साथ पत्तियों पर मापा संभावित ndard त्रुटि. निचले कक्ष में ग्रे और काले ऊर्ध्वाधर सलाखों जल क्षमता, जिस पर प्रजातियों के उच्च और कम विकिरण के तहत प्रारंभिक पत्ती हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व (80 पी) की 80% क्रमशः खो का प्रतिनिधित्व करते हैं.

Discussion

बाष्पीकरणीय प्रवाह यहाँ प्रस्तुत पद्धति रंध्रीय प्रवाहकत्त्व के साथ माप के साथ प्रयोगशाला में अपेक्षाकृत तेजी से (30 मिनट) पत्ती हाइड्रोलिक प्रवाहकत्त्व के दृढ़ संकल्प की अनुमति देता है.

EFM इतनी दूर तरीका है कि सबसे अधिक बारीकी से पत्तियों में पानी के प्राकृतिक मार्ग के बाद दिया, कि पत्ती ¹⁵ रंध्र से airspaces और diffuses में पानी evaporates. कश्मीर _{पत्ता} निर्धारण के लिए अन्य प्रयोगात्मक विधियों की संख्या ^25, तीन विशेष रूप से आम किया जा रहा है के साथ मौजूद हैं. (1) उच्च दबाव प्रवाह विधि (HPFM), पानी उच्च दबाव ^15,26 के तहत पत्ती के माध्यम से दिया जाता है. हालांकि, जोखिम घटता इस विधि के साथ क्योंकि लागू सकारात्मक दबाव emboli फिर से भरना और मेज़ोफिल ऊतक rehydrate कर सकते हैं. प्राप्त नहीं किया जा सकता है (2) पुनर्जलीकरण कैनेटीक्स विधि (रूट) में, कश्मीर का _{पत्ता} निर्जलित पत्तियों का पुनर्जलीकरण के बीच चर्चा के साथ सादृश्य का उपयोग कर की गणना की हैएक ^27,28 प्रतिरोधों के साथ श्रृंखला में एक संधारित्र के arging. इस विधि तेजी से है, लेकिन पत्ती में पुन: पेश नहीं करता प्राकृतिक वाष्पोत्सर्जन रास्ते की पूरी प्रणाली है और उच्च विकिरण को आदत पत्तियों का माप की अनुमति आसानी से संशोधित नहीं किया है. (3) पत्ता वैक्यूम पंप विधि (VPM) में एक कक्ष में रखा गया है, उसके डंठल एक संतुलन पर एक पानी के स्रोत के लिए जुड़ा हुआ है, जबकि अलग तीव्रता के vacuums ^15,26 पत्ती से पत्ता ड्राइविंग पानी की कमी के लिए लागू कर रहे हैं. इस पद्धति का समय लग सकता है. सभी तीन तरीकों का उपयोग कर माप के अनुरूप परिणाम ^15,28,29 दे पाया गया है, और इस प्रकार EFM अक्सर वाष्पोत्सर्जन पानी आंदोलन के आधार पर दिया जा रहा है प्रयोग किया जाता है, और उसके रिश्तेदार तेज़ी, और अलग अलग परिस्थितियों में कश्मीर _{पत्ती को} मापने के लिए अपने संशोधन.

ठेठ कश्मीर _{पत्ती का} निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों की सभी एसीसी बढ़ाता में अनिश्चितता का एक स्तर शामिलurately ड्राइविंग ²⁵ स्वेद इसी बल. EFM में, ΔΨ _{पत्ती} गणना कश्मीर _{पत्ती} सच ड्राइविंग बल की तुलना में कम है, क्योंकि यह थोक Ψ _{पत्ती} पर आधारित है के बाद पत्ती प्रेशर बम के लिए equilibrated है. इस बिंदु पर, थोक Ψ _{पत्ती} जरूरी हाइड्रोलिक मार्ग, के अंत में कोशिकाओं के पानी की क्षमता का प्रतिनिधित्व नहीं करता है, जहां पानी evaporates, बल्कि कम पानी की क्षमता के अपेक्षाकृत कुछ कोशिकाओं, जहां पानी के लिए एक मात्रा भारित औसत चलती है और evaporating, और उच्च पानी की क्षमता का अधिक कई कोशिकाओं कि स्वेद धारा से अलग किया जा सकता है के लिए. कितना Ψ _{पत्ती} सच ड्राइविंग बल से अलग इस तरह जहां पानी पत्ती में evaporating है पर निर्भर करता है. है यदि पत्ती भर पानी evaporates, थोक Ψ _{पत्ती} सच ड्राइविंग बल के करीब हो सकता है, हो सकता है और अगर केवल अपेक्षाकृत कुछ ग से पानी evaporatesElls रंध्र निकट, थोक Ψ _{पत्ती} काफी हद तक सच ड्राइविंग बल, यानी, उन कोशिकाओं के पानी की क्षमता वास्तव में बहुत कम हो सकती है कम हो सकता है और इस तरह वास्तविक कश्मीर _{पत्ती} EFM के साथ निर्धारित किया है कि तुलना में कम होगा. इस प्रकार, डिग्री है कि कश्मीर EFM द्वारा निर्धारित _{पत्ती} सच कश्मीर _{पत्ती का} प्रतिनिधित्व करता है पानी के प्रवाह मार्ग है, जो अभी भी अच्छी तरह से नहीं समझ रहे हैं के प्रति संवेदनशील है. जबकि EFM डेटा कि K _{पत्ती} (ऊपर देखें) को मापने के लिए अन्य तरीकों के उन मैच, और तुलनात्मक उपयोग के लिए उत्कृष्ट है, मेज़ोफिल के माध्यम से पानी के प्रवाह के रास्ते में भिन्नता प्रजातियों आगे की जांच पड़ताल की जरूरत की संभावना प्रदान करता है. दरअसल, दिए गए प्रजातियों के पत्तों के लिए भी, ये पानी रास्ते विभिन्न स्थितियों, जैसे के तहत अलग irradiances और गर्मी भार ^{4,30 के} तहत या अलग पानी स्थिति (ऊतक संकोचन दिया) ³¹ के, अलग – अलग हो सकती है. इसके अलावा ज्ञानजल परिवहन के रास्ते के इस प्रकार EFM समग्र पत्ती हाइड्रोलिक परिवहन पर बदलते रास्ते के प्रभाव को हल करने के लिए इस्तेमाल किया जा करने की अनुमति होगी.

EFM में रंध्रीय प्रवाहकत्त्व के माप विकिरण और निर्जलीकरण के लिए प्रतिक्रियाओं के दृढ़ संकल्प की अनुमति है, और कश्मीर _{की पत्ती} के साथ _जी के मिलान प्रतिक्रियाओं प्रदान की फायदे हैं. इसके अतिरिक्त, पिछले पत्ती _जी पुनर्जलीकरण निर्जलीकरण के प्रभाव इस विधि के साथ मूल्यांकन किया जा सकता है. हालांकि, इस पद्धति दो संभावित कमियां है. सबसे पहले, यह छ माप एक excised पत्ते पर किया जाता है, एक अक्षुण्ण संयंत्र पर बजाय, और दूसरा, रंध्रीय प्रवाहकत्त्व के निर्धारण के पत्ते से जलवायु कुछ दूरी की माप, बजाय एक porometer कक्ष में पत्ती के करीब पर आधारित है , हालांकि प्रशंसक के साथ पत्ती की वेंटिलेशन हवा आसपास के साथ पत्ती की सतह equilibrates. कुछ प्रजातियों के लिए excised,पत्ते एक अक्षुण्ण ^16,32 संयंत्र पर पत्तियों के लिए की तुलना में अलग रंध्रीय प्रतिक्रिया दिखा सकते हैं. हालांकि, कई प्रजातियों के लिए छ अनुमान _है EFM का उपयोग कर मध्यान्ह Ψ _{पत्ती} ¹⁶ (2 छवि) में पत्तियों के लिए एक porometer साथ बरकरार पौधों पर मापा मूल्यों के समान था.

EFM शारीरिक अंतर्दृष्टि, अर्थात् के लिए लागू किया जा सकता है, कश्मीर _{का पत्ता,} संरचना और शारीरिक रचना में अपना आधार है, और पर्यावरणीय कारकों को अपनी प्रतिक्रियाओं की गतिशीलता की जांच. इसके अतिरिक्त, विधि करने के लिए अलग अलग परिस्थितियों में हो प्रजातियों के पौधों की तुलना, या अलग अलग उम्र के, या अलग वातावरण के लिए अनुकूलित करने के लिए विभिन्न प्रजातियों के पौधों की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

पत्ती भेद्यता घटता के निर्माण, एक सूखे के लिए प्रजातियों tolerances के तंत्र में जानकारी हासिल कर सकते हैं. सूखे के दौरान, cavitation और सेल पतन के कुछ की पत्ती जाइलम में होते दिखाया गया है प्रजातियों, और मेज़ोफिल में निर्जलीकरण के दौरान सेल संकोचन भी पानी आंदोलन के प्रभाव (में ¹⁴ समीक्षा) सकता है. भविष्य के अध्ययन कश्मीर _{पत्ती} और रंध्रीय बंद करने की गिरावट ड्राइविंग में इन प्रक्रियाओं में से प्रत्येक के रिश्तेदार महत्व को निर्धारित करने के लिए आवश्यक हो जाएगा.

Irradiance भी एक मजबूत कश्मीर _{पत्ती} और EFM अत्यधिक उच्च विकिरण के तहत मापन के लिए अनुकूल है प्रभावित करने वाले कारक है. विकिरण और सूखे Aquaporins की संयुक्त प्रतिक्रिया ज्यादा ब्याज हासिल करना चाहिए. उच्च विकिरण वृद्धि की अभिव्यक्ति और / या Aquaporins है कि जीवित कोशिकाओं के माध्यम से तेजी से पानी के प्रवाह की अनुमति के सक्रियता की ओर जाता है, कश्मीर _{पत्ती} बढ़ रही है, जबकि कम अभिव्यक्ति और / या Aquaporins की de-activatation निर्जलीकरण होता है, कश्मीर के _{पत्ते को} कम करने. विकिरण और कश्मीर के _{पत्ते} पर पानी की आपूर्ति के संयुक्त प्रभावों ^4,10,16,33 आगे जांच की आवश्यकता है.

तम्बू "> इसके अलावा, प्रजातियों भर में, कश्मीर _{पत्ती} और अपने जोखिम प्रजातियों वितरण से संबंधित प्रकाश पानी और अन्य संसाधनों ^3,13,24 की आपूर्ति करने के लिए सम्मान के साथ किया गया है प्रजाति शुष्क क्षेत्रों से हाइड्रोलिक गिरावट के लिए अधिक से अधिक प्रतिरोध दिखा देते हैं, का सामना करना पड़ रहा है. अधिक नकारात्मक मिट्टी पानी क्षमता, और अधिक नकारात्मक पानी की क्षमता पर एक उच्च कश्मीर _{पत्ती} बनाए रखने के द्वारा, वे उच्च जी _एस बनाए रखने और सीओ _{2 पर} कब्जा ^13,14 संश्लेषण के लिए जारी कर सकते हैं, इस प्रकार, पत्ती हाइड्रोलिक गुणों के अध्ययन के स्तर पर अंतर्दृष्टि प्रदान करता है. सेल, पत्ती, और पूरे संयंत्र और पर्यावरण के लिए अपनी प्रतिक्रियाओं, और सभी पैमाने पर कई महत्वपूर्ण नई खोजों को मिलने की संभावना है.