Granulocyt-beroende autoantikroppar-inducerad hudblåsor
Summary
I djurmodellen som beskrivs i vårt nuvarande arbete, renade IgG-antikroppar mot en sträcka av 200 aminosyror (aa 757-967) av kollagen VII injiceras upprepade gånger i möss återger blåsbildning fenotypen samt histo-och immunopatologiska egenskaper karakteristiska för humant epidermolysis bullosa acquisita (EBA)<sup> 1</sup>.
Abstract
Autoimmuna fenomen förekommer hos friska individer, men när självtolerans misslyckas kan det autoimmuna svaret resultera i särskilda patologi. Enligt Witebsky s postulat, ett av kriterierna för att diagnostisera en sjukdom som autoimmun är reproduktion av sjukdomen i försöksdjur genom passiv överföring av autoantikroppar. För epidermolysis bullosa acquisita (EBA), en prototyp organspecifik autoimmun sjukdom av hud och slemhinnor, har flera experimentella modeller nyligen etablerade. I djurmodellen som beskrivs i vårt nuvarande arbete, renade IgG-antikroppar mot en sträcka av 200 aminosyror (aa 757-967) av kollagen VII injiceras upprepade gånger i möss återger blåsbildning fenotypen samt histo-och immunopatologiska egenskaper karakteristiska för humant EBA 1. Fullt utvecklad utbredd sjukdom ses vanligen 5-6 dagar efter den första injektionen och omfattningen av sjukdomen korrelerar med dosen av den administrerade collagen VII-specifikt IgG. Den vävnadsskada (blåsbildning) i den experimentella EBA beroende på rekrytering och aktivering av granulocyter av vävnadsinrättningar bundna autoantikroppar 2, -4. Därför medger denna modell för dissektion av granulocyt-beroende inflammatorisk väg involverad i autoimmuna vävnadsskada, som modell återger endast den T-cell-oberoende fasen av efferenta autoimmunt svar. Dessutom är dess värde understryks av ett antal studier som visar blister-inducerande potentialen av autoantikroppar in vivo och undersöka mekanismen för blåsbildning i EBA 1,3, -6. Slutligen kommer denna modell kunna underlätta utvecklingen av nya anti-inflammatoriska terapier i autoantikropp-inducerade sjukdomar. Totalt sett är passiv överföring djurmodell av EBA en tillgänglig och lärorik sjukdomar modell och kommer att hjälpa forskare att analysera inte bara EBA patogenes utan att svara grundläggande biologiskt och klinisktväsentliga autoimmunitet frågor.
Protocol
Representative Results
Discussion
Den passiv överföring av autoantikroppar i försöksdjur är en stor strategi för att demonstrera sin patogenitet 7, -12. Djurmodeller erhållits genom denna metod, förutom att vara den indirekta bevis för autoimmunitet 13, tillåter undersökning av den efferenta fasen av patogena mekanismen. Den passiva överföringen modell antikroppsinducerad granulocyt-beroende hudblåsor av epidermolysis bullosa acquisita (EBA) användes för att dissekera mekanismerna för vävnadsskada vid autoimmuna d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Författarna bekräftar stöd av bidrag från Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 och BIOS från den medicinska fakulteten vid Freiburg University (till CS).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker & Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH & Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH & Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
- Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
- Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
- Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
- Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
- Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
- Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
- Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
- Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
- Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
- Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
- Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
- Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
- Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky’s postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
- Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
- Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
- Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
- Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).
