一种微流体装置研究多个不同的菌株
Summary
我们提出了一种简单的方法来施加类似的动态条件下，以多个不同的菌株，能够产生的微流体装置，而不需要一个干净的房间或软光刻。
Abstract
细胞的反应，环境变化的研究，提出了许多实验的挑战：细胞需要将被成像在变化的条件下，往往在一个比较的方式。多孔板经常使用的比较多的不同株或细胞系，但允许有限的环境动态控制。微流体装置，在另一方面，在周围条件允许精致的动态控制，但它是具有挑战性的图像和区分超过在其中少数菌株。在这里，我们描述了一种方法，容易且迅速地制造的微流体装置，其能够应用动态地改变的条件下，在一个通道中的多个不同的酵母菌株。通过简单的装置，该装置的设计和制造，而不需要为软光刻技术。它是由一个Y形的流路连接到的第二层窝藏微孔。该菌株中被放置在单独的微孔，并且确切的相同的动态条件下成像。我们试玩nstrate测量蛋白定位的反应在不同的酵母菌株的养分的变化的脉冲的移动设备的使用。
Introduction
细胞不断动态变化的环境的反应，通过改变他们的新陈代谢，基因表达谱和细胞功能。为了研究这些现象，可以量化这种变化的方法是必要的。一种类型的读出这样的回答是本地化的压力相关的转录因子中的营养应激反应的变化。
微流体装置1已被用来动态操作环境条件的细胞2-4。他们提出活细胞成像的几个优点：细胞的环境，可以精确地控制和动态地改变，细胞可以是活成像在所有时间，包括操纵外部条件期间;及需要最小的试剂量。一个非常简单的微流体设备的设计，允许两个条件之间的交替，是一个Y形的装置2。我们经常使用Y形微流体装置，让在通道中的细胞的动态变化的应用。我们使用该设备遵循荧光标记的压力相关的转录因子在酵母细胞中的定位变化。我们遵循这些变化在不断变化的营养条件下。例如，我们可以提供一个脉冲（或一系列脉冲）的期限内没有葡萄糖培养基含葡萄糖的介质，在一个非常良好的时间分辨率。通常在这样的实验中，一个是兴趣比较不同的细胞株（例如，不同的突变体，或不同的野生分离株）的响应。 Y形通道被限制在每个通道中的一个应变 – 如果使用不止一个应变，有没有简单的方法来区分菌株。为了克服这个问题，可以使用不同的渠道。如果我们要采用相同的动力条件下多株，我们希望与多渠道结合的Y-通道的概念。在实施这一解决方案有两个挑战：这是很难申请吨他相同的条件的所有信道在同一时间，并且有一个几何的，可以安装在一台设备中的Y通道的数目的限制。因此，我们在寻找一种方式来查看动态条件下几株在一个通道中。
在这里，我们描述的两层用于与多株成像动态条件下的相同的在一个通道中的微流体装置。底层由薄的PDMS与一排孔。这层附着的玻璃盖玻片创建的井到其中的将放置在不同的菌株，附着与伴刀豆球蛋白A至玻璃。第二层是一个Y形的微流体装置，使用透明胶带方法5。第二层的孔中放置的菌株后快速地对准并连接到第一个，建立一个信道与包含不同菌株的多口井。这最后的设备允许以下几个品系在一个通道中，所有的菌株被精确地在同一时间进行的相同的条件。在台式仪器上可以完成整个设计和生产过程中，使用简单的方法，没有软光刻技术。
Protocol
Representative Results
Discussion
在本文中，我们提出了一个简单的台式的方法创建一个微流体装置，同时允许以下几个酵母菌株，在动态条件下。经过数株在一个通道中，提供了一个可靠的工具比较多株的单细胞反应的动力学。我们的方法的一个优点是能够用简单的技术来制造的移动设备，而不需要一个干净的房间。事实上，我们也进行了协议跳绳等离子处理操作（步骤2.9和3.6），并取得了良好的效果，所以没有任何等离子设?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
将YG支持IDB的奖学金。 IN是一种的阿龙研究员和教员的爱德蒙Ĵ。 萨夫拉在特拉维夫大学生物信息学中心这项研究是支持的通过ISF授予1499年至1410年。
Materials
| Reagent/Equipment | Company | Catalogue number |
| PDMS- SYLGARD 184 | Dow Corning USA | |
| Vacuum desiccator | Nalgene | 5310-0250 |
| Biopsy punchers | Ted Pella Inc. | Harris Uni-Core 15076 (2 mm), 15074 (1.2 mm) |
| Syringe pumps | Chemyx | Fusion 200 |
| Corona treater | Electro-technic products | BD-20 |
| Tygon tubing | Tygon | S-54-HL |
| Concanavalin-A | Sigma | C7275 |
| Scotch tape | 3M Scotch | Transparent Tape 1/2″ |
References
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