Bioluminescent imagerie bactérienne<em> In Vivo</em
Summary
Cet article décrit l'administration de<em> Lux-étiqueté</em> Les bactéries à des souris et ultérieures<em> In vivo</em> Analyse en utilisant l'imagerie par bioluminescence IVIS.
Abstract
Cette vidéo décrit l'utilisation de l'imagerie du corps entier bioluminesce (BLI) pour l'étude de la traite des bactéries chez des souris vivantes, avec un accent sur l'utilisation de bactéries en thérapie génique et cellulaire du cancer. Les bactéries présentes une classe intéressante de vecteur pour la thérapie du cancer, qui possède une capacité naturelle à se développer de manière préférentielle dans les tumeurs après administration systémique. Bactéries génétiquement pour exprimer le gène lux cassette d'autorisation BLI détection des bactéries et en même temps les sites tumoraux. L'emplacement et les niveaux de bactéries au sein des tumeurs au fil du temps peut être facilement examinés, visualisées en deux ou trois dimensions. La méthode est applicable à une large gamme d'espèces bactériennes et les types de xénogreffes de tumeurs. Cet article décrit le protocole d'analyse des bactéries bioluminescentes dans les souris porteuses de tumeurs sous-cutanées. Visualisation des bactéries commensales dans le tractus gastro-intestinal (TGI) par BLI est également décrit. Ce puissant et pas cher, en temps réel représentation stratégie d'imageriets une méthode idéale pour l'étude des bactéries in vivo dans le cadre de la recherche sur le cancer, en particulier la thérapie génique et les maladies infectieuses. Cette vidéo décrit la procédure pour l'étude de lux-étiqueté E. coli dans des souris vivantes, ce qui démontre la lecture spatiale et temporelle BLI réalisables en utilisant le système IVIS.
Protocol
Discussion
Dans le cadre de la thérapie génique, l'utilisation d'agents biologiques pour la livraison de gènes thérapeutiques aux patients a montré des résultats prometteurs 3-5. Comme les virus, les propriétés biologiques innés de bactéries permettre la délivrance d'ADN efficace de cellules ou de tissus, en particulier dans le cadre du cancer. Il a été montré que les bactéries sont naturellement capables de ralliement pour des tumeurs lorsqu'elles sont administrés par voie systémique r?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier un soutien pertinent à ce manuscrit de la Commission européenne du septième programme-cadre (PIOF-GA-2009-255466) et le Conseil de la santé irlandais de recherche (HRA_POR/2010/138). Lux-étiqueté E. coli était un cadeau aimable de M. Cormac Gahan, University College Cork.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| 4T1 cell line | ATCC | CRL-2539 | Syngeneic breast cancer model derived from a spontaneously arising BALB/c mammary tumor |
| DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium |
| PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Phosphate Buffered Saline |
| Xenogen IVIS | Caliper Life Sciences | IVIS 100 for 2D imaging; IVIS Spectrum for 3D. | |
| Luria Broth Miller (LB) | Sigma-Aldrich | L2542 | Growth medium for E. coli |
| Erythromycin | Sigma-Aldrich | E5389 | Antibiotic |
| Streptomycin | Sigma-Aldrich | S9137 | Antibiotic |
| MF1nu/nu mice | Harlan (UK) | 069(nu)/070(nu/+) | Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu |
| Balb/c mice | Harlan (UK) | 066 | Haplotype: H-2d |
| Gavage needle | Vet-tech Solutions (UK) | DE009 | 22G x 38mm straight gavage needle |
| Syringe for IV injection | BD BioSciences | 309309 – 1 ml | Insulin syringe with 28 G x ½ inch micro-fine IV needle. |
| Syringe for tumor inoculation | Braun | 9161376V | Omnifix 26 G x ½ inch needle |
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