عزل الخلايا الصباغية تشبه الأولية من القلب ماوس
Summary
في هذا البروتوكول، ث ه التعرف على السكان رواية من خلايا تشبه الخلايا الصباغية (المعروف أيضا باسم الخلايا الصباغية القلب) في قلوب الفئران والبشر التي تساهم في عدم انتظام ضربات القلب الأذيني يتسبب في الفئران.
Abstract
حددنا عدد سكانها رواية من خلايا تشبه الخلايا الصباغية (المعروف أيضا باسم الخلايا الصباغية القلب) في قلوب الفئران والبشر التي تساهم في عدم انتظام ضربات القلب الأذيني المشغلات في الفئران. للتحقيق في الخواص الكهربائية والبيولوجية للخلايا الميلانين القلب وضعنا الداخلي لعزلهم من قلوب الماوس أننا المستمدة من تلك المصممة لعزل العضلية الفئران حديثي الولادة. من أجل الحصول على الخلايا الصباغية القلب صحية مناسبة لالمشبك التصحيح أكثر اتساعا أو الدراسات البيوكيميائية، وضعنا إجراء المكرر لعزل وطلاء الخلايا الصباغية القلب بناء على تلك المصممة أصلا لعزل الخلايا الصباغية الجلدية. ويتجلى هذا الإجراء المكرر في هذا الاستعراض، وتنتج أعدادا أكبر من خلايا تشبه الخلايا الصباغية الصحية التي يمكن مطلية حيث يبلغ عدد سكانها النقي أو مع العضلية.
Introduction
حددنا مؤخرا سكان الخلية رواية في قلب الفئران والبشر التي تعبر عن الانزيمات الميلانين التوليف وشكليا تشبه الخلايا الصباغية الجلدية. كنا نسميها "الخلايا الصباغية القلب" وجدت هذه الخلايا كانت موجودة في مواقع تشريحية من عدم انتظام ضربات القلب الأذيني مشغلات التي غالبا ما تنشأ في البشر. وجدنا أيضا تساهم الخلايا الصباغية إلى عدم انتظام ضربات القلب الأذيني في الفئران مع حذف سلالة الجرثومية من محول جيب التمام. وتوزع الخلايا الصباغية القلب قليلة في جميع أنحاء الأذين الماوس حيث أنهم يشكلون أقل من 0.1٪ من مجموع خلايا الأذيني. للتحقيق في الخواص الكهربائية والبيولوجية للخلايا الميلانين القلب وضعنا الداخلي لعزلهم من القلب الماوس باستخدام علامات محددة الصباغية جنة المساواة العرقية، محرض. وقد وضعت لدينا الإجراء الأولي من تلك المستخدمة لعزل العضلية الفئران حديثي الولادة وأسفرت عن أعداد صغيرة جدا من الخلايا مناسبة للتسجيلات المشبك التصحيح أو تحليل PCR. ومع ذلك، من أجل تحسين شفاءعشر وبقاء الخلايا الصباغية القلب، لأكثر تعمقا تحليل الكهربية أو الدراسات البيوكيميائية، وضعنا إجراء المكرر من تلك المصممة لعزل الخلايا الصباغية الجلدية. الإجراء الموضح وأظهرت في هذا الاستعراض في الاستفادة من إنتاج الخلايا الصباغية صحة القلب التي يمكن مطلية حيث يبلغ عدد سكانها النقي أو مع العضلية.
Protocol
Representative Results
Discussion
الخلايا الصباغية القلب موجودة في مواقع التشريحية داخل القلب التي تعطي عادة يؤدي إلى عدم انتظام ضربات القلب الأذيني المشغلات. وتشمل هذه المناطق الأوردة الرئوية، وبالطوق الأذينية البطينية، والأذين الأيسر الخلفي والثقبة البيضوية (الشكل 4). لفهم الدور الذي تق?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 HL105734 إلى VVPMDL ويدعم، في جزء منه، من قبل المعاهد الوطنية للبحوث الصحية الوظيفي جائزة K08 HL094748. VVP هو باحث المبتكر من جمعية القلب الأميركية بدعم من منحة 11IRG900384.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
| DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
| Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
| Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
| Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
| Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
| Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
| Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |
References
- Hornyak, T. J., et al. Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation. Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).
- Yonetani, S., et al. In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle. J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).
- Levin, M. D., et al. Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers. J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).
- Patel, V. V. Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation. Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).
- Sviderskaya, E. V., et al. Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells. FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).
- Sviderskaya, E. V., et al. P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation. J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).
- Cook, A. L., et al. Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3. J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).
- Fang, D., et al. Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells. Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).
- Brito, F. C., et al. Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart. Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).
- Yajima, I., et al. The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color. Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).
