В этом протоколе, ж е обнаружен новый население меланоцитов-подобных клеток (также известный как сердечные меланоцитов) в сердцах мышей и людей, которые способствуют мерцательная аритмия вызывает у мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Изоляция первичных меланоцитов-подобных клеток из Сердца Mouse
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Мы определили новый население меланоцитов-подобных клеток (также известный как сердечные меланоцитов) в сердцах мышей и людей, которые способствуют предсердий триггеров аритмии у мышей. Для исследования электрических и биологические свойства сердечных меланоцитов мы разработали процедуру, чтобы изолировать их от мыши сердцах, что мы, полученных от тех, предназначены для защиты новорожденных мышиных кардиомиоцитов. Для того чтобы получить здоровые сердечные меланоциты, пригодные для более широкого зажима патч или биохимических исследований, мы разработали изысканный процедуру выделения и покрытие сердечные меланоциты, основанные на тех, которые изначально предназначены для защиты кожных меланоцитов. Изысканный процедура демонстрируется в данном обзоре и производит большее количество здоровых меланоцитов-подобных клеток, которые могут быть покрыты как чисто населения или с кардиомиоцитов.
Введение
Мы недавно обнаружен новый популяции клеток в сердце мышей и людей, которые выражают меланин-синтеза ферментов и морфологически напоминают кожные меланоциты. Мы назвали "сердечные меланоциты 'Эти клетки и обнаружили, что они присутствуют в анатомических мест, откуда мерцательная аритмия триггеры часто происходят в организме человека. Мы также обнаружили, сердечные меланоциты способствовать предсердий аритмий у мышей с зародышевой линии удаления DCT. Сердечные меланоциты редко распределяется по всему мыши атриум, где они составляют менее 0,1% всех предсердных клеток. Для исследования электрических и биологические свойства сердечных меланоцитов мы разработали проце....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1 Подготовка необходимых решений и оборудования
- Во-первых, стерилизации хирургических инструментов (прямые щипцы форма, пинцетов формы, прямые ножницы формы и изогнутые ножницы формы) в автоклаве их в течение 15 мин. при 121 ° С. Подготовьте 2 комплекта инструментов, где один набор используется для рассечения из сердца и другой набор будет использоваться для измельчения составляющих ткань.
- Растворите 1 пакетик MCDB153 питательных сред в 900 мл стерилизованной, фильтрованной воды и помешивайте, пока порошок не растворится. Добавить 1,2 г бикарбоната натрия, или 15,7 мл раствора бикарбоната натрия [7,5% вес / объем], на каждый литр конечного объема....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Протокол, описанный в этой статье является улучшенной техникой по сравнению с той, которую мы ранее опубликованной выделения сердечные меланоцитов из мышиного сердца. Эта процедура использует использование флуоресцентных маркеров, управляемых синтеза меланина фермента конкретных Cre-рекомбиназы маркировать сердечные меланоцитстимулирующий как клетки. Важно использовать маркер для обозначения сердечные меланоцитов при работе с Свежевыделенные эмбриональных или неонатальных клеток, так как морфологические различия, которы.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Сердечные меланоциты находятся в анатомических местах в сердце, которые обычно приводят к мерцательной аритмии триггеров. К таким регионам относятся легочные вены, атриовентрикулярным кольцо, заднюю левого предсердия и овальное отверстие (рисунок 4). Чтобы понять роль этих клеток играть в аритмии, мы разрабатываем методы, чтобы выделить их и изучить их физиологию. Тем не менее, мы признали, что повышение эту технику, чтобы получить здоровые и большие количества сердечных меланоцитов позволит дальнейшие .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У нас нет ничего раскрывать.
Благодарности
Работа выполнена при поддержке Национального института награждения Здоровье R01 HL105734 к VVPMDL поддерживается, в частности, Национального института исследований в области здравоохранения Карьера премии K08 HL094748. VVP является инновационный научный сотрудник Американской ассоциации сердца поддержке гранта 11IRG900384.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Растворить в воде |
| DPBS, без кальция и магния | Invitrogen | 14190136 | Исх. конц.: 1x Рабочая конц.: 1x |
| Пенициллин-стрептомицин | Invitrogen | 15140163 | Исх. конц.: 100x Рабочая конц.: 1x |
| Фетальная бычья сыворотка | Life Technology | Certified | Рабочая конц.: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | Растворить в DMSO Исх. конц.: 3.2 μM Рабочая конц.: 32 nM |
| Трансферрин | Sigma-Aldrich | T8158 | Растворить в DPBS Исх. конц.: 0.1 mg/ml Рабочая конц.: 1 μg/ml |
| Дибутирилциклический АМФ | Sigma-Aldrich | D0627 | Растворить в DPBS Исх. конц.: 0.5 mM Рабочая конц.: 5 μM |
| Инсулин | Sigma-Aldrich | I6634 | Растворить в 10 mM уксусной кислоте Исх. конц.: 1 mg/ml Рабочая конц.: 5 μg/ml |
| Основной FGF | BD Biosciences | 354060 | Растворить в воде Исх. конц.: 4 ng/μl Рабочая конц.: 4 ng/ml |
Ссылки
- Hornyak, T. J., et al. Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation. Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).
- Yonetani, S., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
