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Articolo metodologico

Ampio campo di microscopia a fluorescenza e citometria di flusso Imaging fluorescente su un telefono cellulare

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DOI:

10.3791/50451

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11 aprile 2013

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In questo articolo

Sommario

Esaminiamo i nostri risultati recenti sull'integrazione di microscopia a fluorescenza e di imaging strumenti di citometria a flusso su un telefono cellulare utilizzando compatte e convenienti opto-fluidici allegati. Questi cellulare basato micro-dispositivi di analisi può essere utile per l'analisi citometrica, ad esempio per eseguire operazioni di conteggio cellulari diversi e per high throughput screening di campioni di acqua, ad esempio in impostazioni delle risorse limitate.

Abstract

Microscopia a fluorescenza e citometria a flusso sono ampiamente utilizzati strumenti nella ricerca biomedica e diagnosi clinica. Tuttavia questi dispositivi sono in generale relativamente ingombranti e costosi, rendendoli meno efficaci nelle impostazioni delle risorse limitate. Per far fronte a queste limitazioni potenzialmente, abbiamo recentemente dimostrato l'integrazione di ampio campo di microscopia a fluorescenza e di imaging strumenti di citometria a flusso su telefoni cellulari utilizzando compatto, leggero, e costo-efficacia opto-fluidici allegati. Nel nostro disegno citometria di flusso, le cellule sono contrassegnati in modo fluorescente lavata attraverso un canale microfluidico che è posizionata sopra l'esistente cellulare telecamera. Alimentati a batteria diodi emettitori di luce (LED) sono di testa accoppiata al lato di questo chip microfluidica, che agisce efficacemente come una guida d'onda multimodale lastra, dove viene guidato la luce di eccitazione per eccitare uniformemente gli obiettivi fluorescenti. Il telefono cellulare fotocamera registra un film lasso di tempo di cellule fluorescenti fluisce attraversoil canale microfluidico, dove vengono elaborate le cornici digitali di questo film per contare il numero di cellule marcate nella soluzione bersaglio di interesse. Utilizzando un simile opto-fluidico disegno, possiamo anche un'immagine queste cellule contrassegnati in modo fluorescente in modalità statica es intramezzando particelle fluorescenti tra due vetrini e catturare le loro immagini fluorescenti utilizzando il telefono cellulare fotocamera, che possono raggiungere una risoluzione spaziale di esempio ~ 10 micron su un grande campo di vista di ~ 81 mm 2. Questo telefono cellulare basato fluorescente citofluorimetria imaging e microscopia piattaforma potrebbe essere utile specialmente in impostazioni di risorse limitate, per esempio il conteggio delle cellule T CD4 + verso il monitoraggio dei pazienti HIV + o per il rilevamento di acqua da parassiti nell'acqua potabile.

Introduzione

Microscopia e citometria a flusso sono ampiamente utilizzate tecniche di 1-12 nella ricerca biomedica e scientifica, nonché la diagnosi clinica per il conteggio e la caratterizzazione di vari tipi di cellule. Tuttavia, microscopi convenzionali e flusso-citometria strumenti sono relativamente complesse e costose, che limita il loro uso principalmente alla laboratori centrali consolidate. Recentemente abbiamo sviluppato un citometria compatto e leggero dispositivo di imaging a fluorescenza e microscopia integrato su un telefono cellulare, che mostra la promessa 13,14 a costi contenuti tradurre microscopia a fluorescenza, citometria a flusso e le r....

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Protocollo

In questa sezione, si introducono i protocolli sperimentali per il nostro cellulare in base a grande campo microscopia a fluorescenza 13 e opto-fluidici piattaforma di citometria di imaging 14. Useremo perline fluorescenti e contrassegnati in modo fluorescente le cellule bianche del sangue per testare queste piattaforme di imaging.

A. Preparazione del telefono cellulare Basato Wide-field microscopio a fluorescenza e Opto-fluidico citometro a flusso Imaging

Il telefono cellulare in base a grande campo microscopio a fluorescenza o citometria a flusso è costituito da due parti principali: un te....

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Risultati

Con il nostro opto-fluidico di pompaggio / eccitazione schema (figure 1C e 1D), le cellule marcate fluorescente può essere continuamente consegnato nel canale microfluidica utilizzando una pompa a siringa, mentre il telefono cellulare fotocamera registra una time-lapse film fluorescente microscopica delle cellule che scorre. Questi film fluorescenti possono essere rapidamente analizzati utilizzando contorno rilevamento e algoritmi di monitoraggio 14,15 per determinare automat.......

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Discussione

Abbiamo presentato i nostri risultati recenti sul telefono cellulare basato ampio campo microscopia a fluorescenza e opto-fluidici citometria a flusso di immagini utilizzando leggeri e compatti opto-fluidici allegati a telefoni cellulari fotocamere. Grazie a questa tecnologia piattaforma abbiamo ripreso oggetti fluorescenti incluse micro-particelle ed etichettati globuli bianchi in campioni di sangue intero. Pertanto, questo compatto ed economico cellulare set di strumenti basati imaging a fluorescenza può essere utile .......

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Dichiarazioni

Dr. Ozcan è il fondatore di una start-up che si propone di commercializzare l'imaging di calcolo e strumenti di microscopia.

Ringraziamenti

A. Ozcan ringrazia il sostegno del Premio Presidenziale per Early Career Scientists and Engineers (PECASE), Army Research Office (ARO) Young Investigator Award, National Science Foundation (NSF) premio alla carriera, Office of Naval Research (ONR) Young Investigator Award e National Institutes of Health (NIH) Innovator Award Nuovo direttore DP2OD006427 presso l'Ufficio del Direttore, National Institutes of Health.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Telefono cellulareSonySony Ericsson Aino
Lente piano-convessaEdmund Optics# NT45-302
Lente asfericaThorlab# C230TME-A
FiltroEdmund Optics#NT54-46
LED bluDigikey#365-1201-ND
BatteriaDigikey#P032-ND
Provetta in polistireneFisher Scientific#05-408-129
Tampone per lisi di globuli rossiSigma AldrichR7757
SYLGARD 184 KIT DI ELASTOMERI SILICONICIDow Corning
Perline fluorescenti rosse (10 μ m)Life Technologies#F8834
Perle fluorescenti verdi (10 μ m)Life Technologies#F8836
Etichettatura fluorescente dell'acido nucleico SYTO16Life Technologies# S7578

Riferimenti

  1. Sklar, L. A. Flow Cytometry for BioTechnology. , Oxford University Press Inc. (2005).
  2. Nunez, R. Flow cytometry for research scientists: principle and applications. , Horizon Press. Wymondham, UK. (2001).
  3. Mertz, J.

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Ristampe e permessi

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