胫骨神经切断术 - 一个标准化的模型失神经诱导小鼠骨骼肌
Summary
胫神经横断模型骨骼肌萎缩是一种耐受性良好，验证和可重复的模型。中描述和演示C57Black6小鼠模型手术协议。
Abstract
胫神经横断模型在啮齿类动物中去神经引起的骨骼肌萎缩是一种耐受性良好，验证和可重复的模型。虽然最初的开发中广泛使用，由于其较大规模的大鼠，小鼠的胫神经，留下完好的坐骨神经腓神经和腓肠神经分支，从而保持足够大，它可以很容易被操纵，无论是挤压或横断他们的目标肌肉。因此，这种模式提供的优势诱导坐骨神经横断模型少的发病率和障碍比下地，还允许调查研究生理，细胞和分子生物学机制的调节肌肉萎缩的过程中，在遗传工程小鼠。胫神经建筑材料的腓肠肌，比目鱼肌和跖肌，所以它的横断允许失神经骨骼肌快肌II型纤维和/或慢肌型组成的研究，我纤维。在这里，我们展示了胫神经横断模型在C57Black6鼠标。我们评估腓肠肌的萎缩，作为一个有代表性的肌肉，在1，2，和4周后去神经通过测量肌肉重量和纤维类型特定的横截面面积，对石蜡包埋的组织切片进行免疫染色快肌的肌球蛋白。
Introduction
骨骼肌失神经支配，由于外伤性周围神经损伤，疾病或药物干预，肌肉自愿收缩功能在眼前亏的结果。伴随肌肉开始萎缩，这种萎缩是可逆的，如果及时，优质的神经支配发生1,2。在没有神经支配，肌纤维萎缩的进展，在肌肉与发生不可逆的生物变化肌肉纤维化及肌纤维死亡。在这里，我们展示了胫神经横断模型，模型引起的失神经支配骨骼肌萎缩和纤维化，在小鼠体内。这种模式使科学家研究背后体内肌肉萎缩，腓肠肌和比目鱼肌的生理，细胞和分子生物学机制。虽然历史上主要用于大鼠，更近的应用，让这个模型，基因敲除和转基因小鼠系专门调查，以评估它们的作用特定的蛋白质（S）的感应，开发和维护，或者决议，肌肉萎缩及纤维化体内的兴趣。
胫神经是一个混合的运动感觉的啮齿类动物的后肢，外周神经和是三个终端坐骨神经分支之一。胫神经横断denervates腓肠肌，比目鱼肌和跖肌（三个小深屈肌的脚，包括胫骨后肌，趾长屈肌和屈hallicus的长肌），是一个标准化和验证模型大鼠3,4 。序列的时间点，可以很容易地解剖腓肠肌和比目鱼肌交的胫骨神经切断术，评估肌肉组织学和肌纤维形态测量或闪存冻结肌肉RNA和蛋白质的，目的是研究提取固定和处理，例如，调节肌肉萎缩的细胞信号网络。遗传算法strocnemius肌肉的混合纤维型肌（I型和II型，虽然主要是II型）和比目鱼肌I型纤维组成的相当大的比例，从而提供了快速和慢速肌5,6评估。胫神经横断模型适用于研究失神经性肌肉萎缩的过程中，短期（日）7和长期（周月）4,8。
在坐骨神经横断模型（失神经性肌肉萎缩的第二个模型常用于啮齿动物），胫骨神经切断术诱导少在动物发病率，使其成为一个更具吸引力的模型。坐骨神经横断denervates腿部（膝盖以下）和脚的肌肉，损害动物的走动能力2，而胫神经横断离开坐骨神经腓神经和腓肠神经分支不变，从而保持他们的目标肌肉和感官领土的。鼠标是无法跖屈或脚倒置，但能够轻易走动，体重承担同样的两后肢，从而大大减少发病率的模型。步态分析研究，评估步行模式已在胫骨和坐骨神经损伤的大鼠进行胫骨受伤9,10证明足迹和负重保存较好。此外，在胫骨神经横断模型，腓总神经可以在稍后的时间点被动员，迟发神经再生和转移作为源的研究设计，如果需要3。相比之下，延迟神经再生坐骨神经横断模型需要使用的神经移植到坐骨神经赤字，模型的技术难度非常显着增加，并限制其使用，熟练的外科医生。
虽然胫神经横断模型Requires熟悉无菌手术技术在动物手术操作，无论是胫神经和支配小腿肌肉很容易访问和操纵识别，从而使个人谁是不是外科医生，或具有丰富的经验与动物外科手术，可以很容易地掌握这个模型。
Protocol
Representative Results
Discussion
去神经引起的骨骼肌萎缩胫神经横断模型大鼠模型是一种常用的和很好的验证。我们已经适应了这个模型在小鼠中的使用，这使得研究者利用遗传工程小鼠的存在，并在体内研究的过程中，肌肉萎缩，肌肉质量7,8的调节至关重要的蛋白质在没有。腓肠肌和比目鱼肌，神经在这个模型中，能够容易且迅速，解剖以最小的处理能力，从而提供优良的品质mRNA和蛋白用于后续的分子分析。?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到CIHR神经肌肉研究合作伙伴（JNM – 90959;到JAEB）的补助。
Materials
| Reagents and Materials | |||
| 10-0 Nylon suture | Ethicon | 2850G | |
| 5-0 Vicryl suture | Ethicon | J553G | |
| Equipment | |||
| Spring microdissecting scissors | Fine Surgical Tools | 15021-15 | |
| Ultra fine forceps | Fine Surgical Tools | 11370-40 | |
| Non locking micro needle holder (driver) | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Spring retractor | Fine Surgical Tools | 17000-02 |
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