Procedures voor het identificeren van Besmettelijke Prions na passage door het spijsverteringsstelsel van een vogelsoort

Samenvatting

Aaseters hebben potentieel om besmettelijke overdraagbare spongiforme encefalopathie prionen translokeren in hun uitwerpselen te ziektevrije gebieden. We detail methoden die worden gebruikt om te bepalen of de muis aangepast scrapie prionen infectieus blijven na passage al is het spijsverteringskanaal van de Amerikaanse kraaien (Corvus brachyrhynchos), een gemeenschappelijke consument van dode dieren.

Samenvatting

Infectieuze prion (PrP ^Res) materiaal is waarschijnlijk de oorzaak van fatale, neurodegeneratieve overdraagbare spongiforme encefalopathieën (TSE) ziekten ^1. Overdracht van TSE ziekten, zoals chronische wasting disease (CWD), wordt geacht te zijn van dier tot dier ^2,3 en uit omgevingsbronnen ^4-6. Aaseters en carnivoren hebben potentieel om PrP ^Res materiaal translocatie door de consumptie en de uitscheiding van CWD-besmette kadavers. Recent werk heeft passage van PrP ^Res materiaal gedocumenteerd door het spijsverteringsstelsel van de Amerikaanse kraaien (Corvus brachyrhynchos), een gemeenschappelijke Noord-Amerikaanse scavenger ^7.

We beschrijven procedures die gebruikt worden om de doorgang van PrP ^Res materiaal documenteren door Amerikaanse kraaien. Kraaien werden gavaged met RML-stam-muis aangepast scrapie en hun uitwerpselen werden verzameld 4 uur na maagsonde. Crow ontlasting werden vervolgens samengevoegd en intraperitoneaal geïnjecteerdC57BL / 6 muizen. Muizen werden dagelijks gecontroleerd totdat ze uitgedrukt klinische symptomen van muis scrapie en werden daarna gedood. Asymptomatische muizen werden gevolgd tot 365 dagen na de inenting. Western blot analyse werd uitgevoerd om ziektestatus bevestigen. Resultaten bleek dat prionen infectieus blijven na een reis door het spijsverteringsstelsel van kraaien en aanwezig in de ontlasting zijn, waardoor de ziekte in de test muizen.

Inleiding

Overdraagbare spongiforme encefalopathieën (TSE) zijn fatale besmettelijke neurodegeneratieve aandoeningen die dieren beïnvloeden, huisdieren en mensen. De ziekteverwekker van TSE-ziekten lijkt verkeerd gevouwen of pathogene isovormen (PrP ^Res) van prion-eiwitten ¹ zijn. Dierlijke TSE-ziekten omvatten Chronic Wasting Disease (CWD) bij muildierhert (Odocoileus hemionus), wit-staart hert (virginianus), elanden (Cervus elaphus), en elanden (Alces Alces), scrapie bij schapen en geiten, boviene spongiforme encefalopathie ( BSE) in vee; overdraagbare encefalopathie van de nerts in gekweekte nertsen; katachtige spong....

Protocol

Ons protocol is een bewerking van degene die we eerder gepubliceerde ^7. Alle procedures waarbij dieren werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van het Amerikaanse ministerie van Landbouw (USDA), Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), Wildlife Services (WS), National Wildlife Research Center (NWRC).

1. Kraai Gavaging

1. Schatten doorlooptijd van 'pseudo hersenmateriaal' door het spijsverteringskanaal van de Amerikaanse kraaien.
   1. Meng 5 ml gekookt en roerei hele eieren met blauwe kleurstof en maagsonde 1 kraai met een 2 in maagsonde naald (figuur 1).

Resultaten

De procedures die aantonen dat het spijsverteringsstelsel kraaien PrP ^Res infectiviteit 4 uur niet elimineert na orale gavage van scrapie hersenhomogenaat ^7. Alle twintig kraaien die werden gavaged met PrP ^Res materiaal vervolgens overgebracht PrP ^Res materiaal via ontlasting te muizen. Zieke muizen werden geïdentificeerd door manifestatie van klinische muis scrapie symptomen en bevestiging ziekte werd voltooid door Western blotanalyse.

Onderzoek v.......

Discussie

We tonen een procedure om doorgang van PrP ^Res materiaal te documenteren door het spijsverteringsstelsel van kraaien. We gebruikten gebruikelijke werkwijzen om te bepalen of kraaien de mogelijkheid om PrP ^Res materiaal verplaatsen naar ziektevrije geografische gebieden. Anderen hebben weerstand van PrP ^Res geëvalueerd om ^19-21 en knaagdieren ^22,23 spijsverteringssappen, die beide niet in geslaagd om het te elimineren herkauwers. Toekomstige toepassing van deze techn.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
RML Chandler strain mouse-adapted scrapie	Rocky Mountain Laboratories
RC57BL/6 muizen	Hilltop Lab Animals
Amerikaanse kraaien	in het wild gevangen
Pen/Strep	Invitrogen	15140-122
Fosfaat gebufferde Saline	Invitrogen	70011-044
Sonicator	Misonix
Proteinase-K oplossing	Roche	3115887001
Loading buffer	Invitrogen	NP0007 en 0009
Bis-tris SDS PAGE 12% gel	Invitrogen	NP0342
Immobilon PVDF membraan	Millipore	1SEQ00010
Tween 20	Sigma Aldrich	P2287
Bullet blender homogenisator	Braintree Scientific	BBX24B
2,3 mm Zirconia/silica kralen	BioSpec Products	11079125Z
Bar224 anti-PrP monoklonaal antilichaam	Cayman Chemical	10009035
Superblock	Thermo Scientific	37517
chemiluminescent substraat	Millipore	WBKLS0500
G-box gel documentatie systeem	Syngene