अस्थि मैक्रोफेज उत्पादन मज्जा व्युत्पन्न
Summary
मैक्रोफेज लंबे सहज और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का एक महत्वपूर्ण घटक के रूप में मान्यता दी गई है. मैक्रोफेज और रोगाणुओं के बीच बातचीत की, विकासवादी आनुवंशिक, और जैव रासायनिक पहलुओं से संबंधित ज्ञान के हाल के विस्फोट मैक्रोफेज के लिए वैज्ञानिक ध्यान नए सिरे से किया गया है. यह लेख माउस अस्थि मज्जा से मैक्रोफेज अंतर करने के लिए एक विधि का वर्णन करता है.
Abstract
मैक्रोफेज सहज और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के महत्वपूर्ण घटक हैं, और वे क्योंकि उनके शक्तिशाली microbicidal गतिविधियों का विदेशी आक्रमणकारियों के खिलाफ रक्षा की पहली पंक्ति रहे हैं. मैक्रोफेज व्यापक रूप से पूरे शरीर में वितरित और lymphoid अंगों में मौजूद हैं, यकृत, फेफड़े, जठरांत्र संबंधी मार्ग, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र, अस्थि, और त्वचा. क्योंकि उनके पुनर्विभाजन की, वे शारीरिक और रोग प्रक्रियाओं की एक विस्तृत श्रृंखला में भाग लेते हैं. मैक्रोफेज microenvironmental परिवर्तन को पहचान करने और ऊतक homeostasis को बनाए रखने में सक्षम हैं कि अत्यधिक बहुमुखी कोशिकाओं रहे हैं. कई रोगजनकों, जीवित रहने में दोहराने, और संक्रमित मनुष्यों और पशुओं दोनों और पूरे शरीर में प्रचार करने के लिए ट्रोजन घोड़े के रूप में मैक्रोफेज उपयोग करने के लिए तंत्र विकसित किया है. मेजबान रोगज़नक़ बातचीत की, विकासवादी आनुवंशिक, और जैव रासायनिक पहलुओं में रुचि के हाल के विस्फोट मैक्रोफेज के बारे में वैज्ञानिक ध्यान नए सिरे से किया गया है. यहाँ, हम एक वर्णनमेजबान रोगज़नक़ बातचीत का अध्ययन करने के साथ ही अन्य प्रक्रियाओं के लिए मैक्रोफेज की बड़ी संख्या प्रदान करेगा कि murine अस्थि मज्जा से मैक्रोफेज अलग करने और खेती करने के लिए प्रक्रिया.
Introduction
बृहतभक्षककोशिका समारोह का एक महत्वपूर्ण पहलू सहज और प्रतिरक्षा अनुकूली में उनकी भूमिका है. क्योंकि निष्क्रिय कण, जीवाणु या परजीवी phagocytose करने के लिए उनकी क्षमता के मैक्रोफेज विदेशी आक्रमणकारियों के खिलाफ रक्षा की पहली पंक्ति रहे हैं. एक बार भाँति, रोगाणुओं phagolysosomes भीतर अपमानित कर रहे हैं. मैक्रोफेज भी इस तरह के टी lymphocytes के रूप में अन्य प्रतिरक्षा कोशिकाओं पर भर्ती के लिए संकेत है और वर्तमान एंटीजन भेजें. मैक्रोफेज monocytes से निकाली गई है. Monocytes माइलॉयड स्टेम सेल से अस्थि मज्जा में पैदा होती है और वे मैक्रोफेज में अंतर जहां परिधीय रक्त और विभिन्न ऊतकों की ओर पलायन. यह एक स्वस्थ वयस्क माउस विभिन्न अंगों और ऊतकों (1 टेबल) 1,2 में शरीर भर में वितरित कर रहे हैं कि लगभग 10 8 मैक्रोफेज होता है कि अनुमान है. मैक्रोफेज क्योंकि उनके microenvironment 3,4 के लिए अनुकूल करने की क्षमता के महान प्ररूपी और कार्यात्मक विविधता प्रदर्शित करते हैं. सबसे महत्वपूर्ण macropहेग संपत्ति रोगाणुओं phagocytose और उन्हें नष्ट करने के लिए अपनी क्षमता से परिभाषित किया गया है जो उनके microbicidal गतिविधि है. phagocytic प्रतिक्रिया माइक्रोबियल संपर्क द्वारा प्रेरित कर रहे हैं कि जटिल नेटवर्क संकेतन की सक्रियता से परिभाषित किया गया है, इस प्रकार, मैक्रोफेज विविध उत्तेजनाओं के जवाब में उचित रूप से जीन अभिव्यक्ति मिलाना. Phagocytosis के बाद, रोगाणुओं phagolysosome नामक संरचना में समाप्त हो जाते हैं, लेकिन, कई रोगजनक रोगाणुओं मैक्रोफेज 5 की microbicidal समारोह नाश करने के लिए रणनीति विकसित किया है. विभिन्न माइक्रोबियल प्रजातियों द्वारा उपयोग किया जाता है कि तोड़फोड़ तंत्र की विविधता phagocytic प्रक्रिया 6 की जटिलता और phagolysosome जीवजनन के लिए एक वसीयतनामा है. संक्रामक रोगों के प्रमुख मानव स्वास्थ्य समस्याएं हैं, और कई तंत्र और अणुओं बृहतभक्षककोशिका रोगाणुरोधी गतिविधियों में भाग लेते हैं. इसके अलावा, रोगाणुओं द्वारा अपहरण कर रहे हैं कि microbicidal गुण का लक्ष्य अनजान रहते हैं, इस प्रकार, एक ई हैमैक्रोफेज के बारे में वैज्ञानिक ध्यान नए सिरे से किया गया है कि मेजबान रोगज़नक़ बातचीत की, विकासवादी आनुवंशिक, और जैव रासायनिक पहलुओं में ब्याज की xplosion. वर्तमान में, क्षेत्र में अनुसंधान के बहुमत phagocytic गतिविधि, साइटोकिन्स उत्पादन और oxidative फट के नियमन में प्राथमिक मैक्रोफेज से अलग जो मैक्रोफेज सेल लाइनों, पर किया जाता है. इसके अलावा, वे माइक्रोस्कोपी के लिए कम उपयुक्त हैं. बातचीत मैक्रोफेज-रोगजनकों की जांच करने के लिए इसे और अधिक शारीरिक विशेषताएं जो प्रदर्शन ऐसे अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज (BMDMs) के रूप में प्राथमिक मैक्रोफेज, उपयोग करने के लिए सिफारिश की है. इन मैक्रोफेज ट्रांसजेनिक चूहों से सीधे पृथक और, इस तरह के lentiviral अभिकर्मक के रूप में उपन्यास प्रौद्योगिकियों की उपलब्धता के साथ किया जा सकता है, क्योंकि इसके अलावा, यह आनुवंशिक रूप से संशोधित BMDMs पर काम करने के लिए संभव है, उनके जीन की अभिव्यक्ति प्रोफाइल जीन overexpression या शाही सेना के हस्तक्षेप से बदला जा सकता है. यहाँ, हम murine अस्थि एम अंतर करने के लिए एक प्रक्रिया का वर्णनकार्यात्मक ऐसे प्रोटिओमिक्स 7, transcriptomics 8 के रूप में विश्लेषित करती विभिन्न के लिए 7 दिनों में मैक्रोफेज की बड़ी संख्या प्रदान करेगा कि मैक्रोफेज में तीर, intracellular तस्करी 9, गतिशील पढ़ाई 10, आनुवंशिक स्क्रीन (आरएनएआई) और 11 स्क्रीनिंग दवा पढ़ाई.
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ बताया प्रोटोकॉल BMDMs की बड़ी संख्या का उत्पादन करने के लिए एक विधि का विवरण. BMDM प्राथमिक कोशिकाओं रहे हैं और अपरिपक्व हैं जो बृहतभक्षककोशिका सेल लाइनों, के विपरीत, परिपक्व क्योंकि वहाँ जैविक समारोह ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम CNRS (pics जैसे 2012-2014) द्वारा और Regione Campania (एलआर n.5, Giovanna Mottola के लिए 2002/03/28) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया. फिलिपो कोंटी वैज्ञानिक सहयोग फाउंडेशन'' Infectiopole सूद के एक साथी है.'' निकोला Boucherit अनुसंधान और प्रौद्योगिकी के लिए फ्रेंच मंत्रालय के एक साथी है. धन स्रोतों का अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह, डेटा विश्लेषण, प्रकाशित करने का निर्णय, या पांडुलिपि तैयार करने में कोई भूमिका नहीं थी.
Materials
| Name of Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| DMEM | Gibco Life Technologies | 21969-035 | |
| Fetal Calf Serum | Gibco Life Technologies | 10270 | |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15070 | |
| Glutamine | Gibco Life Technologies | 25030-024 | |
| PBS (10x) | Lonza | BEM515F | |
| Red Blood Cell Lysis buffer | Sigma | R7757 | |
| Cell strainer 70 μm Nylon | BD Falcon | 352350 | |
| Cell strainer 40 μm Nylon | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml tubes | any supplier | n/a | |
| 15 ml tubes | any supplier | n/a | |
| Petri dishes (100/20 mm) | any supplier | n/a | culture treated |
| Petri dishes (35/10 mm) | any supplier | n/a |
References
- Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited. J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).
- Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. . Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).
- Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. . Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).
- Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80. Development. 112, 517-526 (1991).
- Haas, A. The phagosome: compartment with a license to kill. Traffic. 8, 311-330 (2007).
- Underhill, D. M., Ozinsky, A. Phagocytosis of microbes: complexity in action. Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).
- Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications. Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).
- Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. Macrophage polarization in bacterial infections. J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).
- Barry, A. O., et al. Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes. Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).
- Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. The uniformity of phagosome maturation in macrophages. J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).
- Sundaramurthy, V., et al. Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing. Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).
- Boltz-Nitulescu, G., et al. Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant. J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).
