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Neuroscience

성인 Zebrafish의 망막 재생 연구에있는 사용을위한 비발 한 가벼운 손상 패러다임

Published: October 24, 2013
doi:
10.3791/51017
,
1Department of Anatomy and Cell Biology,Wayne State University School of Medicine, 2Department of Opthalmology,Wayne State University School of Medicine

Summary

복수의 가벼운 손상 프로토콜은 손상 광수를 설명하고 결과적으로 성인 zebrafish에있는 망막 재생 반응을 유도하고 있습니다. 이 프로토콜은 안료 동물에서 사용할 수있는 개선 된 방법을 설명하고 그로드하고 전체 망막에 걸쳐 콘 광수의 대부분을 손상.

Abstract

빛에 의한 망막 변성 (LIRD)는 일반적으로 설치류 피해로드와 콘 광수에 제브라 피쉬 모두에 사용됩니다. 성인 제브라 피쉬에서 시세포 변성 뮐러 아교 세포를 다시 입력 세포주기에 트리거 및 과도 증폭 조상을 생산하고 있습니다. 이 조상은 그들이 궁극적으로 새로운 광 수용체를 야기 손상된 영역에 마이그레이션으로 증식을 계속합니다. 현재, 두 널리 사용되는 LIRD 패러다임, 각각의 재생 반응 광수 손실 및 해당 차이의 정도를 변화 결과.가있다 더 많은 유전자와 약물 도구를 재생하는 동안 관심의 개별 유전자의 역할을 테스트 할 수있는만큼, 강력한 LIRD 패러다임을 개발할 필요가있다. 여기에서 우리는 LIRD 프로토콜을 설명하는 우리는 두 가지 이전에 설립 LIRD 기술의 사용을 결합했다하는로드와 콘 광수 모두의 광범위하고 일관된 손실됩니다. 게다가이 프로토콜은 LIRD 연구에 대한 흰둥이 배경에 관심 유전자 변형 라인을 유지하기 위해 필요가 없습니다 색소 동물에 사용하기 위해 확장 할 수 있습니다.

Introduction

빛에 의한 망막 변성 (LIRD)는 일반적으로 설치류 피해로드와 콘 광수에 제브라 피쉬 모두에 사용됩니다. 성인 제브라 피쉬에서 시세포 변성 뮐러 아교 세포를 다시 입력 세포주기에 트리거 및 과도 증폭 조상을 생산하고 있습니다. 이 조상은 그들이 궁극적으로 새로운 광 수용체를 야기 손상된 영역에 마이그레이션으로 증식을 계속합니다. 현재, 두 널리 사용되는 LIRD 패러다임, 각각의 재생 반응 광수 손실 및 해당 차이의 정도를 변화 결과.가있다 더 많은 유전자와 약물 도구를 재생하는 동안 관심의 개별 유전자의 역할을 테스트 할 수있는만큼, 강력한 LIRD 패러다임을 개발할 필요가있다. 여기에서 우리는 LIRD 프로토콜을 설명하는 우리는 두 가지 이전에 설립 LIRD 기술의 사용을 결합했다하는로드와 콘 광수 모두의 광범위하고 일관된 손실됩니다. 게다가이 프로토콜은 LIRD 연구에 대한 흰둥이 배경에 관심 유전자 변형 라인을 유지하기 위해 필요가 없습니다 색소 동물에 사용하기 위해 확장 할 수 있습니다.

Protocol

이 프로토콜에 설명 된 모든 절차는 의학의 웨인 주립 대학 대학원에서 동물 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 어두운 적응 전송 어두운 인클로저에 일반 주택 시스템에서 10 성인 흰둥이 나 색소 물고기를 ~. 가능한 경우, 탱크를 통해 정상적인 물 흐름을 허용 zebrafish의 주택 모듈에 내장되어 어두운 인클로저를 사용합니다. (이러한 시스템을 사용할 수없…

Representative Results

지금까지 설명한 가벼운 치료 프로토콜은 LIRD의 각 방법을 비교 하​​였다. 어두운 처리 성인 흰둥이 동물 (그림 3-5)에서 개별 가벼운 치료는 크게로드의 손실 (그림 3)와 콘 (그림 4) 광수습니다. 그러나 두 개별 치료는 주로 비교적 가벼운 치료 (그림 3과 4)에서 보호 복부 망막을 떠나, 망막 등의 반 광수 손상. 또한, 할로겐 라이트 치료에 …

Discussion

여기에서 우리는 광범위한 광수 손실과 강력한 재생 반응의 지속적인 밝은 빛에 노출 결과로 짧은 UV 노출을 결합하는 것을 보여줍니다. 개인 LIRD 방법에 비해이 결합 된 방법은 또한 망막의 두 반쪽 막대와 원뿔 모두에 손상을 입힐 수있는 가장 효과적인 프로토콜입니다. 중요한 것은,이 치료는 색소 동물뿐만 아니라 흰둥이 동물 효과적입니다.

우리는 더 광범위하고 …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

저자는 훌륭한 물고기 사육 및 기술 지원 시샤 루오에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 건강 보조금 R21EY019401 (RT)와 P30EY04068 (RT)의 국립 연구소에 의해 자금 지원, 그리고 웨인 주립 대학 안과학 교실에 실명을 방지하는 연구에서 제한 교부금 등, RT에 기금을 시작했습니다. JT는 웨인 주립 대학 대학원에서 제공하는 토마스 C. 럼블 원정대에 의해 지원되었다.

Materials

UV light source Leica EL600
Glass Petri dish (150 x 20 mm) Sigma-Aldrich/Pyrex CLS3160152BO
250 ml glass beaker Sigma-Aldrich/Pyrex CLS1000250
4 L glass beaker Sigma-Aldrich/Pyrex CLS10004L
Aluminum foil Fisher 01-213-105
250 W halogen lamps Workforce 265-669
1.8 L clear acrylic tanks Aquaneering ZT180T
1.8 L clear acrylic tank lids Aquaneering ZT180LCL
Fan Honeywell HT-900
Aerator Tetra 77853-900
Thermometer Cole-Parmer YO-08008-58
Bent forceps (5/45) World Precision Instruments 504155

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References

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Thomas, J. L., Thummel, R. A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (80), e51017, doi:10.3791/51017 (2013).
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