A Novel Lett Skade Paradigm for bruk i Retinal Regeneration Studies in Adult sebrafisk

Summary

Flere lette skader protokoller har blitt beskrevet å skade fotoreseptorer og dermed indusere en retinal regenerering respons i voksen sebrafisk. Denne protokollen beskriver en forbedret fremgangsmåte som kan brukes i pigmenterte dyr, og som skader det store flertallet av stang-og kjegle fotoreseptorer tvers av hele netthinnen.

Abstract

Lysindusert retinal degenerasjon (LIRD) er ofte brukt i både gnagere og sebrafisk til skade stang og kjegle fotoreseptorer. I voksen sebrafisk, utløser fotoreseptor degenerasjon Müller gliaceller å re-gå inn i cellen syklus og produsere transient-forsterke stamfedre. Disse stamfedre fortsette å spre seg som de vandrer til det skadede området, hvor de til slutt gi opphav til nye fotoreseptorer. For tiden er det to svært utbredte LIRD paradigmer, som hver resulterer i varierende grad av fotoreseptoren tap og tilsvarende forskjeller i regenerering respons. Som mer genetiske og farmakologiske verktøy er tilgjengelige for å teste rollen av individuelle gener av interesse under regenereringen, er det behov for å utvikle et robust LIRD paradigme. Her beskriver vi en LIRD protokoll som resulterer i omfattende og konsekvent tap av både stang og kjegle fotoreseptorer der vi har kombinert bruk av to tidligere etablerte LIRD teknikker. Videre, Kan denne protokollen bli utvidet til bruk i pigmenterte dyr, noe som eliminerer behovet for å opprettholde transgene linjer av interesse på albino bakgrunnen for LIRD studier.

Introduction

Lysindusert retinal degenerasjon (LIRD) er ofte brukt i både gnagere og sebrafisk til skade stang og kjegle fotoreseptorer. I voksen sebrafisk, utløser fotoreseptor degenerasjon Müller gliaceller å re-gå inn i cellen syklus og produsere transient-forsterke stamfedre. Disse stamfedre fortsette å spre seg som de vandrer til det skadede området, hvor de til slutt gi opphav til nye fotoreseptorer. For tiden er det to svært utbredte LIRD paradigmer, som hver resulterer i varierende grad av fotoreseptoren tap og tilsvarende forskjeller i regenerering respons. Som mer genetiske og farmakologiske verktøy er tilgjengelige for å teste rollen av individuelle gener av interesse under regenereringen, er det behov for å utvikle et robust LIRD paradigme. Her beskriver vi en LIRD protokoll som resulterer i omfattende og konsekvent tap av både stang og kjegle fotoreseptorer der vi har kombinert bruk av to tidligere etablerte LIRD teknikker. Videre, Kan denne protokollen bli utvidet til bruk i pigmenterte dyr, noe som eliminerer behovet for å opprettholde transgene linjer av interesse på albino bakgrunnen for LIRD studier.

Protocol

Alle prosedyrene som er beskrevet i denne protokollen ble godkjent av dyr bruk komiteen ved Wayne State University School of Medicine. En. Mørk Adaptation Transfer ~ 10 voksen albino eller pigmentert fisk fra normal bolig system inn i et mørkt skap. Hvis tilgjengelig, kan du bruke en mørk kabinett som er bygget inn i sebrafisk bolig modul, som gjør det mulig for normal vannføring gjennom tanken. (Hvis et slikt system ikke er tilgjengelig, legg fisken tank i et helt m…

Representative Results

Den hittil beskrevet lysbehandling protokollen ble sammenlignet med hver enkelt metode for LIRD. I mørke-behandlede voksne albino dyr (figur 3-5), resulterte de enkelte lys behandlinger i betydelig tap av stang (figur 3) og konen (figur 4) fotoreseptorer. Imidlertid, både individuelle behandlinger primært skadet fotoreseptorer i dorsal halvdel av retina, og etterlater den ventrale netthinnen relativt beskyttet fra lys behandlinger (figurene 3</strong…

Discussion

Her viser vi at å kombinere en kort UV-eksponering med en kontinuerlig sterkt lys eksponering fører til utbredt fotoreseptoren tap og en robust regenerering respons. Sammenlignet med de enkelte LIRD metoder, er denne kombinerte metode også den mest effektive protokollen til å føre til skade både staver og tapper i begge halvdeler av netthinnen. Viktigere, er denne behandlingen effektiv i pigmenterte dyr samt albino dyr.

Selv om vi dokumentere at de samlede protokollen gir mer …

Materials

UV light source	Leica	EL600
Glass Petri dish (150 x 20 mm)	Sigma-Aldrich/Pyrex	CLS3160152BO
250 ml glass beaker	Sigma-Aldrich/Pyrex	CLS1000250
4 L glass beaker	Sigma-Aldrich/Pyrex	CLS10004L
Aluminum foil	Fisher	01-213-105
250 W halogen lamps	Workforce	265-669
1.8 L clear acrylic tanks	Aquaneering	ZT180T
1.8 L clear acrylic tank lids	Aquaneering	ZT180LCL
Fan	Honeywell	HT-900
Aerator	Tetra	77853-900
Thermometer	Cole-Parmer	YO-08008-58
Bent forceps (5/45)	World Precision Instruments	504155