De uso general, se describen métodos muy accesibles para el examen de la migración celular y la invasión in vitro. El primer método es el ensayo de cierre de la herida de células que mide la motilidad celular. El segundo método es la migración y la invasión de ensayo Transwell que evalúa la quimiotaxis y la capacidad invasiva de las células.
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Artículo de método
En la migración celular y la invasión ensayos in vitro
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Resumen
Resumen
La migración es una propiedad clave de las células vivas y es fundamental para el desarrollo normal, la respuesta inmunitaria y los procesos de enfermedad como la metástasis del cáncer y la inflamación. Los métodos para examinar la migración celular son muy útiles e importantes para una amplia gama de investigaciones biomédicas, como la biología del cáncer, la inmunología, la biología vascular, la biología celular y la biología del desarrollo. Aquí usamos la migración e invasión de células tumorales como ejemplo y describimos dos ensayos relacionados para ilustrar los métodos comúnmente utilizados y de fácil acceso para medir estos procesos. El primer método es el ensayo de cierre de heridas de cultivo celular en el que se genera un rasguño en una monocapa celular confluente. La velocidad de cierre de la herida y la migración celular se pueden cuantificar tomando imágenes instantáneas con un microscopio invertido regular en varios intervalos de tiempo. Se puede documentar un comportamiento migratorio celular más detallado utilizando el sistema de microscopía de lapso de tiempo. El segundo método descrito en este trabajo es el ensayo de migración e invasión de células transwell que mide la capacidad de motilidad e invasividad celular hacia un gradiente quimio-atrayente. Nuestro objetivo es describir estos métodos de una manera altamente accesible para que los procedimientos puedan realizarse con éxito en laboratorios de investigación, incluso solo con una configuración básica de biología celular.
Introducción
La motilidad es una característica esencial de las células vivas. La migración celular está implicado en la concepción de la vida, el desarrollo embrionario, la respuesta inmune, y muchos procesos patológicos, tales como la metástasis del cáncer y la inflamación 1-9. Por lo tanto, los métodos para estudiar el comportamiento migratorio de células son las herramientas de investigación de gran utilidad para una amplia gama de disciplinas en las ciencias biomédicas, biología, bioingeniería y otros campos relacionados.
El estudio de la migración celular en la investigación del cáncer es de particular interés como la principal causa ....
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Protocolo
1. Ensayo de cierre de la herida Cultivo Celular
- Separar las células de la placa de cultivo de tejidos usando 0,25% de solución de tripsina-EDTA. Precipitar las células en un tubo cónico de 15 ml por centrifugación, aspirar el sobrenadante, y las células en medio de cultivo re-suspenden. Placa del número apropiado de células en una placa de 6 pocillos para el 100% de confluencia en 24 horas.
Nota: Se pueden necesitar exámenes para determinar el tiempo y el número de células para lograr el 100% de confluencia por el tipo celular y el tamaño de la siendo bien utilizado (por ejemplo, 1 x 10 6 células de melanoma B16F10 se sembraron en un poc....
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Resultados
El ensayo de cierre de la herida y el ensayo de migración de células Transwell que aquí se presenta se realizaron con células de melanoma de ratón B16F10 como un sistema modelo. En el ensayo de cierre de la herida, B16F10 células se sembraron en una placa de cultivo tisular de 6 pocillos y se cultivaron hasta 100% de confluencia en 24 horas. Una herida de aproximadamente 700 m de ancho se ha generado utilizando una punta de pipeta y el cierre de la herida (migración celular) fue grabado usando la microscopía de lapso de.......
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Discusión
La migración celular es un aspecto importante para estudiar en la investigación del cáncer y también se puede aplicar a los estudios de curación de desarrollo, inmunológicos y de la herida. El cultivo de células de ensayo de la herida cierre y ensayos de la migración celular y la invasión Transwell revelar información detallada de comportamientos migratorios celulares y se puede utilizar para investigar los mecanismos moleculares de la migración de células 1,2,10,14. Nuestro estudio utilizó estos ensayos de l.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no tienen intereses financieros contrapuestos.
Agradecimientos
Los autores agradecen a Mike Myles, Sam Saunders y C.W. Elton de los Servicios Multimedia y de Tecnología de la ECU por proporcionar asistencia en la producción de vídeo. Agradecemos el apoyo de la subvención del Centro de Biotecnología de Carolina del Norte, Golfers against Cancer, Brody Brothers Endowment Fund, American Heart Association y ECU/Vidant Cancer Research and Education Fund (L.V.Y. y M.J.R.).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Dulbecco' s medio Eagle modificado (DMEM) | Gibco | 11995-073 | |
| Suero fetal bovino (FBS) | Gemini | 100106 | |
| Albúmina sérica bovina (BSA) | Sigma-Aldrich | A4503-50G | |
| Tripsina EDTA 0.25% | Gibco | 25200-056 | |
| Dulbecco' Solución salina tamponada con fosfato (DPBS) | Gibco | 14190-250 | |
| Violeta cristalino | Sigma | C0775-100G | Disuelto en agua al 0,2% |
| Tampón de disociación celular | Gibco | 13151-014 | |
| Incubadora de cultivo celular | Thermo Fisher Scientific Model | # 3145 | |
| Campana de bioseguridad SterilGARD | The Baker Company, Inc. | Modelo # VBM-600 | |
| EVOS Microscopio invertido Fl | Thermo Fisher Scientific | Modelo # AMF-4302-US | |
| Placa de cultivo de tejidos | Becton Dickinson | 353046 | El número de catálogo varía según el tipo de placa de cultivo |
| Inserto Corning Transwell Fisher | 07-200-150 | El número de catálogo varía según el tamaño de poro de la membrana |
Referencias
- Castellone, R. D., Leffler, N. R., Dong, L., Yang, L. V. Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor. Cancer Lett. 312 (2), 197-208 (2011).
- Hall, A. The cytoskeleton and cancer. Cancer Metastasis Rev. 28, (2009).
- Lau....
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Reimpresiones y permisos
