परीक्षण<em> ड्रोसोफिला</emएक वाई भूलभुलैया परख के साथ> Olfaction
Summary
हम एक वाई भूलभुलैया परख का उपयोग ड्रोसोफिला व्यवहार पर odorants के प्रभाव प्रकट करने के लिए एक विकल्प परीक्षण प्रस्तुत करते हैं.
Abstract
जानवरों को अपने अस्तित्व को सुनिश्चित करने के लिए पर्यावरण से संकेतों का पता लगाने के लिए आवश्यक है. इस उद्देश्य के लिए, वे सीधे संपर्क के माध्यम से या लंबी दूरी तक मार में अभिनय एक अस्थिर अणु के जवाब का प्रतिनिधित्व करता है जो गंध, के माध्यम से, ऐसी दृष्टि, mechanoreception, सुनवाई, और स्वाद के माध्यम से chemoperception के रूप में पर्यावरण cues का उपयोग करें. अस्थिर रासायनिक अणुओं खतरा, भोजन के स्रोत, या व्यक्तियों के बीच संवाद करने का पता लगाने में सबसे जानवरों के लिए बहुत महत्वपूर्ण संकेत हैं. ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर महक के सेलुलर और आणविक आधार का पता लगाने के लिए वैज्ञानिकों के लिए सबसे आम जैविक मॉडलों में से एक है. इस छोटे से कीट की घ्राण क्षमताओं को उजागर करने के लिए, हम प्रतिष्ठित चूहों के साथ प्रयोग किया जाता वाई भूलभुलैया परीक्षण के आधार पर एक संशोधित चुनाव प्रोटोकॉल का वर्णन. वाई mazes के साथ प्राप्त आंकड़ों बेहतर जानवरों को उनके सदा बदलते माहौल से निपटने के लिए समझने की बहुमूल्य जानकारी दे. हम अध्ययन करने के लिए एक कदम दर कदम प्रोटोकॉल का परिचयइस वाई भूलभुलैया परख का उपयोग कर मक्खी खोजपूर्ण प्रतिक्रिया पर odorants का प्रभाव.
Introduction
स्वाद या गंध के माध्यम से Chemoreception पशु अस्तित्व के लिए एक प्रमुख संवेदी साधन है. यह महत्वपूर्ण एक खतरा है या खाद्य स्रोतों का पता लगाने के लिए आवश्यक संकेत, साथ ही साथ सामाजिक संबंधों के लिए देता है. यह भी उनके प्रजनन के लिए आवश्यक एक सेक्स पार्टनर खोजने के लिए जानवरों में मदद करता है. 20 से अधिक वर्षों के लिए, नोबेल पुरस्कार "odorant रिसेप्टर्स और घ्राण प्रणाली के संगठन की अपनी खोजों के लिए" 2004 में रिचर्ड एक्सल और लिंडा बक से काम जीतने सहित गहन अनुसंधान, आणविक और सेलुलर अड्डों प्रकट करने के लिए किया गया है बाहर महक 1,2.
घ्राण धारणा टुकड़े करना वैज्ञानिकों के लिए पसंदीदा जानवर मॉडलों में से एक डी. है मेलानोगास्टर. इस कीट स्तनधारियों के साथ एक समान सेलुलर और आणविक गंध कोडिंग रणनीति शेयरों. वैज्ञानिक समुदाय इस फल मक्खी में odorants की भूमिका का अध्ययन करने के लिए विविध व्यवहार मानदंड का उपयोग करता है. इन परीक्षणों में इस तरह courtshi रूप बहुविध assays शामिलमहक सहित विभिन्न संवेदी तौर तरीकों,, पुरुष प्रेमालाप 3 बटोर लिए महत्वपूर्ण हैं जहां पी परीक्षण. अन्य assays भी अधिक विशेष रूप से odorants की भूमिका से निपटने के लिए विकसित किया गया है; इन टी mazes, वाई mazes, जाल assays, चार क्षेत्र एरेनास और पवन सुरंगों 4,5,6,7,8 शामिल हैं.
इस लेख में हम डी. का उपयोग कर मजबूत घ्राण प्रतिक्रियाओं प्रदान करता है जो एक साधारण संशोधित वाई भूलभुलैया परख, पेश मेलानोगास्टर. हमारे सेट अप एक पहले से वर्णित विधि 9 के विपरीत अंत सुझावों का उपयोग करता है. इस प्रकार, हमारी वाई भूलभुलैया दो फायदे हैं. मक्खी उसकी पसंद बना दिया है एक बार सबसे पहले, यह प्रणाली में किसी भी वापसी से बचा जाता है. दूसरा, यह वाई भूलभुलैया के सभी क्षेत्रों में odorants के आदान प्रदान को सीमित करता है. ड्रोसोफिला अक्सर odorant संतृप्ति से बचने के लिए प्रयोग किया जाता है, जो हवा का प्रवाह करने के लिए बहुत संवेदनशील होते हैं क्योंकि यह पिछले लाभ महत्वपूर्ण है. एक हवा का प्रवाह के साथ प्रयोगात्मक सेट अप को समायोजित करने के लिए समय और लागत लगता होगा. इसलिए, हमारे वाई भूलभुलैया परख एक एफई का प्रतिनिधित्व करता हैficient और ड्रोसोफिला की घ्राण प्रदर्शन का परीक्षण करने के लिए तेजी से रास्ता.
Protocol
Representative Results
Discussion
हमारी वाई भूलभुलैया प्रोटोकॉल एक पहले से वर्णित प्रोटोकॉल 9 पर आधारित है. हालांकि, हम दो प्रमुख मतभेद परिचय. सबसे पहले, हम वे विलायक या विलायक प्लस odorant युक्त शीशी में प्रवेश करने का फैसला एक बार लौटने…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम पांडुलिपि में सुधार करने के लिए अपने काम के लिए 4 अनाम समीक्षक धन्यवाद. हम MBG और YG करने के लिए अपने वित्तीय समर्थन के लिए केंद्र में राष्ट्रीय डी ला Recherche Scientifique धन्यवाद, और एमएमएस के लिए विश्वविद्यालयों-de Bourgogne और अनुसंधान के फ्रेंच मंत्रालय. YG प्रयोगशाला में अनुसंधान के लिए यूरोपीय अनुसंधान परिषद (ईआरसी अनुदान, GliSFCo-311403 शुरू), एजेंस Nationale डे ला Recherche (ANR-JCJC, GGCB -2010), Conseil क्षेत्रीय de Bourgogne (फैबर), और CNRS द्वारा वित्त पोषित है.
Materials
| Drosophila Polystyrene tube | VWR europe | 734-2255 | 30 x 25 mm Y-maze |
| Drosophila Borosilicate tube | Dijon verre | 95 X 25 mm Y-maze |
|
| Foam stopper | Dutscher | 999038 | Y-maze |
| Y-shaped connector | Europrix | 11020605 | Y-maze |
| 100-1000µl pipet tips | Corning | 4868 | Join the following pipet tips to the Y-shaped connector. Cut 2 pipet tips at 65 mm from the wide end, and connect the narrow end (with a ∼2 mm opening) to 2 test vials. These openings will limit the U-turns once the flies enter the tubes containing the odors. Cut 1 pipet tip at 35 mm from the wide end, and connect it to the loading vial. Y-maze |
| Far-Red LED Bulb | Rubin-Lacaque | 0RB180238 | 625-630 nm |
| Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 45725 | |
| Phenylacetic Acid | Sigma-Aldrich | P16621 | |
| Yeast | Sensient Flavors Strasbourg | 1018880464 | |
| Cornmeal | eurogerm | Farine de maïs | |
| Agar | Kalys | HP-697-25 | |
| Methyl hydroxy 4 benzoate | VWR international | 25605293 |
References
- Mombaerts, P. Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors. Nat. Rev. Neurosci. 5, 263-278 (2004).
- Silbering, A. F., Benton, R. Ionotropic and metabotropic mechanisms in chemoreception: ‘chance or design. EMBO Rep. 11, 173-179 (2010).
- Ziegler, A. B., Berthelot-Grosjean, M., Grosjean, Y. The smell of love in Drosophila. Front. Physiol. 4, (2013).
- Silbering, A. F., et al. Complementary function and integrated wiring of the evolutionarily distinct Drosophila olfactory subsystems. J. Neurosci. 31, 13357-13375 (2011).
- Grosjean, Y., et al. An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophila. Nature. 478, 236-240 (2011).
- Woodard, C., Huang, T., Sun, H., Helfand, S. L., Carlson, J. Genetic analysis of olfactory behavior in Drosophila: a new screen yields the ota mutants. Genetics. 123, 315-326 (1989).
- Semmelhack, J. L., Wang, J. W. Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion. Nature. 459, 218-223 (2009).
- Budick, S. A., Dickinson, M. H. Free-flight responses of Drosophila melanogaster to attractive odors. The Journal of Experimental Biology. 209, 3001-3017 (2006).
- Martin, F., Charro, M. J., Alcorta, E. Mutations affecting the cAMP transduction pathway modify olfaction in Drosophila. J. Comp. Physiol. A. 187, 359-370 (2001).
- Barron, A. B. Anaesthetising Drosophila for behavioural studies. Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).
- Ai, M., et al. Acid sensing by the Drosophila olfactory system. Nature. 468, 691-695 (2010).
- Becher, P. G., Bengtsson, M., Hansson, B. S., Witzgall, P. Flying the fly: long-range flight behavior of Drosophila melanogaster to attractive odors. J. Chem. Ecol. 36, 599-607 (2010).
