Testen<em> Drosophila</em> Riechen mit einem Y-Labyrinth-Test
Summary
Wir präsentieren eine Choice-Test, um den Einfluss von Geruchsstoffen auf Drosophila Verhalten mit einem Y-Labyrinth-Test offenbaren.
Abstract
Detektieren von Signalen aus der Umgebung ist für Tiere ihr Überleben zu sichern. Zu diesem Zweck verwenden sie Umweltreize wie Sehen, Mechanorezeption, Hören und chemoperception durch Geschmack, über direkten Kontakt oder durch Geruchssinn, der die Antwort auf einen flüchtigen Molekül größere Reichweite handeln darstellt. Flüchtige chemische Moleküle sind sehr wichtige Signale für die meisten Tiere in der Erkennung von Gefahr-, Nahrungsquelle oder zwischen Individuen kommunizieren. Drosophila melanogaster ist einer der am häufigsten verwendeten biologischen Modellen für Wissenschaftler, die zellulären und molekularen Basis des Geruchssinns erkunden. Um olfaktorischen Fähigkeiten dieser kleinen Insekten zu markieren, beschreiben wir eine veränderte Wahl-Protokoll basiert auf der Y-Labyrinth-Test klassisch mit Mäusen verwendet. Mit Y-Labyrinthe erhaltenen Daten geben wertvolle Informationen, um besser zu verstehen, wie Tiere mit ihren sich ständig verändernden Umwelt umzugehen. Wir führen eine Schritt-für-Schritt-Protokoll zu studieren, dieWirkung von Geruchsstoffen auf Fly Sondierungs Antwort mit diesem Y-Labyrinth-Test.
Introduction
Chemoreception durch Geschmack oder Geruchssinn ist ein Schlüssel sensorischen Modalität für das Überleben der Tiere. Es gibt dadurch wichtige Hinweise für die Erkennung einer Gefahr oder Nahrungsquellen notwendig, als auch für soziale Interaktionen. Es hilft auch Tieren eine Sex-Partner für ihre Fortpflanzung notwendig finden. Seit mehr als 20 Jahren intensiver Forschung, einschließlich der Nobelpreis ausgezeichneten Arbeiten von Richard Axel und Linda Buck im Jahr 2004 "für ihre Entdeckungen der Geruchsrezeptoren und der Organisation des olfaktorischen Systems", wurde durchgeführt, um die molekularen und zellulären Grundlagen der offenbaren Riechen 1,2.
Eines der beliebtesten Tiermodelle für Wissenschaftler Geruchswahrnehmung zu zerlegen ist D. melanogaster. Dieses Insekt teilt eine ähnliche zelluläre und molekulare Geruchscodierungsstrategie mit Säugetieren. Die wissenschaftliche Gemeinschaft nutzt diverse Verhaltensparadigmen, die Rolle der Geruchsstoffe in diesem Fruchtfliege studieren. Diese Tests umfassen multimodalen Assays wie courtship Tests, bei denen verschiedene Sinnesmodalitäten, einschließlich Geruchssinn, sind wichtig, um männliche Balz 3 entlocken. Andere Tests sind auch entwickelt worden, um die Rolle von Geruchsstoffen genauer anzugehen; Dazu gehören T-Labyrinthe, Y-Labyrinthe, trap-Assays, Vier-Felder-Arenen und Wind-Tunnel 4,5,6,7,8.
In diesem Artikel stellen wir eine einfache modifizierte Y-Labyrinth-Test, die robust Riech Antworten bietet mit D. melanogaster. Unser Set-up verwendet End-Tipps im Gegensatz zu einer zuvor beschriebenen Verfahren 9. So hat unsere Y-Labyrinth zwei Vorteile. Erstens, eine Rückkehr in das System vermeidet es einmal die Fliege hat ihre Wahl getroffen. Zweitens schränkt sie den Austausch von Geruchsstoffen in allen Bereichen der Y-Labyrinth. Dieser letzte Vorteil ist wichtig, da Drosophila sind sehr empfindlich auf Luftstrom, der oft verwendet wird, um Geruchs Sättigung zu vermeiden. Zur Einstellung des experimentellen Aufbaus mit einem Luftstrom würde Zeit-und kostenintensiv sein. Daher sind unsere Y-Labyrinth-Test stellt eine efreichend und schnelle Möglichkeit, Riechleistung von Drosophila zu testen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Unsere Y-Labyrinth-Protokoll basiert auf einem zuvor beschriebenen Protokoll 9 basiert. Allerdings stellen wir zwei wesentliche Unterschiede. Erstens verwenden wir engen Pipettenspitzen, um die Fliegen von der Rückkehr zu verhindern, wenn sie sich entscheiden, in der Ampulle mit dem Lösungsmittel oder Lösungsmittel plus den Geruchsstoff geben. Diese schmalen Spitzen sind auch nützlich, um die Geruchsstoffdiffusion in der Y-Labyrinth begrenzen. Zweitens verwenden wir ein kleiner Laden Fläschchen, um die F…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken 4 anonymen Gutachtern für ihre Arbeit, das Manuskript zu verbessern. Wir danken dem Centre National de la Recherche Scientifique für die finanzielle Unterstützung, um MBG und YG, und der Université de Bourgogne und der Französisch Ministerium für Forschung, um MMS. Research in YG Labor wird von der Europäischen Forschungsrates (ERC Starting Grant, GliSFCo-311403), der Agence Nationale de la Recherche (ANR-JCJC, GGCB-2010), des Conseil Régional de Bourgogne (Faber) und dem CNRS finanziert.
Materials
| Drosophila Polystyrene tube | VWR europe | 734-2255 | 30 x 25 mm Y-maze |
| Drosophila Borosilicate tube | Dijon verre | 95 X 25 mm Y-maze |
|
| Foam stopper | Dutscher | 999038 | Y-maze |
| Y-shaped connector | Europrix | 11020605 | Y-maze |
| 100-1000µl pipet tips | Corning | 4868 | Join the following pipet tips to the Y-shaped connector. Cut 2 pipet tips at 65 mm from the wide end, and connect the narrow end (with a ∼2 mm opening) to 2 test vials. These openings will limit the U-turns once the flies enter the tubes containing the odors. Cut 1 pipet tip at 35 mm from the wide end, and connect it to the loading vial. Y-maze |
| Far-Red LED Bulb | Rubin-Lacaque | 0RB180238 | 625-630 nm |
| Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 45725 | |
| Phenylacetic Acid | Sigma-Aldrich | P16621 | |
| Yeast | Sensient Flavors Strasbourg | 1018880464 | |
| Cornmeal | eurogerm | Farine de maïs | |
| Agar | Kalys | HP-697-25 | |
| Methyl hydroxy 4 benzoate | VWR international | 25605293 |
References
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