Diagnostisk Ultralydbilleddannelse of Mouse Membran Funktion

Summary

Diagnostisk ultralyd imaging har vist sig at være effektiv til at diagnosticere forskellige respiratoriske sygdomme i mennesker og dyr. Vi demonstrerer en omfattende ultralyd protokol anvendes af Dr. Zuo laboratorium til at analysere membran kinetik specifikt i musemodeller. Dette er også en non-invasiv forskning teknik, der kan give kvantitative oplysninger om mus respiratoriske muskelfunktion.

Abstract

Funktion analyse af gnaver respiratoriske skeletmuskulatur, især membran, udføres almindeligvis ved at isolere muskel strimler ved hjælp af invasive kirurgiske procedurer. Selv om dette er en effektiv metode til vurdering af in vitro-membran aktivitet, er det ikke drejer overlevelse kirurgi. Anvendelsen af ikke-invasiv ultralydsscanning som en in vivo metode er fordelagtig, da det ikke alene reducerer antallet af dyr aflivet, men er også egnet til overvågning af sygdomsudvikling i levende mus. Således kan vores ultralydsscanning metode sandsynligvis bidrage til udviklingen af ​​nye behandlingsformer, der lindrer muskel skade induceret af forskellige luftvejssygdomme. Især i kliniske diagnoser af obstruktive lungesygdomme, ultralydsscanning har potentialet til at blive anvendt sammen med andre standard tests til påvisning af tidlig indtræden af ​​membranen muskeltræthed. I den nuværende protokol, beskriver vi, hvordan man præcist vurdere membran contractiheden i en musemodel ved hjælp af en diagnostisk ultralyd billeddannelse teknik.

Introduction

For nylig har diagnostisk ultralyd billeddannende teknikker blevet anvendt til musemodeller af renovaskulær hypertension og bugspytkirtelkræft ^1,2. Men disse teknikker ikke har været udbredt i gnaver respiratorisk muskelfunktion assay. Derfor har vi udviklet en diagnostisk ultralydsscanning metode som et værdifuldt værktøj til in vivo langsgående vurderinger af mellemgulvet mobilitet i mus.

Der er flere fordele ved at diagnostisk ultralyd scanning. For eksempel er non-invasiv, sikker, bærbare, og giver mulighed for tidstro målinger ved en relativt lav pris ^3. Især var visse lavfrekvente ultralyd-enheder i stand til at detektere luft fældefangst, en klinisk karakteristisk for kronisk obstruktiv lungesygdom (KOL) med mild til svær luftstrøm ^4. Således kan diagnostisk ultralyd scanning tjene som en lettilgængelig og reproducerbar screeningsmetode til real-time overvågning af luftvejslidelser.

Diagnostisk ultralyd imaging teknikker der ofte anvendes til større dyr eller mennesker. Der har dog været et begrænset antal ultralyd billeddiagnostiske undersøgelser på musemodeller, hvilket sandsynligvis skyldes de udfordringer, der udfører ultralyd på små emner. Den nuværende protokol skitserer en ny procedure for måling membran funktion i mus. Desuden, selv om der har været flere gnavere på membranen funktion, de fleste af de resultater, blev genereret ved isolering af muskel strimler direkte fra aflivet dyr ^5-7. Derimod vil anvendelse af en in vivo-diagnostisk ultralydsbilleddannelse metode til at analysere membran aktivitet formindske antallet af dyr ofret for eksperimenter. Endvidere kan langvarige behandlinger med fokus på at øge membran kontraktilitet nøjagtigt vurderet via ultralyd i gnavermodeller uden at ofre dyr.

ntent "> I vores laboratorium har vi udviklet en effektiv metode til at visualisere samt analysere mus mellemgulvet aktivitet ved hjælp af en ultralyd maskine, som hjælper forståelsen af mellemgulvet funktion in vivo, undgår invasive metoder til dyr, og hjælpemidler i udviklingen af terapeutiske behandlinger for respiratorisk dysfunktion.

Protocol

Alle procedurer, der involverer dyr emner blev godkendt og udfyldt i overensstemmelse og overholdelse af The Ohio State University Institutional Animal Care og brug Udvalg (IACUC) og retningslinjer. 1.. Mouse Anæstesi Oprette en ren procedure bord med en opvarmet, temperaturreguleret pad svøbt i et kirurgisk håndklæde. Varmepuden bør holdes mellem 30 ° C og 34 ° C for at stabilisere dyret kernetemperatur samtidig reducere potentiel stress for dyret. Anbring musen …

Representative Results

En typisk ultralyd billede af en mus membran er vist i figur 1A. Musen membran maksimal lodret forskydning blev registreret. Denne afstand blev beregnet ved nøjagtigt at måle dybden af mellemgulvet bevægelse fra afslapning til sammentrækning ved hjælp af de elektroniske calipre, der er en del af ultralyd software. Tabel 1 viser disse målinger af diafragma sammentrækninger fra tre forskellige mus distance. Efter konvertering af cine loop fil i en MPEG-fil, blev respirationsraten b…

Discussion

Den nuværende forsøgsprotokol udvikler diagnostisk ultralyd billeddannende teknikker specifikke for membranen aktivitet i en musemodel via en non-invasiv, in vivo-fremgangsmåde. Anæstesi apparater indstillinger er tilnærmede værdier, der kan være lettere justeret for hvert dyr da individuel mus kan reagere forskelligt på anæstesi. For at forhindre forkert anæstesi administration, er det vigtigt regelmæssigt at overvåge musens livstegn, herunder puls, respirationsfrekvens, og kropstemperaturen. Desud…

Materials

Veterinary digital ultrasonic diagnostic imaging system	Edan	DUS 3 VET	Ultrasound parameters include: frequency of 6.5 MHz, Depth of 29 mm. Note: An equivalent ultrasound machine may be used for this protocol
Micro-convex array transducer	Edan	C611	Or equivalent
GE Logiq i hand-carried unit (HCU)	GE Healthcare	GE Logiq i hand-carried unit (HCU)	Or equivalent
GE 12 MHz linear array probe	GE Healthcare	12L-RS	Or equivalent
Veterinary anesthetic vaporizer	Webster Veterinary	Serial #: W422021	Isoflurane was exclusively used with this vaporizer (or equivalent). A custom made induction chamber for anesthesia was assembled for initial anesthesia. Maintenance anesthesia was performed using a nose cone
Isothesia (Isoflurane, USP)	Butler Schein	29405 250ML PVL	Or equivalent
Enviro-pure anesthesia absorbing canister	Surgivet Smiths Medical PM, Inc.	Part #: 32373B10	Or equivalent
Ultrasound transmission gel	HM Sonic	N/A	Or equivalent
Puralube vet ointment	Puralube	NDC 17033-211-38	Or equivalent
Deltaphase isothermal pad	Braintree Scientific Inc.	39DP	Or equivalent
Hair remover	Nair	N/A	Or equivalent
Electric razor	Remington	HC-5015	Or equivalent
Surgical tape	3M Micropore	1530-1	Or equivalent
Gauze sponges	Dynarex	3262	Or equivalent