Se demuestra la construcción de cámaras de vapor de alcohol utilizando materiales fácilmente disponibles que albergan simultáneamente 6 jaulas de ratón. Se describe aún más su uso en un modelo de ratón de la exposición fetal de alcohol equivalente a los 3 trimestres del embarazo humano. Este paradigma expone los animales durante la gestación y después del parto 1-12 días.
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Artículo de método
Construcción de cámaras de vapor utiliza para exponer los ratones al alcohol durante el equivalente de los tres trimestres del Desarrollo Humano
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Resumen
Resumen
La exposición al alcohol durante el desarrollo puede dar lugar a una constelación de anormalidades morfológicas y de comportamiento que se conocen colectivamente como trastornos del espectro alcohólico fetal (TEAF). En el extremo más grave del espectro es el síndrome de alcoholismo fetal (FAS), que se caracteriza por retraso del crecimiento, dismorfología craneofacial, y los déficits neuroconductuales. Los estudios con modelos animales, incluidos los roedores, se han dilucidado muchos mecanismos moleculares y celulares implicados en la fisiopatología de los FASD. Administración de etanol a los roedores gestantes se ha utilizado para modelar la exposición humana durante el primer y segundo trimestres del embarazo. Tercer trimestre el consumo de etanol en los seres humanos ha sido modelado usando roedores neonatales. Sin embargo, son pocos los estudios en roedores han caracterizado el efecto de la exposición de etanol durante el equivalente a los tres trimestres del embarazo humano, un patrón de exposición que es común en las mujeres embarazadas. Aquí, se muestra cómo construir cámaras de vapor de fácil omateriales btainable que cada uno puede alojar hasta seis jaulas de ratón estándar. Se describe un paradigma cámara de vapor que puede ser utilizado para modelar la exposición al etanol, con una mínima manipulación, durante los tres trimestres. Nuestros estudios demuestran que las presas embarazadas desarrollaron tolerancia metabólica significativa a etanol. Sin embargo, los ratones recién nacidos no se desarrolló tolerancia metabólica y el número de fetos, el peso del feto, el peso de la placenta, el número de crías / camada, número de crías muertas / camada, y peso de las crías no se vieron afectados significativamente por la exposición de etanol. Una ventaja importante de este paradigma es su aplicabilidad a estudios con ratones genéticamente modificados-. Además, este paradigma minimiza la manipulación de los animales, un factor de confusión importante en la investigación del alcoholismo fetal.
Introducción
Beber alcohol durante el embarazo puede dañar al feto, causando alteraciones persistentes en muchos órganos y sistemas que disminuyen significativamente la calidad de vida de las personas afectadas y sus familias. Se estima que aproximadamente el 10-30% de las mujeres beben durante el embarazo en los EE.UU., con 1-8% de beber en un 1,2 patrón de atracones. El rango de los efectos producidos por la exposición al etanol durante el desarrollo fetal se conoce colectivamente como trastornos del espectro alcohólico fetal (TEAF). Estimaciones recientes indican que TEAF son un importante problema de salud pública con una prevalencia de hasta el 2-5% en los EE.UU. ....
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Protocolo
Todos los animales procedimientos fueron aprobados por la Universidad de Nuevo México-Ciencias de la Salud Animal del Centro de Atención Institucional y el empleo Comisión.
1. Vapor Asamblea Cámara
- Hojas de corte de policarbonato con una sierra circular o sierra de calar a las dimensiones previstas en el video de arriba, abajo, delante, detrás, a los lados, y la puerta (Figura 1 y Tabla 1).
- Con una sierra circular o sierra de calar, cortar una abertura 8 pulgadas de alto por 16 pulgadas de ancho en el medio del panel frontal.
- Mida y marque los agujeros para la bisagra de pia....
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Resultados
Figura 2A muestra que tanto en ratones embarazadas y los hijos recién nacidos fueron expuestos a concentraciones de vapores de etanol relativamente estables en las cámaras. Estos variaron entre 4-6 g / dl. Figura 2B muestra las BEC obtenidos en los ratones embarazadas como una función del tiempo. BEC se midieron usando un alcohol deshidrogenasa estándar basado ensayo 48. En G5, las BEC se elevó rápidamente a ~ 60 mM de 2 h después del inicio de la exposición y alcanzó su punt.......
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Discusión
A continuación, describimos en detalle los métodos para la construcción de cámaras de inhalación de vapores. Los materiales y las herramientas requeridas para construir las cámaras están fácilmente disponibles a partir de un número de proveedores comerciales y los pasos para la construcción de las cámaras son relativamente sencillos. El sistema que se describe aquí no contiene válvulas de retención en línea para evitar el reflujo y la mezcla. No fue posible medir cualquier etanol detectable en el aire sólo cámaras que s.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Apoyada por los Institutos Nacionales de Salud subvenciones R01-AA015614, R01-AA014973, AA014127 y T32-K12-GM088021. Los autores agradecen a Samantha L. Blomquist para la asistencia técnica y los Dres. Kevin Caldwell y Donald Partridge para evaluar críticamente el manuscrito y video.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Policarbonato 1/4" transparente 48" x 24" | McMaster-Carr | 8574K23 | 10 |
| Sello de bulbo de goma espuma 3/8" de ancho x 7/32" de alto | McMaster-Carr | 93085K67 | 10 pies |
| Soldado #16 | McMaster-Carr | 7515A11 | 3 |
| Bisagra de piano de 12" de largo | McMaster-Carr | 1658A11 | 2 x 1 pie |
| Abrazaderas de palanca de sujeción estándar | McMaster-Carr | 5126A26 | 8 Tubo |
| PEX de 1/2" | McMaster-Carr | 51275K88 | Racor |
| tubo en T con púas de 10 pies (Negro) Paquete 10 | McMaster-Carr | 5463K608 | 1 |
| Racor de tapón de púas (Negro) Paquete 10 | McMaster-Carr | 5462K79 | 1 |
| Accesorio de tubo de codo de púas (Negro) Paquete 10 | McMaster-Carr | 5463K596 | 1 |
| Adaptadores de pared pasante de 3/8", tubo a tubo roscado | McMaster-Carr | 5463K851 | 1 |
| Tornillo de máquina Phillips 4-40 | McMaster-Carr | 91772A112 | 1 |
| Tuerca hexagonal de tornillo para máquina 4-40 | McMaster-Carr | 90480A005 | 1 |
| Caudalímetro de montaje en panel 2-20 | McMaster-Carr | 41945K76 | 3 |
| matraz, FILTRO 1.000 ml 6/PAQUETE | VWR | 89001-800 | número arábigo |
| Sello de precisión Septa | VWR | 89084-490 | 1 |
| VWR Tapón de goma negro #8 1 orificio | VWR | 59581-367 | 1 |
| TUBO TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR | 89068-556 | 1 | |
| TUBO TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR | 89068-502 | 1 | |
| Aireador Stone P2120 | VWR | 32573-007 | 1 |
| 3/8" Conectores en T Pk de 20 | VWR | 46600-060 | 1 |
| Seccionadores VWR cónicos Pk de 10 | VWR | 46600-110 | 1 |
| 3/8 Manguera Lengüeta con válvula acoplamiento en línea Colder | Products Company | HFCD17612 | 1 |
| Bomba de aire de capacidad media | LMI Fabricantes | DB60L | 1 |
| Estantería de alambre nexelate 36"W x 24" D x 63"H | T9A990135 | industrial global | 1 |
| Juego de ruedas de vástago de (4) ruedas de poliuretano de 5" Global | industrial | T9A500591 | 1 |
Referencias
- Centers for Disease Control and Prevention (CDC). World Health Organization Who. Alcohol use and binge drinking among women of childbearing age--United States. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 61 (28), 534-538 (2012).
- Ethen, M. K., et al.
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