यह भी स्पष्टीकरण बुलाया आंखों को हटाने, यह अपरिवर्तनीय आंशिक (आँख) या पूर्ण (दूरबीन) दृष्टि हानि लाती बाद स्तनधारी दृश्य प्रणाली साथ दृश्य, पार मोडल, और विकास plasticity के पहलुओं का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी रणनीति प्रदान करता है. यहाँ हम विवो स्पष्टीकरण में प्रदर्शन करने के लिए एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और ईमानदार दृष्टिकोण का वर्णन.
स्पष्टीकरण या एक आंख की शल्य हटाने आम तौर पर तंत्रिका deafferentation के लिए एक मॉडल के रूप में माना जा सकता है. यह स्तनधारी दृश्य प्रणाली 1-4 साथ दृश्य, पार मोडल और विकास plasticity के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण प्रदान करता है.
यहाँ, हम वयस्कों के लिए 20 दिन पुराने के चूहों में मान्य है जो माउस में एक को हटाने या दोनों आंखों के लिए एक सुंदर और सरल तकनीक का प्रदर्शन. संक्षेप में, एक कीटाणुरहित घुमावदार संदंश आंख के पीछे ऑप्टिक तंत्रिका शिकंजा कसने के लिए प्रयोग किया जाता है. बाद में, परिपत्र आंदोलनों ऑप्टिक तंत्रिका कसना और नेत्रगोलक को हटाने के लिए प्रदर्शन कर रहे हैं. इस तकनीक का लाभ नहीं रक्तस्राव को कम से कम उच्च reproducibility, तेजी से पोस्ट ऑपरेटिव वसूली और प्रयोगकर्ता के लिए एक बहुत कम सीखने की दहलीज हैं. इसलिए, जानवरों की एक बड़ी राशि चालाकी और प्रयास की न्यूनतम राशि के साथ कार्रवाई की जा सकती है. तकनीक की प्रकृति को मामूली क्षति उत्पन्न हो सकता हैप्रक्रिया के दौरान रेटिना. महाजन एट अल की तुलना में इस पक्ष प्रभाव इस विधि कम उपयुक्त बनाता है. (2011) 5 लक्ष्य को इकट्ठा करने और रेटिना ऊतक का विश्लेषण करने के लिए है. नेत्रगोलक पलकों को हटाने के बिना सॉकेट से विस्थापित किए जाने की आवश्यकता के बाद से -: इसके अलावा, हमारे विधि के बाद आंख खोलने उम्र (13 के बाद P10 माउस) तक सीमित है. इस पांडुलिपि में वर्णित में विवो स्पष्टीकरण तकनीक हाल ही में सफलतापूर्वक चूहों में मामूली संशोधनों के साथ लागू किया है और सामान्य रूप में कृन्तकों के अभिवाही दृश्य मार्ग का अध्ययन करने के लिए उपयोगी प्रतीत होता है किया गया है.
एक आँख निकाल रहा है और इस तरह अचल संवेदी रिसेप्टर सतह (रेटिना) destructing, दृश्य मार्ग के साथ संवेदी इनपुट की काफी हानि लगाता है. किशोर और वयस्क दृश्य प्रणाली में स्पष्टीकरण मॉडल अलग दृश्य केन्द्रों 1-4 के विकास, plasticity और समारोह को समझने में मूल्यवान साबित हो गया है. इस संवेदी अभाव की, आणविक सेलुलर और शारीरिक परिणाम कॉर्टिकल सर्किट निपटने और अनुभव में इस तरह के एक व्यापक परिवर्तन के जवाब में उनकी संरचना और समारोह बदल कैसे सामान्य विकास नियंत्रित किया जाता है और कैसे स्थापित में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं.
दृश्य अभाव के विभिन्न तरीकों मौजूद हैं और वे सभी दृष्टि से संबंधित अनुसंधान के क्षेत्र में उनके विशिष्ट लाभ है. उदाहरण के अंधेरे पालन विशेष रूप से नेत्रहीन गतिविधि संचालित समाप्त लिए अभी तक यह सहज रेटिना गतिविधि को प्रभावित नहीं करता. इसी तरह, ढक्कन टांके या आँख पैच नमूनों हटाने visuaएल इनपुट सहज गतिविधि परेशान बिना लेकिन वे बंद आँखों के माध्यम से छितरी प्रकाश प्रवेश की अनुमति है. उन तरीकों प्रतिवर्ती हैं और विकास 6-8 के दौरान कॉर्टिकल सर्किट sculpting में दूरबीन आदानों के नमूनों दृष्टि और निम्न स्तर के सहसंबंध की भूमिका को समझने में बहुमूल्य होना दिखाया गया है. यह ऑप्टिक तंत्रिका 9,10 गठन कि रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल आदानों की एक प्रगतिशील नुकसान स्थापित करता है क्योंकि मोतियाबिंद अनुसंधान में, वयस्क जानवरों में ऑप्टिक तंत्रिका क्रश मॉडल व्यापक रूप से इस्तेमाल किया गया है. उद्देश्य अचल बार में सहज और नमूनों दोनों दृष्टि को हटाना है, जब आँख और इस तरह रेटिना पूरी तरह से और तुरंत निकाल दिया जाता है, जहां दूसरी ओर, स्पष्टीकरण, पर, अभाव के उपयुक्त विकल्प है. यह भी गतिविधि मानचित्रण पढ़ाई 11,12 में शोर अनुपात करने के लिए संकेत वृद्धि कर सकते हैं जो एक मजबूत intraocular गतिविधि असंतुलन लाती है. वें के साथ स्पष्टीकरण के जवाब में कार्यात्मक और संरचनात्मक परिवर्तनों की तुलनाOSE ऐसे उदाहरण के लिए ढक्कन सीवन के रूप में कम कठोर तरीकों से वंचित करने के बाद भी plasticity के दोनों समस्थिति और synaptic प्रकार में सहज रेटिना गतिविधि की भूमिका में नए अंतर्दृष्टि का पर्दाफाश हो सकता है.
स्पष्टीकरण प्रत्यक्ष रेटिना लक्ष्य में पौष्टिकता संबंधी प्रभावों का नुकसान हो सके. उदाहरण के लिए, BDNF का स्तर काफी पार्श्व जानुवत नाभिक (LGN) और वयस्क enucleated चूहों 13 की बेहतर colliculus में downregulated रहे हैं. संरचनात्मक remodeling मध्यस्थता दूत अणुओं के रूप में कार्य जो प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों,, भी वयस्क चूहे दृश्य प्रणाली 14 की subcortical संरचनाओं में पाया गया. इसके अलावा, माउस में अलग subcortical दृश्य लक्ष्य संरचनाओं भर microglial और astroglial सक्रियण एक सप्ताह में 15 की एक विशिष्ट के बाद स्पष्टीकरण समय सीमा में होते हैं. साथ में, glial, संरचनात्मक और आणविक स्तर पर अलग subcortical प्रतिक्रियाओं में ऑप्टिक deafferentation परिणाम है. इन subcortical बावजूदप्रभाव, यह जरूरी कॉर्टिकल स्तर 16 पर प्रभाव फंसाना नहीं करता है. अगले वंचित दृश्य प्रांतस्था के लिए गैर दृश्य आदानों के सुदृढ़ीकरण के लिए अन्य संवेदी क्षेत्रों में संशोधनों सहित उल्लेखनीय, पार मोडल कॉर्टिकल plasticity, दोनों एक आँख के बाद हो (इ) 3,4,17,18 और दूरबीन 1,17 (इ) स्पष्टीकरण.
इसके अलावा दृश्य तंत्रिका विज्ञान के लिए योगदान से, deafferentation के एक प्रकार के रूप में स्पष्टीकरण केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के 19 न्यूरोप्रोटेक्टिव और neurodegenerative 20-22 गुणों के बीच संतुलन का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
स्पष्टीकरण प्रदर्शन करने के लिए विभिन्न प्रक्रियाओं पहले से ही साहित्य में वर्णित हैं. चूहों और चूहों में vivo में मेरे लिए कुछ तरीके के कारण कक्षीय मांसपेशियों और ऊतकों को 23-25 से अनावश्यक सेक्शनिंग को कम सीधा कर रहे हैं. ऐसे महाजन एट अल के रूप में अन्य प्रकाशनों. (2011) 5 का उपयोग कर एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान जीनोटाइप-phenotype सहसंबंध, संभावना पोस्टमार्टम अध्ययन करने के लिए आंखों की एक उच्च throughput संग्रह के लिए कुंद विच्छेदन. अपने उद्देश्य के लिए, विधि सुविधाजनक और तेज है. एक नहीं बल्कि आँखों से ही (जीवित पशुओं में) स्पष्टीकरण निम्नलिखित अभिवाही दृश्य मार्ग का अध्ययन करने के लिए opts हालांकि, जब इस विधि में विवो स्पष्टीकरण के लिए कम उपयुक्त है. इस तरह के एक स्थापित करने में, बाद के स्पष्टीकरण अस्तित्व उच्च महत्व का है. इसके अलावा, विवो क्षति और ऑप्टिक तंत्रिका के संरक्षण और कक्षीय ऊतक में कम से कम अनुकूल है. यहाँ, हम FAGUET एट अल द्वारा वर्णित एक करने के लिए, और इसी तरह एक वैकल्पिक स्पष्टीकरण विधि प्रस्तुत (2008) 26, कि कुछ लाभदायक गुण प्रदान करता है:. यह एक तेजी से पोस्ट ऑपरेटिव वसूली के साथ जुड़ा हुआ है और एक बहुत ही कम सीखने की सीमा की विशेषता है शोधकर्ताओं के लिए. आँख आकारिकी या दृश्य मार्ग अनुसंधान: सामान्य में, विभिन्न तरीकों बाद में अनुसंधान का फोकस के आधार पर पूरक हैं.
संक्षेप में ve_content ">, स्पष्टीकरण समस्थिति और पार मोडल मस्तिष्क plasticity, glial प्रतिक्रिया गुण, और अक्षतंतु स्थिरता की जांच की दिशा दृष्टि अनुसंधान से लागू किया जा सकता है. इस कल्पना अनुच्छेद में, हम इन विवो आंख स्पष्टीकरण के लिए एक व्यावहारिक और विश्वसनीय पद्धति में प्रदर्शन माउस.हमारे विधि के अनुसार एक सफल स्पष्टीकरण को करने के लिए विचार करने के लिए सबसे महत्वपूर्ण कदम हैं: 1) उचित आकार का एक घुमावदार और दाँतेदार टिप के साथ एक संदंश का उपयोग; 2) एक चिकनी और शुष्क सतह पर स्पष्टीकरण प्रदर्शन; और 3) धीरे धीरे कम से कम घर्षण के साथ दिशा में परिपत्र आंदोलनों को तेज.
एक प्रभावी परिणाम के लिए यह एक घुमावदार और दाँतेदार टिप द्वारा विशेषता एक उपयुक्त संदंश का उपयोग करने के लिए आवश्यक है (: माउस: वरीय टिप आकार 0.5 x 0.4 मिमी, चूहा: 2.15 x 1.3 मिमी). वक्रता नेत्रगोलक विस्थापन के बाद ऑप्टिक तंत्रिका के लिए एक आसान पहुँच के लिए अनुमति देता है और परिपत्र आंदोलनों प्रदर्शन जब सही हाथ नियुक्ति के लिए आवश्यक है. ऑप्टिक तंत्रिका पकड़े जब वे आवश्यक पकड़ की कमी के बाद से चिकना सुझावों की सिफारिश नहीं कर रहे हैं. परिपत्र आंदोलनों के दौरान ठीक से ऑप्टिक तंत्रिका पकड़ करने में विफलता नेत्र धमनी, आंख की गरीब टुकड़ी और इसलिए गरीब reproducibility का टूटना में यह परिणाम है.इसलिए यह विवो में विधि लागू करने के लिए एक बार अधिक से अधिक पशु कल्याण की गारंटी करने के क्रम में निपटने संदंश के अनुकूलन के लिए euthanized जानवरों पर पहले अभ्यास करने के लिए इस तकनीक की सिफारिश की है. सफल आंख स्पष्टीकरण हाल ही में भी मैन्युअल पशु शरीर मोड़ और संदंश स्थिर रखने के अलावा एक ही तकनीक का उपयोग हमारी प्रयोगशाला में चूहे में प्रदर्शन किया गया है.
तकनीक की एक सीमा है कि यह संभवतः रेटिना को नुकसान पहुंचा सकता है. इसलिए इस विधि ऊतक विज्ञान 5 प्रदर्शन करने retinas इकट्ठा करने के लिए कम उपयुक्त है. इसके अलावा, हमारे विधि नेत्रगोलक को हटाने या पलकों को काटने के बिना सॉकेट से विस्थापित होने की जरूरत है, क्योंकि आंख खोलने उम्र पोस्ट करने के लिए सीमित है.
कृन्तकों सहित विभिन्न प्रजातियों में आई स्पष्टीकरण, नियमित अक्सर पलकों को हटाने करना पड़ेगा जो वैकल्पिक तरीकों का उपयोग करते हुए और ऑप्टिक तंत्रिका 18,23-25 काटने प्रदर्शन किया है. इन methoडी एस अधिक आक्रामक हो जाते हैं और यहाँ वर्णित तकनीक की तुलना में अधिक सीखने की अवस्था है. हटाने या पलकों suturing की आवश्यकता के बिना, के बाद सर्जरी वसूली समय उच्च पशु कल्याण और अधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों में जिसके परिणामस्वरूप कम से कम है.
The authors have nothing to disclose.
We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.
Ketamine hydrochloride (Anesketin) | Dechra Veterinary Products (Eurovet) | BE-V136516 | |
Medetomidine hydrochloride (Domitor) | Orion Corporation (Janssen Animal Health) | BE-V151742 | |
Atipamezol hydrochloride (Antisedan) | Orion Corporation (Elanco Animal Health) | BE-V153352 | |
Meloxicam (Metacam) | Boehringer Ingelheim Vetmedica | N/A | |
Eye ointment (Fucithalmic) | Leo Pharma nv-sa | BE 144654 | |
Moria MC31 Forceps – Serrated Curved | Fine Science Tools | 11370-31 | For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated. |
Narrow Pattern Forceps – Curved | Fine Science Tools | 11003-13 | For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated. |
Hemostatic cotton wool | Qualiphar | N/A | Other hemostatic agents are equally suitable (e.g. Viscostat, #649, Ultradent Products) |