Kattestaartje zijn uiterst prikkelbaar en hebben een sterke vlucht-of-vechtreactie. Er wordt een hanteringsmethode beschreven die is geoptimaliseerd om de stress van de dieren te verminderen, waardoor kattestaartje toegankelijker worden als preklinisch model.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Het hanteren van de Cotton Rat in Studies voor de Pre-klinische evaluatie van Oncolytic Virussen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Oncolytische virussen zijn een nieuwe antikankertherapie met het vermogen om tumorcellen aan te vallen, terwijl gezonde cellen intact blijven. Voor het succes van deze strategie hebben recente studies aangetoond dat betrokkenheid van het immuunsysteem van de gastheer essentieel is. Daarom moet oncolytische virotherapie worden geëvalueerd binnen de context van een immuuncompetent model. Bovendien kan de studie van antitumor therapieën in getoleriseerde diermodellen de resultaten die in klinische proeven worden gezien, beter weerspiegelen. Kaottoratten, die vaak worden gebruikt om respiratoire virussen te bestuderen, zijn een aantrekkelijk model om oncolytische virotherapie te bestuderen, aangezien syngene modellen van mammacarcinoom en osteosarcoom goed gevestigd zijn. Er is echter een gebrek aan gepubliceerde informatie over de juiste behandelingsprocedure voor deze zeer opwindbare knaagdieren. De behandelings- en vangstbenadering die wordt geschetst, minimaliseert dierstress om experimenten te vergemakkelijken. Deze techniek is afhankelijk van het vermogen van de onderzoeker om kalm te blijven tijdens de behandeling en procedures tijdig uit te voeren. Ten slotte beschrijven we hoe kaottoraat mammatumorcellen worden voorbereid voor consistente subcutane tumorvorming en hoe intratumorale en intraperitoneale injecties worden uitgevoerd. Deze methoden kunnen worden toegepast op een breed scala aan studies die de ontwikkeling van de kaottoraat verder bevorderen als een relevant preklinisch model om antitumortherapie te bestuderen.
Inleiding
Oncolytische virus (OV) selectief repliceren in tumorcellen door gebruik biochemische verschillen tussen normale en tumorcellen 1,2. Er zijn twee soorten OVS; die geen mutatie vereisen selectieve oncolyse bereiken, genoemd natuurlijk voorkomende wildtype virussen en die welke moeten worden gemanipuleerd om selectieve oncolyse bereiken. De collectie van mutaties binnen een bepaald tumortype bepaalt de aard van de selectieve groei voordeel boven normale cellen voor OV 2. De veiligheid en voordeel van OVS is aangetoond in klinische proeven 3-7. Ondanks vooruitgang op het gebied van oncolytische virotherapy bestaan spleten tussen prekli....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
OPMERKING: De gebruikte protocollen zijn door onze institutionele Animal Research Ethics van Commissarissen goedgekeurd bij McMaster University volgens de Canadese Raad over Animal Care richtlijnen. Experimenten werden uitgevoerd aan de McMaster University Central Animal Facility.
1. Het kweken LCRT Cellen
- Cultuur LCRT cellen in Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 U / ml penicilline en 100 ug / ml streptomycine. Handhaaf cellen in T-150 weefselcultuur kolven bij 37 ° C en 5% CO2. Passage cellen, indien zij een 90% confluente ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Door de zeer opgewonden aard van katoenratten, vertrouwd met en gebruik procedures geoptimaliseerd om de stress van de dieren te verminderen gemak in het gebruik als een preklinisch diermodel. Gebruik van de juiste afhandeling technieken zullen ook risico's voor de onderzoeker te minimaliseren.
Bij het gebruik van katoen ratten is het noodzakelijk om kalm te blijven. De ratten zijn zeer prikkelbaar en proberen hun kooi ontsnappen. Gebruik van een verrijking buis en Nestlets zal ontsnappi.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Kattenkotten zijn zeer prikkelbaar en hebben een sterke vluchtreactie. Daarom moet er speciale zorg worden genomen om overmatige stress voor het dier te minimaliseren. De beschreven kooiopstelling zal een veilige en gemakkelijke vangst van de dieren mogelijk maken, waarbij de plaatsing van de verrijkingsbuis van het grootste belang is. Bij het opzetten van kooien, zorg ervoor dat de verrijkingsbuizen voldoen aan de grootte- en vormvereisten, en worden geplaatst in de juiste oriëntatie in de kooi. Het is ook belangrijk om.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs erkennen dat er geen financiële belangensconflicten zijn met betrekking tot dit onderzoek.
Dankbetuigingen
Breanne Cuddington heeft een fellowship van de Canadian Breast Cancer Foundation. Dit werk werd gesponsord door operationele subsidies van de Cancer Research Society en de Canadian Cancer Society Research Institute (voorheen de Canadian Breast Cancer Research Alliance). We danken Ann Tollefson (Saint Louis University School of Medicine) voor LCRT-cellen en Dr. Kathleen Delaney en Marion Corrick voor technische hulp bij het huisvesten en sederen van katoenratten.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Dulbecco’s modified Eagle’s medium | Gibco | 11965-092 | Mag elke merk gebruiken |
| 1X Phosphate Buffered Saline | Kan in lab worden bereid, filteren om te steriliseren | ||
| 200 mM L-glutamine | Gibco | 25030164 | Mag elke merk gebruiken |
| 100x Antibiotic-Antimycotic | Gibco | 15240-062 | Mag elke merk gebruiken |
| Fetal bovine serum | Quality Biological Inc. | 110-001-101HI | Mag elke merk gebruiken |
| T-150cm2 tissue culture flask | Fisher Scientific | 14-826-80 | Mag elke merk gebruiken |
| 1X TypLE Express | Life Technologies | 12604-013 | |
| 12-well cell culture plate, flat bottom | Fisher Scientific | 08-772-29 | Mag elke merk gebruiken, moet weefselkweekbehandeld zijn |
| alamarBlue | Life Technologies | DAL1025 | Mag een alternatief reagens gebruiken voor het bepalen van celviabiliteit |
| 8640 Teklad 22/5 Rodent diet | Harlan | 8640 | |
| 1/8” corncob rodent bedding | Harlan | 7092 | |
| Nestlets | Ancare | - | Gemaakt van pulped virgin katoenvezel, stofvrij en autoclaveerbaar |
| 50 mL Conical tubes | Fisher Scientific | 14-432-22 | Mag elke merk gebruiken, moet sterieel zijn |
| Isoflurane USP, 99.9 %, inhalation anesthetic | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | M60302 | |
| 70% Ethanol | Kan in lab worden bereid | ||
| 10 % Neutral Buffered Formalin | Sigma-Aldrich | HT501128 | Mag elke merk gebruiken |
| NAPCO NapFlow 1200 Class II A/B3 Biosafety Microbiological Safety Cabinet (cell culture hood) | NAPCO | Model used not currently available | Mag elke merk gebruiken |
| Thermo Fisher Scientific Precision Heated Water Bath | Fisher Scientific | Model used not currently available | Mag elke merk gebruiken |
| [header] | |||
| Reichert Bright-line Hemacytometer | Sigma-Aldrich | Z359629 | Mag elke merk gebruiken |
| Typhoon Trio BioAnalyzer | GE Healthcare Life Sciences | Model used not currently available | Mag elke fluorescentieplaatlezer gebruiken |
| Tecan Safire2 Multi-detection Microplate Reader | Tecan | Model used not currently available | Mag elke fluorescentieplaatlezer gebruiken |
| Allegra 6R benchtop centrifuge | Beckman Coulter | 366816 | Mag elke merk gebruiken |
| Table Top Anaesthesia machine | VetEquip | Model used not currently available | Mag elke merk gebruiken, moet draagbaar zijn |
| Wahl Peanut Mini Clippers | Wahl | Mag elke merk kleine haarschaar gebruiken | |
| Insulin syringes 29 G x 1/2', 0.3 mL | BD | 329464 | Mag elke merk gebruiken. Insulinespuiten worden aanbevolen omdat ze injecties gemakkelijker maken door de taaie huid van de rat. |
| Cotton swabs | MedPro | 018-425 | Mag elke merk gebruiken |
| Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Fisher Scientific | 8940 | Mag elke merk gebruiken |
| Dissecting Tissue Forceps | Fisher Scientific | 13-812-41 | Mag elke merk gebruiken |
Referenties
- Cervantes-Garcia, D., Ortiz-Lopez, R., Mayek-Perez, N., Rojas-Martinez, A. Oncolytic virotherapy. Ann Hepatol. 7 (1), 34-45 (2008).
- Vaha-Koskela, M. J., Heikkila, J. E., Hinkkanen, A. E. Oncolytic viruses in cancer therapy. Cancer Lett. 254 (2), 178-216 (2007).
- Abril, C., et al.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
