Sıçan optik sinirine doğrudan enjeksiyon, rejeneratif araştırmalar için yararlıdır. Kafatasının açılmasını içermeyen bir sıçan optik sinirine doğrudan enjeksiyon için minimal invaziv bir teknik gösteriyoruz. Bu yöntem kullanılarak cerrahi komplikasyonlar en aza indirilir ve iyileşme daha hızlı olur.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Sıçan Optik Sinir içine Enjeksiyon için minimal invaziv Tekniği
Bu makalede
Özet
Özet
Sıçan optik siniri, kök hücre rejenerasyon araştırmaları için yararlı bir modeldir. Sıçan optik sinirine doğrudan enjeksiyon, kemik çıkarılması olmadan minimal invaziv bir ameliyatla merkezi sinir sistemine doğuma izin verir. Bu teknik, orbital sırttan minör fasyal diseksiyonu takiben, gözü nazikçe aşağı ve dışarı çekmek için konjonktival traksiyon sütürü kullanılarak optik sinirin görselleştirilmesi ve doğrudan enjeksiyonu için bir yaklaşımı tanımlar. Enjekte edilen bir optik sinirin temsili örnekleri, boyalı boncukların başarılı bir şekilde enjekte edildiğini göstermektedir.
Giriş
Optik sinir merkezi sinir sistemi (MSS) gibi optik nevrit, glokom ve travma olarak göz koşullar da dahil olmak üzere rejeneratif araştırma için ideal bir konum sağlar. Kök hücrelerin çeşitli enjeksiyonları ya aksonal sayısı artan ve / veya dejeneratif hastalıkların önlenmesi, etkinlik göstermiştir veya kayıp miyelin değiştirilmesi söz göstermiştir. 1,2
insan optik sinir yaklaşık 3.0-3.5 mm'lik bir çapa sahip kiazmada retinadan seyahat eden yaklaşık 1.200.000, paralel aksonlar içerir. 3 Laboratuarda insan hastalıklarının modellemek için, sıçan sık kullanılmaktadır. yetişkin sıçan optik sinir yaklaşık 0,5 mm çapınd....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
NOT: Bütün hayvan prosedürleri Johns Hopkins Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Anestezi makineleri gerektiği şekilde yıllık muayene ve kalibrasyonu gerektirir.
1. Anestezi ve Konumlandırma
- Anestezi.
- % 2-3 isofluorane ile anestezi altında tüm cerrahi prosedürleri gerçekleştirin. Ayak tutam ve solunum hızı ile anestezi uygun seviyede onaylayın. Sıçan, bir ayak tutam yanıt korkmak olmadığını kontrol edin.
NOT: Bir 'deki kaçınma çok geç anestezi belirtir ve başlamadan önce uzun anestezi veya daha yüksek isofluorane konsantrasyon gerektirebilir. Her 2 sn anestezi gösteren çok yavaş 1 nefes az bir solunum hızı ç....
- % 2-3 isofluorane ile anestezi altında tüm cerrahi prosedürleri gerçekleştirin. Ayak tutam ve solunum hızı ile anestezi uygun seviyede onaylayın. Sıçan, bir ayak tutam yanıt korkmak olmadığını kontrol edin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Deneyin sonunda, sıçanlar kurban edilmiş ve% 4 paraformaldehit ile perfüze. Optik sinirler dikkatli bir şekilde kesilir ve kriyostat bölümlere ayırma için monte edilmiştir. 2 Evans mavisi sitesi görselleştirmek için enjekte edilmiş, düşük güçte bir fare, tüm optik sinirin bir örneğini göstermektedir. ok enjeksiyon kesin konumunu tanımlar. Sinirden boya sınırlı difüzyon ile gösterildiği gibi bu diseksiyon enjeksiyonu bir kaç dakika içinde yapıldı. Diğer enjeksiyon olarak, birkaç saatlik .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Kök hücrelerin optik sinire doğrudan enjeksiyonu veya rejenerasyonu kolaylaştırmayı amaçlayan diğer ürünler, CNS'ye yapılan diğer enjeksiyon yöntemlerine kıyasla uygun bir model sağlar. Bu teknik daha az zaman alır, daha az toplam anestezi gerektirir, kafatası veya kemik dokusunun delinmesini veya çıkarılmasını önler, komplikasyon oranlarını azaltır ve ameliyat sonrası daha hızlı iyileşme sağlar.
Bu protokoldeki en kritik adımlar şunları içerir: 1. Optik sinir demetinin net bir şekilde görünt.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların bildirecek anlamlı bir açıklaması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma NeuralStem, Inc. ve Johns Hopkins Project RESTORE tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Lewis sıçan | Charles Nehri | 4 | Herhangi bir sıçan türü işe yarayacaktır. |
| Anestezi makinesi | Surgivet | CDS9000 | CDS 9000 Küçük Hayvan Anestezi Makinesi - Direk Montajlı |
| İnfüzyon pompası | Stoelting | 53129 | |
| Diseksiyon mikroskobu | Ulusal Optik | 409-411-1105 | |
| Fiber optik ışık kaynağı | Fisher Scientific | 12-562-21 | |
| Diseksiyon ve Stereotaksik Alet | Çalma | 51400 | |
| Pipet Çektirme | Kopf | 750 | |
| Pipetler | Dünya Hassas Aletleri | 18150-6 | |
| Tek kullanımlık neşter bıçakları | Harvard Aparatı | 810-15-021 | |
| İridektomi makası | Elektron Mikroskobu Bilimleri | Uniband LA-4XF |
Kaynaklar
- Dahlmann-Noor, A., Vijay, S., Jayaram, H., Limb, A., Khaw, P. T. Current approaches and future prospects for stem cell rescue and regeneration of the retina and optic nerve. Canadian journal of ophthalmology Journal canadien d'ophtalmologie. 45 (4), 333-341 (2010).
- Quigley, H. A., Iglesia, D. S.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
