Here we present a protocol outlining how to sample wooden specimens for the overall assessment of their growth structures. Macro- and microscopic preparation and visualization techniques necessary to generate well-replicated and highly resolved wood anatomical and dendroecological dataset, are described are described.
Dendroecological अनुसंधान एकल पेड़ और यहाँ तक कि पूरे वन पारिस्थितिकी प्रणालियों पर्यावरण परिवर्तन करने के लिए प्रतिक्रिया व्यक्त की और अंत में इस तरह के बदलाव को फिर से संगठित करने के लिए समझने के लिए कैसे पेड़ के छल्ले में संग्रहीत जानकारी का उपयोग करता है। इस बार में वापस वृद्धि विविधताओं का विश्लेषण और (उदाहरण के लिए) तापमान रिकॉर्ड करने के लिए विभिन्न पौधों के विशिष्ट मापदंडों correlating द्वारा किया जाता है। इन विश्लेषण में लकड़ी संरचनात्मक मापदंडों का घालमेल भी इंट्रा-वार्षिक संकल्प करने के लिए नीचे, पुनर्निर्माण और मजबूत होंगे। इसलिए हम बाद के सूक्ष्म विश्लेषण के लिए भी, नमूना तैयार है, और आम स्थूल विश्लेषण के लिए लकड़ी के नमूना विश्लेषण है, लेकिन करने के लिए पर एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इसके अलावा हम समय श्रृंखला विश्लेषण करती है समर्थन करने के लिए आम छोटे और बड़े नमूनों से उत्पन्न डिजिटल छवियों का विश्लेषण करने के लिए एक संभावित हल परिचय। वे वर्तमान में इस्तेमाल किया जा सकता है के रूप में प्रोटोकॉल बुनियादी कदम प्रस्तुत करता है। इस के अलावा, एक चल रही मौजूदा तकनीक में सुधार के लिए की जरूरत है, और नए टी का विकास होता हैechniques, रिकॉर्ड और अतीत और चल रहे पर्यावरण प्रक्रियाओं यों की। पारंपरिक लकड़ी संरचनात्मक अनुसंधान अनुसंधान के इस क्षेत्र को पारिस्थितिक जानकारी शामिल करने के लिए विस्तार किया जाना चाहिए। इस नए मापदंडों का विश्लेषण और वुडी पौधों की शारीरिक रचना पर विशिष्ट पर्यावरणीय कारकों की छोटी और लंबी अवधि के प्रभाव को समझने के लिए नए तरीके विकसित करने का इरादा है जो dendro-वैज्ञानिकों का समर्थन करेगी।
पेड़, साथ ही झाड़ियाँ, बौना झाड़ियाँ, और यहां तक कि जड़ी बूटी, अपने वातावरण में परिवर्तन से संबंधित कई गुना प्रतिक्रिया पैटर्न दिखा। इन नमूनों के मध्य 19 वीं सदी के बाद से वनस्पति विज्ञान और प्लांट फिजियोलॉजी के अधीन कर दिया गया है। वापस तो, वुडी पौधों पर अनुसंधान ज्यादातर पेड़ और एक पारिस्थितिकी संदर्भ 1 में संरचना और वार्षिक छल्ले की परिवर्तनशीलता के एक वर्णनात्मक विश्लेषण पर ध्यान केंद्रित किया। एंड्रयू Ellicott डगलस पेड़-अंगूठी अनुसंधान 2 के लिए पार से डेटिंग तकनीक का आविष्कार किया है, इस पारिस्थितिक संदर्भ कम या ज्यादा सटीकता से पुरातत्व में लकड़ी के निष्कर्षों की तारीख के लिए नई क्षमता से दबा दिया गया था। पहली बार के लिए क्रॉस-डेटिंग कैलेंडर वर्ष के लिए पेड़ के छल्ले के सटीक डेटिंग सक्षम है और अब तक अपने आवेदन 1 के सभी क्षेत्रों में पेड़-अंगूठी अनुसंधान की रीढ़ के रूप में माना जाता है।
समानांतर में, 19 वीं सदी के अंत के बाद से, लकड़ी शरीर रचना एक महत्वपूर्ण अनुसंधान अनुशासन में संबंधित हैं विकसितप्राकृतिक और व्यावहारिक विज्ञान 3 के कई अन्य क्षेत्रों के लिए डी। दो मुख्य डोमेन के स्थापित कर रहे हैं: लकड़ी प्रौद्योगिकी, फिजियोलॉजी, पैथोलॉजी, और पारिस्थितिकी 3,5 से संबंधित पुरातत्व 4 में लकड़ी की पहचान करने के लिए आधार है, जो व्यवस्थित लकड़ी शरीर रचना विज्ञान, और लागू लकड़ी शरीर रचना विज्ञान,।
पेड़-अंगूठी अनुसंधान में, dendroecology आजकल ऐसे भू-आकृतिक प्रक्रियाओं (dendrogeomorphology), तापमान और वर्षा के पुनर्निर्माण (dendroclimatology), जल स्तर में परिवर्तन (dendrohydrology) या भी ग्लेशियर के उतार चढ़ाव (के रूप में पर्यावरण के अध्ययन पर ध्यान केंद्रित कर पेड़-अंगूठी संबंधित अध्ययन को शामिल एक विषय के रूप में परिभाषित किया गया है dendroglaciology) 6। इस परिभाषा इंगित करता है, पेड़-अंगूठी विश्लेषण इस तरह के (i) के रिंग चौड़ाई 7,8, लकड़ी घनत्व 9 में वार्षिक विविधताओं का विश्लेषण करके अतीत जलवायु स्थितियों के रूप में डेटिंग और पर्यावरण प्रक्रियाओं के पुनर्निर्माण के क्षेत्र में तेजी से महत्वपूर्ण हो या 10 आइसोटोप, या है (द्वितीय) टीवह भू-आकृतिक प्रक्रियाओं 11 के अंतराल की पुनरावृत्ति। रिंग चौड़ाई विविधताओं और उनके समस्थानिक सामग्री के बारे में ये बहुत विस्तृत अध्ययन के छल्ले की शारीरिक संरचना का अध्ययन करने के लिए और अधिक विस्तार, IE में छल्ले विश्लेषण करने की जरूरत प्रदर्शित करता है। हालांकि, पर्यावरण परिवर्तन से संबंधित वार्षिक छल्ले के भीतर लकड़ी संरचनात्मक सुविधाओं का विस्तृत अध्ययन 12,13 दुर्लभ हैं। इन सूक्ष्म सुविधाओं 14 में जाना जाता है, वे शायद ही कभी dendroecological अनुसंधान के लिए एक सूक्ष्म स्तर पर लागू किया गया है। इसके अलावा, सटीक डेटिंग प्रयोजनों के लिए आवश्यक स्वाभाविक रूप से बड़े पेड़ों में इन विकास प्रतिक्रियाओं का सही समय, शायद ही कभी हाल ही में 15 प्रलेखित किया गया है।
ग्लोबल वार्मिंग से 16 के प्रभाव के बारे में, मौजूदा और नई तकनीकों के विकास के सुधार के लिए विशेष रूप से जलवायु प्रभाव अनुसंधान 11 के संदर्भ में, रिकॉर्ड और आवश्यक है अतीत और चल रहे पर्यावरण प्रक्रियाओं यों की।एक पारिस्थितिकी आधारित लकड़ी शरीर रचना से 17 परंपरागत लकड़ी संरचनात्मक अनुसंधान के विस्तार से, dendro-वैज्ञानिकों नए मापदंडों का विश्लेषण और वुडी पौधों 18 वर्ष की शारीरिक रचना पर विशिष्ट पर्यावरणीय कारकों की छोटी और लंबी अवधि के प्रभाव को समझने के लिए नए तरीके विकसित कर सकते हैं। विशिष्ट ड्राइवरों (उदाहरण के लिए, यांत्रिक बलों, जलवायु विविधताओं) से संबंधित व्यक्ति के छल्ले के भीतर अलग-अलग सेल मानकों में बदलाव के बारे में विस्तृत ज्ञान वृक्ष अंगूठी गठन में परिवर्तनशीलता को समझने के लिए बुनियादी आवश्यकता है। आम रिंग चौड़ाई माप की तुलना में, लकड़ी संरचनात्मक विविधताओं की पहचान श्रम और समय की बहुत आवश्यकता है कि और अधिक जटिल और विशाल तैयार करने की तकनीक की आवश्यकता है। नमूना काटने, धुंधला, और एम्बेडिंग की विस्तृत प्रक्रियाओं कई गुना कर रहे हैं और हमेशा अध्ययन 19 के उद्देश्य पर निर्भर हैं।
संख्या, आकार या distr के लिए कोनिफर या यहां तक कि संरचनाओं में अंगूठी चौड़ाई के macroscopic विश्लेषण के लिएहार्डवुड में जहाजों की ibution, एक नमूना की सतह सामान्यतः ठीक घर्षण कागज या विशेष पीस मशीनों 20 का उपयोग कर पॉलिश है। इस प्रक्रिया का एक नुकसान यह है कि आगे semiautomatic सूक्ष्म विश्लेषण 21 से बचाता है कि धूल के साथ व्यक्ति की कोशिकाओं के भरने है। नमूना की सतह एक रेजर ब्लेड या किसी अन्य तेज चाकू का उपयोग कर काट रहे हैं जब स्थूल नमूना तैयार करने के लिए सबसे अच्छा परिणाम प्राप्त कर रहे हैं।
छोटे नमूनों के लिए करते हैं, रेज़र ब्लेड एक उत्तम साधन हैं; कोर के रूप में बड़ा नमूने कोर की सारी हद से अधिक विमान सतहों के काटने की आवश्यकता है। Sanding के लिए इसके विपरीत, कोशिकाओं लगातार छवि विश्लेषण के लिए आगे की तैयारी के लिए सक्षम बनाता है, जो धूल से भरा नहीं कर रहे हैं। इसके अलावा, खुला सेल लुमेन, ठीक से कट सेल दीवारों, और पूरे नमूना के विमान सतह कोर के पूरे हद तक उच्च आवृत्ति densitometry 22 के आवेदन कर सकें। छवि के नमूने की सतह (सेल विश्लेषण के लिएदीवारों) अंधेरे स्याही का उपयोग दाग जा सकता है और खुले सेल लुमेन बाद में सेल की दीवार और लुमेन क्षेत्र 19,23 के बीच इसके विपरीत बढ़ाने के लिए सफेद चाक से भरा जा सकता है। इस बल्कि सरल तकनीक पोत आकार माप के लिए बड़ा सेल संरचनाओं की एक बुनियादी स्थूल आकलन सक्षम बनाता है।
विमान सतहों को काटने के लिए इन तकनीकों में स्थूल विश्लेषण के लिए पर्याप्त हैं। एक विस्तृत लकड़ी संरचनात्मक के लिए (यानी, सूक्ष्म) विश्लेषण, प्रेषित प्रकाश माइक्रोस्कोपी dendro विज्ञान में लागू सबसे आम तरीका है। जाइलम कोशिकाओं सेल प्रकार दृढ़ संकल्प, कोशिका विभाजन, सेल भेदभाव को शामिल जटिल प्रक्रियाओं के माध्यम से अंतर है, और कोशिका मृत्यु 24 क्रमादेशित। इन प्रक्रियाओं सेल संरचनात्मक विशेषताओं का निर्धारण होते हैं, जिस पर समय और दर के बाद से, इन प्रक्रियाओं को प्रभावित करने वाले पर्यावरणीय परिस्थितियों अंगूठी संरचना में संरचनात्मक विचलन उत्पन्न कर सकते हैं। इन विश्लेषण के लिए एक महत्वपूर्ण पूर्व शर्त के रूप मेंएस, माइक्रो वर्गों एक सूक्ष्म 19 के साथ तैयार रहने की जरूरत है। सेक्शनिंग के लिए नमूने की तैयारी, tracheid या फाइबर दिशा की दृश्यता महत्वपूर्ण है। microtomes फिसलने संचालित हाथ का उपयोग छवि के लिए आवश्यक 19 का विश्लेषण करती है के रूप में इस तकनीक को उच्च गुणवत्ता वाले वर्गों की सुविधा है, क्योंकि सूक्ष्म वर्गों में कटौती करने की सिफारिश की है। एक निश्चित अध्ययन के विशिष्ट उद्देश्य पर निर्भर करता है, सूक्ष्म वर्गों कोशिकाओं के अनुदैर्ध्य हद तक सीधा या समानांतर काट रहे हैं। इन वर्गों तो एक खुर्दबीन के नीचे फोटो खिंचवाने कर रहे हैं और विशेष छवि का उपयोग करके मापा सेल आयाम सॉफ्टवेयर का विश्लेषण करती है।
अभी हाल तक, सूक्ष्म वर्गों को तैयार करने की क्षमता छोटा सा नमूना आकार केवल (लगभग 1 सेमी एक्स 1 सेमी) करने के लिए प्रतिबंधित किया गया था। इस विशिष्ट वर्षों में गड़बड़ी के रूप में एकल घटनाओं का विश्लेषण करने के लिए स्वीकार्य है, लेकिन इस तकनीक पर्यावरण के पुनर्निर्माण के लिए आवश्यक विस्तारित समय श्रृंखला विश्लेषण की अनुमति नहीं है। यह प्रयास केवल महसूस किया जा सकता, नई कुशल और आर्थिक तैयारी प्रक्रियाओं और विश्लेषणात्मक तकनीकों के विकास के माध्यम से होगी। हाल के वर्षों में, स्विट्जरलैंड में स्विस फेडरल अनुसंधान संस्थान WSL पर पेड़-अंगूठी प्रयोगशाला के सदस्यों ने इस विषय पर गहन काम शुरू कर दिया है। नतीजतन, नए उपकरणों और विश्लेषण तकनीक पर्यावरण अनुसंधान विषयों की एक व्यापक श्रेणी के लिए लकड़ी संरचनात्मक सुविधाओं को एकीकृत करने के विचार का समर्थन करने के लिए विकसित किया गया है।
dendroecological अनुसंधान में लकड़ी शरीर रचना विज्ञान के एक सफल और टिकाऊ एकीकरण की चुनौतियों के अलावा कई गुना विश्लेषणात्मक समस्याओं से ज्यादातर के कारण तकनीकी पहलुओं को, कर रहे हैं। सिद्धांत नमूने उच्च गुणवत्ता माइक्रो वर्गों और उनके बाद के विश्लेषण के 19 बनाने के दृष्टिकोण से इन चुनौतियों को लेकर।
पहली नज़र में, कोर या यहां तक कि डिस्क के नमूने अब कई वर्षों के लिए जाना जाता रहा है कि एक साधारण प्रक्रिया है। गलत किया जा सकता है और नमूने में एक छोटा सा अशुद्धि बाद तैयारी और विश्लेषण चरणों के दौरान गंभीर समस्याओं में परिणाम कर सकते हैं कि कई चीजें हैं। अध्ययन का उद्देश्य माप-चौड़ाई की अंगूठी के लिए प्रतिबंधित है अगर ऐसी स्टेम अक्ष करने के लिए या एक अपूर्ण बढ़ाई कोरर का उपयोग कर सीधा बिल्कुल नहीं है कि Coring के रूप में लघु अशुद्धियों एक मुद्दा नहीं हैं। नमूनों की सूक्ष्म विश्लेषण के लिए लक्ष्य हालांकि, जब एक गलत नमूना दिशा की ऑप्टिकल विकृतियों में परिणाम हो सकता हैसेल दीवारों, कोर के भीतर सूक्ष्म दरारें में कुंद corers परिणामों का उपयोग करते हैं। इन कोर के सूक्ष्म वर्गों में कटौती करने की कोशिश कर रहा है जब एक परिणाम के रूप में, पतली वर्गों सिर्फ अलग गिर जाते हैं और एक कुशल तैयारी नहीं रह गारंटी है। एक ही माइक्रो-कोर नमूना लेने के लिए सच है। पंचर स्टेम लकड़ी में अंकित किया जाता है जब एक कुंद टिप उच्च दबाव का परिणाम देगा। नतीजतन cambial परत संकुचित हो जाएगा। cambial कोशिकाओं (चित्रा 5) फलस्वरूप निचोड़ा जाता है और विश्लेषण नहीं किया जा सकता है।
डिस्क नमूना वास्तव में विकास के रूपांतरों का विश्लेषण पर्यावरण परिवर्तन करने के लिए उन्हें संबंधित करने के लिए सबसे अच्छा है जब रणनीति है। दुर्भाग्य से यह आगे के विश्लेषण के लिए जांचा जा करने का इरादा सभी पेड़ों से डिस्क लेने के लिए बस असंभव है। फिर भी, विशेष रूप से उष्णकटिबंधीय वृक्षवलय कालक्रम के मामले में, स्टेम डिस्क की एक निश्चित राशि वेतन वृद्धि कोर के साथ संयोजन में की जरूरत है। डिस्क अंगूठी सीमाओं को परिभाषित करने के लिए एक आधार के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं और इस बात के लिए boundar समर्थन करने के लिएएँ वेतन वृद्धि कोर 12,27,28 का विश्लेषण के आधार पर परिभाषित किया।
काटने बनाम sanding के पेशेवरों और विपक्ष अक्सर 1,11,21 चर्चा कर रहे हैं। यह ऊपर उल्लेख किया है, सबसे अच्छा प्रक्रिया हमेशा अनुसंधान के सवाल पर निर्भर करता है और मानकों (स्थूल या सूक्ष्म) का विश्लेषण किया जाना है। समस्थानिक या रासायनिक विश्लेषण में एक और काम कर कदम में पेश कर रहे हैं, तो यह पूरे नमूना भर में सेल Lumina में भर सकते हैं कि sanding द्वारा बनाई गई घर्षण धूल, ध्यान से vacuuming या दबाव हवा से निकाल दिया जाता है कि अत्यंत महत्व का है।
सभी सूक्ष्म आगे के विश्लेषण के लिए नमूने तैयार करने के लिए सबसे उपयुक्त तरीका विश्लेषण के लिए माइक्रो वर्गों काट रहा है। सबसे पहले, अनुभाग तो संभावित आगे विश्लेषण के लिए किसी भी संदूषण के बिना रखा जा सकता है नमूना है, जो काट रहा है। दूसरा, इन वर्गों एकल कोशिका मापदंडों के उच्च संकल्प मापन के लिए अनुमति देते हैं। इसके अलावा, समय लेने वाली एम्बेडिंग से परहेजकोशिकाओं को स्थिर करने के लिए एक cornstarch के समाधान 26 का उपयोग करके तकनीक माइक्रो सेक्शनिंग में एक बड़ा लाभ है।
माइक्रो सेक्शनिंग का एक नुकसान यह है कि अभी भी लंबी तैयारी के समय में जिसके परिणामस्वरूप सीमित नमूना आकार है। वास्तविक समय श्रृंखला सदियों से या यहाँ तक कि सदियों से अधिक समय में वापस जा रहा विश्लेषण के लिए, आगे भी मौजूदा काटने उपकरणों 17,19, लेकिन इमेज प्रोसेसिंग और विश्लेषण के 18 विकसित करने की आवश्यकता नहीं है। इस दिशा में पहले कदम के शुरू में कोर पर विमान सतहों (चित्रा 1) में कटौती करने के लिए निर्मित कोर सूक्ष्म 21 का विकास होता है। हाल के परीक्षणों में इस डिवाइस (चित्रा 1) का उपयोग करते हुए पूरे कोर के सूक्ष्म वर्गों में कटौती करने की क्षमता का पता चला।
उच्च गुणवत्ता माइक्रो वर्गों के लिए एक प्रभावी छवि विश्लेषण के लिए बुनियादी सिद्धांत प्रदान करते हैं। एक खुर्दबीन के नीचे छवियों को लेने के लिए एक सामान्य प्रक्रिया 19 है, लेकिन उनके प्रभावी विश्लेषण अभी भी जरूरत है कि एक काम हैआगे 17 विकसित किया जाना है। सभी मौजूदा छवि विश्लेषण प्रणाली है कि वे और अधिक या कम तीव्रता तकनीशियन द्वारा नियंत्रित होने की जरूरत है, यानी अर्द्ध स्वचालित रहे हैं। कई मामलों में, छवियों को सही करने की जरूरत है या यहां तक कि नए छवियों छवि के भीतर सेल दीवार मोटाई बदलने के बिना सॉफ्टवेयर के द्वारा संरचनाओं का एक बेहतर पंजीकरण के लिए इसके विपरीत बढ़ाने के लिए किया जा सकता है।
ऐसे रॉक्सास 18, WinCell या ImageJ 29 के लिए विशिष्ट लिपियों के रूप में विशिष्ट छवि विश्लेषण उपकरणों जैसे सेल नंबर, सेल आयाम, सेल दीवार मोटाई और वार्षिक रिंग के भीतर सेल स्थिति के रूप में बुनियादी संरचनात्मक डेटा प्रदान करने में सक्षम हैं। एक dendroecological संदर्भ में प्रासंगिक हैं कई अतिरिक्त संरचनात्मक मेट्रिक्स ऐसी सबसे बड़ी नाली के आकार, नाली के आकार के वितरण, earlywood या नाली की पहली पंक्ति के आकार, (ऑप्टिकल) लकड़ी घनत्व, इंट्रा-वार्षिक रूप में इन बुनियादी माप से गणना की जा सकती नाली आकार और कोशिका दीवार की प्रोफाइलमोटाई, और नाली (एकान्त, गुणकों, आदि) के समूह के पैटर्न।
सॉफ्टवेयर रॉक्सास 18 का उपयोग करना, नाली Lumina (यानी, पानी का आयोजन सेल) और वार्षिक अंगूठी सीमाओं की रूपरेखा स्वचालित रूप से मान्यता प्राप्त है और नेत्रहीन मूल छवि पर ओवरले के रूप में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं। मुहैया कराने का साधन का पता लगाने एल्गोरिदम रंग, आकार और आकार के बारे में जानकारी, प्रत्येक नाली का स्थानीय संदर्भ पर अंगूठी की सीमाओं के लिए पता लगाने एल्गोरिदम के आधार पर कर रहे हैं। एक Toolbox हमें मैन्युअल रूप से सीधे, यानी, ओवरले सुविधाओं का संपादन को हटाने, जोड़ने और अंगूठी सीमाओं को संशोधित करने और नाली की रूपरेखा द्वारा इन परिणामों में सुधार करने के लिए अनुमति देता है। संपादन के बाद, सेल दीवार मोटाई (कोनिफर) सहित अंतिम डेटा उत्पादन, स्वचालित रूप से उत्पन्न होता है और एक स्प्रेडशीट में बचाया। पूरी तरह से स्वचालित प्रणाली वर्तमान में एक भी नहीं अपेक्षाकृत सरल संरचना दिखा कोनिफर के लिए उपलब्ध नहीं हैं, लेकिन यह भविष्य के विकास के लिए एक लक्ष्य है। यह दृढ़ता से फू का समर्थन करेगीसमय श्रृंखला में लकड़ी संरचनात्मक मापदंडों के डालूँगा एकीकरण का विश्लेषण करती है।
The authors have nothing to disclose.
The authors would like to acknowledge the effort of Sandro Lucchinetti (Schenkung Dapples, Zürich) for constructing the devices needed to guarantee progress in sample preparation.
Increment corer | http://www.haglofinc.com/index.php?option=com_content&view=article &id=57&Itemid=88&lang=en |
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Core-Microtome | http://www.wsl.ch/dendro/products/microtomes/index_EN | ||
Laboratory microtome | http://www.wsl.ch/dendro/products/microtomes/index_EN | ||
Trephor micro corer | http://intra.tesaf.unipd.it/Sanvito/trephorEn.asp | ||
Nawashin solution | Ten parts 1% chromic acid, four parts 4% formaldehyde and one part acetic acid | ||
Picric-Anilin blue | One part saturated aniline blue and four parts Trinitrophenol dissolved in 95% ethanol | ||
Safranin | Empirical Formula (Hill Notation) C20H19ClN4 | ||
Astra-blue | Empirical Formula (Hill Notation) C47H52CuN14O6S3 | ||
Ethanol | Linear Formula CH3CH2OH | ||
Xylol (Xylene) | Linear Formula C6H4(CH3)2 | ||
Canada Balsam | Embedding solution for microscopy | ||
Roxas Software | http://www.wsl.ch/dienstleistungen/produkte/software/roxas/index_EN | ||
ImageJ Software | http://imagej.nih.gov/ij/ | ||
WinCell | http://imagej.nih.gov/ij/ |