Mesenteric लिम्फ वाहिनी cannulated चूहे मॉडल: आंतों लिम्फेटिक दवा परिवहन के आकलन के लिए आवेदन
Summary
Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.
Abstract
आंतों लसीका प्रणाली द्रव परिवहन, लिपिड अवशोषण और प्रतिरक्षा समारोह में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। लसीका बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी पर एकाग्र कि लसीका वाहिकाओं और नोड्स की एक श्रृंखला के माध्यम से छोटी आंत से सीधे बहती है। Mesenteric लिम्फ वाहिनी के cannulation इस प्रकार आंत से बह mesenteric लिम्फ के संग्रह के लिए सक्षम बनाता है। Mesenteric लिम्फ और लिपोप्रोटीन अंश (लिपिड, lipophilic अणुओं और एपीओ-प्रोटीन) (जैसे साइटोकिन्स और पेट हार्मोन के रूप में तरल पदार्थ, पेप्टाइड्स और प्रोटीन) प्रतिरक्षा कोशिकाओं (99% लिम्फोसाइटों), जलीय अंश की एक सेलुलर अंश के होते हैं। mesenteric लिम्फ वाहिनी केन्युलेशन मॉडल इसलिए लसीका प्रणाली के माध्यम से एकाग्रता और आंत से कारकों की एक श्रृंखला के परिवहन की दर को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। विभिन्न चुनौतियों के जवाब में इन कारकों में परिवर्तन (जैसे, आहार, एंटीजन, ड्रग्स) और रोग में (जैसे, सूजन आंत्र रोग, एचआईवी, मधुमेह) भी कर सकते हैं खई निर्धारित की। ब्याज के विस्तार के क्षेत्र में एक आंतों लिपिड अवशोषण रास्ते के साथ संबद्ध है कि मौखिक रूप से प्रशासित lipophilic दवाओं और prodrugs के अवशोषण में लसीका परिवहन की भूमिका है। यहाँ हम का वर्णन है, विस्तार से, आंतों की प्रसव के बाद कई घंटे के लिए लसीका प्रणाली के माध्यम से दर और लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन की हद के मूल्यांकन के लिए सक्षम बनाता है जो एक mesenteric लिम्फ वाहिनी cannulated चूहे मॉडल। विधि लिम्फ में अन्य मानकों की माप करने के लिए आसानी से अनुकूल है। हम प्रयोगात्मक सफलता की पुष्टि करें और प्राप्त डेटा की व्याख्या करने के लिए पर शिक्षा प्रदान करने के लिए इस जटिल शल्य चिकित्सा पद्धति की स्थापना जब से सामना हो सकता है कि कठिनाइयों का विस्तृत विवरण है, साथ ही विफल रही है और सफल प्रयोगों से प्रतिनिधि डेटा प्रदान करते हैं।
Introduction
लसीका प्रत्येक छोटी आंतों विल्ली एक के भीतर निहित हैं कि एकल lacteals पर निकलती है कि एक यूनिडायरेक्शनल प्रक्रिया के माध्यम से छोटी आंत से बहती है। Lacteals इस प्रकार के तरल पदार्थ, अणुओं और कोशिकाओं और लसीका गठन के लिए अपेक्षाकृत पारगम्य हैं lacteals में इन कारकों के प्रवेश के साथ शुरू होती है। lacteals में प्रारंभिक लिम्फ बाद में लसीका microvessels का एक नेटवर्क है, संग्रह (अभिवाही) लसीका वाहिकाओं, mesenteric लिम्फ नोड्स और अंततः के बाद नोडल (अपवाही) लसीका वाहिकाओं की एक श्रृंखला के माध्यम से आंत से बहती है। नोड्स के भीतर, लिम्फ विनिमय खून से नोड में प्रवेश नोड निवासी प्रतिरक्षा कोशिकाओं के रूप में अच्छी तरह के रूप में सामग्री के साथ होता है, जहां दिमाग़ी साइनस की एक श्रृंखला के माध्यम से गुजरता है। छोटी आंत से बह सभी लिम्फ अंततः अपवाही बेहतर mesenteric लिम्फ वाहिनी और बाद में Cisterna chyli में converges। Cisterna chyli भी लिम्फ दुम परिधि के ऊतकों, ईशान intest जमा करता हैinal, यकृत और काठ क्षेत्रों और मध्यस्थानिका और शरीर के कपाल भागों से लसीका के साथ मिलकर वक्ष लसीका वाहिनी में मिलती है। वक्ष लसीका वाहिनी बाईं आंतरिक कंठ और अवजत्रुकी नसों के जंक्शन पर शिरापरक प्रणाली में सीधे लिम्फ खाली। बेहतर mesenteric लिम्फ डक्ट से सीधे लिम्फ के संग्रह में सक्षम बनाता है जो यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल, इस प्रकार आंतों लसीका प्रणाली के माध्यम से प्रणालीगत (सामान्य) परिसंचरण को आंत से सीधे गुजर विभिन्न कारकों का विश्लेषण की सुविधा।
आंतों लसीका प्रणाली को सौंपा प्रमुख शारीरिक कार्यों, द्रव संतुलन बनाए रखने के लिए लिपिड और lipophilic अणु अवशोषण की सुविधा के लिए, और उचित प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया एक सक्षम करने के लिए कर रहे हैं। ट्यूमर कोशिकाओं और वायरस भी 2-4 और महत्वपूर्ण परिवर्तन कई भड़काऊ और चयापचय विकृतियों 5-7 में lymphatics के भीतर होते आंतों lymphatics के माध्यम से प्रचार। सकताअन्त्रपेशी विभिन्न कोशिकाओं और अणुओं की एकाग्रता और परिवहन दर की एक आंत्र lymphatics के माध्यम से थोक द्रव का प्रवाह के विश्लेषण के साथ ही मात्रा का ठहराव के लिए सक्षम बनाता भीतर mesenteric लिम्फ वाहिनी के nulation लिम्फ इकट्ठा करने के लिए। विभिन्न चुनौतियों (जैसे, आहार, एंटीजन, ड्रग्स) और रोग मॉडल में के जवाब में एकाग्रता या इन कारकों में से पारगमन में परिवर्तन (जैसे, कोलाइटिस, एचआईवी, मधुमेह) भी मूल्यांकन किया जा सकता है। यह बड़े पैमाने पर विश्लेषण किया है और यहां की तुलना की जा सकती है जो प्रत्येक लिम्फ घटक वर्णन करना असंभव है जबकि, mesenteric लिम्फ simplistically जलीय, लिपिड और सेलुलर चरणों के होते हैं। जलीय चरण में ब्याज की घटकों जैसे एंटीजन या tolerogens 8, ऐसे साइटोकिन्स और मस्तूल सेल मध्यस्थों 9, और इस तरह के incretins के रूप में 10 चयापचय मध्यस्थों के रूप में प्रतिरक्षा दूत के रूप में पेप्टाइड्स और प्रोटीन शामिल हैं। बाद के नोडल mesenteric लिम्फ के सेलुलर अंश lymphocyt की (99% से अधिक) लगभग पूरी तरह से होते हैंतों 11। विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिकाओं (वृक्ष के समान कोशिकाओं, मस्तूल कोशिकाओं, आदि) के पूर्व नोडल मेसेंतेरिक lymphatics प्रवेश लेकिन नोड 12 के भीतर रहते हैं। अभिवाही लसीका के भीतर कोशिकाओं ब्याज की हैं, तो यह mesenteric लिम्फ को हटाने के माध्यम से इन कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए संभव है mesenteric लिम्फ वाहिनी 12 की केन्युलेशन से पहले कई दिनों नोड्स। इस रास्ते में अभिवाही और अपवाही लसीका नलिकाओं सीधे जुड़े हुए हैं और अभिवाही लसीका में लसीका कोशिकाओं mesenteric लिम्फ वाहिनी में सीधे गुजरती हैं। आंतों lymphatics के माध्यम से गुजर विभिन्न प्रतिरक्षा कोशिकाओं के पारगमन और फेनोटाइप इस प्रकार की जांच की जा सकती है। शायद तिथि करने के लिए mesenteric लिम्फ इकट्ठा करने के लिए उद्धृत सबसे आम कारण है, हालांकि, आंतों प्रसंस्करण, अवशोषण और आहार लिपिड और lipophilic अणुओं 10 के परिवहन का अध्ययन है।
घूस के बाद, आहार लिपिड उदाहरण के लिए, ट्राइग्लिसराइड से फैटी एसिड और monoglyceride, phosp करने के लिए (पच जाता हैफैटी एसिड और lysophospholipid, और फैटी एसिड और कोलेस्ट्रॉल, आदि) के लिए कोलेस्ट्रॉल एस्टर को holipid और पित्त से amphiphiles के अलावा के माध्यम से छोटे मिसेल और vesicular संरचनाओं में आंत्र लुमेन भीतर छितरी (फॉस्फोलिपिड, कोलेस्ट्रॉल और पित्त लवण) और की कार्रवाई अग्नाशय एंजाइमों 10,13। यहाँ से वे enterocytes में अवशोषित कर रहे हैं। अवशोषित घटकों का एक अनुपात अवशोषण कोशिकाओं (enterocytes) के भीतर ट्राइग्लिसराइड्स, फॉस्फोलिपिड और कोलेस्ट्रॉल एस्टर फार्म करने के लिए फिर से esterified कर रहे हैं। ये फिर से esterified लिपिड स्रावित पित्त, श्लैष्मिक लिपिड पूल या आंतों रक्त की आपूर्ति 13 से exogenously किया जाता लिपिड घटकों और अंतर्जात लिपिड घटकों के संयोजन से इकट्ठा कर रहे हैं। यहाँ से esterified लिपिड या तो enterocytes भीतर जमा हो जाती है या एक साथ विभिन्न apoproteins और अन्य lipophilic अणुओं के साथ आंतों लिपो प्रोटीन (chylomicrons, बहुत कम घनत्व लिपो प्रोटीन (वीएलडीएल)) (में इकट्ठे <eएम> जैसे, विटामिन) 10,13। आंतों lacteals आंतों रक्त केशिकाओं की तुलना में उनके प्रवेश के लिए अधिक पारगम्य हैं के रूप में enterocytes बाहर निकलने के बाद, लिपो प्रोटीन विशेष रूप से मेसेंतेरिक लसीका प्रणाली के माध्यम से प्रणालीगत संचलन को आंत से ले जाया जाता है। अवशोषित लिपिड घटकों का एक अनुपात भी, जुड़े एकल, गैर लिपोप्रोटीन के रूप में रक्त केशिकाओं और पोर्टल शिरा के माध्यम से प्रणालीगत संचलन को आंत से पहुँचाया 14 अणु होते हैं। सामान्य में, हालांकि, पोर्टल शिरा परिवहन मार्ग लघु और मध्यम श्रृंखला लंबाई लिपिड के अवशोषण में केवल एक महत्वपूर्ण खिलाड़ी है।
mesenteric लिम्फ का संग्रह इस प्रकार आंत से लिपो प्रोटीन और संबद्ध घटक (लिपिड, lipophilic अणु, एपीओ-प्रोटीन) के परिवहन के आकलन के लिए सक्षम बनाता है। लिपो प्रोटीन quantitated और mesenteric लिम्फ लिपो प्रोटीन, सामान्य रूप में, एक nascen में हैं कि लाभ के साथ होती जा सकता हैटी राज्य वे बड़े पैमाने पर इस तरह के लिपोप्रोटीन लाइपेस 15 के रूप में प्रणालीगत एंजाइमों द्वारा संशोधित नहीं किया गया है के बाद से। Mesenteric लिम्फ cannulated चूहे मॉडल शायद ऐतिहासिक दृष्टि से सबसे बड़े पैमाने पर आंत से लिपिड / लिपोप्रोटीन परिवहन के विश्लेषण के लिए वर्णित किया गया है, whilst ब्याज के विस्तार के एक क्षेत्र lipophilic दवाओं, prodrugs और अन्य xenobiotics 13,16 के परिवहन में lymphatics की भूमिका है जो यहाँ वर्णित मॉडल का ध्यान केंद्रित है। (आम तौर पर लंबी श्रृंखला ट्राइग्लिसराइड> 50 मिलीग्राम / ग्राम में प्रवेश पी> 5 और घुलनशीलता के साथ उन अपवादों को स्पष्ट कर रहे हैं, हालांकि) lipophilic दवाओं 17,18, 19 और अन्य xenobiotics 13,16 या तो निष्क्रिय या द्वारा आंतों lymphatics के लिए पहुँच प्राप्त कर सकते हैं prodrugs सक्रिय रूप से आंतों लिपोप्रोटीन परिवहन रास्ते 19 में एकीकृत।
चूहे mesenteric लिम्फ केन्युलेशन तकनीक इस तरह कई आवेदन किया है। Bollman एट अल। पहले एक techniq वर्णितमॉडल में बदलाव की तो एक नंबर वर्णित किया गया है के बाद से UE। 1948 20 में चूहों में mesenteric लिम्फ वाहिनी cannulate करने के लिए। चूहा विभिन्न एनेस्थेटिक्स 21,22 साथ anaesthetized है जब उदाहरण के लिए, संग्रह हो सकता है, या होश में राज्य में whilst 23,24 आगे बढ़ 15 या स्वतंत्र रूप से रोका। (- 5 मिलीलीटर / घंटा आम तौर पर 0) 25 चूहे अलग पुनर्जलीकरण समाधान और इस तरह के पेट, आंत या parenterally में अलग दरों पर लिपिड और दवा फार्मूलों के रूप में अन्य पदार्थों प्रशासित किया जा सकता है। कुछ अध्ययनों में वक्ष लसीका वाहिनी के बजाय mesenteric लिम्फ वाहिनी वक्ष लसीका वाहिनी भी एक दूसरे से लसीका प्राप्त करता है, क्योंकि यह ब्याज की कारक पर निर्भर करता है, छोटी आंत से पारगमन overestimate सकता है, हालांकि lymphatics के माध्यम से आंत से परिवहन अनुमान लगाने के लिए cannulated है क्षेत्रों 22,26। लसीका केन्युलेशन मॉडल भी चूहों 15,27, मिनी गड़बड़ी सहित कई अन्य प्रजातियों में वर्णित किया गया हैजी एस 12, भेड़ 28,29, सूअरों 30 और कुत्तों 31। हालांकि, चूहे मॉडल सबसे व्यापक रूप से और लगातार उद्धृत है। होश में 25 में लसीका का संग्रह द्वारा पीछा या 22 चूहों और चूहों 15,27 anaesthetized mesenteric लिम्फ वाहिनी के केन्युलेशन के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल पहले प्रकाशित किया गया है और रुचि पाठक इन प्रोटोकॉल को निर्देश दिया है। इस प्रोटोकॉल एक कल्पना प्रारूप में तकनीक का प्रदर्शन करने के लिए सबसे पहले है।
लसीका cannulated चूहे मॉडल, खर्च के मामले में सर्जरी और नैतिक विचारों की आसानी बड़ा पशु मॉडलों से अधिक लाभ है। माउस मॉडल की तुलना में जब माउस मॉडल ट्रांसजेनिक जानवरों 27 में और अधिक विस्तृत अध्ययन के लिए सक्षम बनाता है, हालांकि mesenteric लिम्फ केन्युलेशन सर्जरी भी चूहे में आसान है। बहरहाल, चूहे मॉडल, शरीर क्रिया विज्ञान में मतभेद के साथ जुड़े विशेष रूप से उन है कि, सीमा extrapolat की कुछ सीमाएं हैंअन्य पूर्व नैदानिक और नैदानिक स्थितियों पर आयन। उदाहरण के लिए, चूहे पित्त प्रवाह में निरंतर और उच्च प्रजाति के भोजन में जबकि भोजन का सेवन से स्वतंत्र है या लिपिड पित्त प्रवाह 32 को प्रोत्साहित। यह बड़ी प्रजाति और मनुष्यों में देखा जाता है कि प्रतिबिंबित चूहे में प्रतिनिधि पूर्व और बाद खाने का वातावरण प्राप्त करने के लिए चुनौतियां पैदा करता है। यथार्थवादी मानव खुराक के प्रशासन के 25 रूपों के बाद लसीका परिवहन का आकलन करने के लिए जब दवा वितरण के अध्ययन के लिए, बड़ी प्रजाति भी पसंद किया जा सकता। हाल के एक अध्ययन में, mesenteric लिम्फ में लिपिड परिवहन दरों प्रजातियों 27 के पार लिपिड परिवहन डेटा extrapolating में कुछ विश्वास प्रदान करता है जो एक बराबर द्रव्यमान और लिपिड के प्रकार के प्रशासन के बाद प्रजातियों (माउस, चूहे, कुत्ते) के पार तुलनीय होना पाया गया है। हालांकि, पशु आकार (यानी, कुत्ता> चूहा> माउस) के क्रम में रैंक एक मॉडल lipophilic दवा, halofantrine के परिवहन,। एक स्केलिंग कारक इस प्रकार पूर्व के लिए आवश्यक हो सकता हैअन्य प्रजातियों के चूहे से लसीका दवा परिवहन डेटा trapolate।
लसीका केन्युलेशन मॉडल की एक सीमा है, सामान्य रूप में, लसीका वाहिकाओं पोत 33 cannulated है एक बार बदल रहा है जो किसी दबाव ढाल के खिलाफ काम के बाद से लसीका प्रवाह और परिवहन संशोधित कर सकता है एक लसीका वाहिनी से सीधे कि निष्क्रिय लिम्फ संग्रह है। लसीका केन्युलेशन मॉडल भी तकनीक के साथ अपरिचित हैं कि प्रयोगशालाओं में स्थापित करने के लिए मुश्किल हो सकता है। वैकल्पिक मॉडल इस प्रकार वर्णित किया गया है। उदाहरण के लिए, ऐसे लिपो प्रोटीन और lipophilic अणुओं के रूप में आंतों लसीका प्रणाली के माध्यम से कारकों के पारगमन, परोक्ष रूप से रक्त का संग्रह के माध्यम से अध्ययन किया गया है। ऐसा ही एक मॉडल मौखिक मौजूदगी में प्रशासन और अवरोधकों के अभाव निम्नलिखित लिपिड और / या दवाओं के रक्त सांद्रता की तुलना शामिल है (उदाहरण के लिए, Colchicine, Pluronic L81, cycloheximide) लसीका परिवहन 34 ब्लॉक कि आंतों लिपोप्रोटीन उत्पादन की। लाभरक्त के नमूनों के संग्रह के माध्यम से परोक्ष रूप से लसीका परिवहन यों कि मॉडलों के इनवेसिव सर्जरी 35 की आवश्यकता नहीं है के रूप में यह मानव में लसीका परिवहन के कुछ मूल्यांकन सक्षम बनाता है। हालांकि, लसीका परिवहन के अवरोधकों विशिष्ट नहीं हैं और lymphatics के माध्यम से ले जाया जाता है कारक है कि पतला और इस तरह के आकलन पेचीदा जो प्रणालीगत संचलन में संशोधित कर रहे हैं। इन विट्रो विकल्प भी वर्णित किया गया है। उदाहरण के लिए, Caco-2 सेल या पृथक enterocyte संस्कृतियों और अधिक विस्तार में lymphatics 36-38 में प्रवेश कि अणुओं की आंतों स्राव अध्ययन करने के लिए उपयोग किया गया है। मानव आंतों microenvironment के अधिक प्रतिनिधि है कि एक उन्नत इन विट्रो मॉडल भी हाल ही में 39 में वर्णित किया गया। इस मॉडल में एक लसीका endothelial सेल परत lymphatics में आंत से पदार्थ के हस्तांतरण के बारे में अधिक विस्तृत विश्लेषण के लिए सक्षम बनाता है जो Caco-2 कोशिकाओं के साथ सह सुसंस्कृत है। हालांकि, vitr मेंओ सिस्टम सेल विनिमय प्रवाह की कमी है और एक आंत्र लुमेन और अंतर्निहित रक्त और लसीका संवहनी आपूर्ति के साथ यानी एक दूसरे का संबंध हस्तांतरण। एक वैकल्पिक दृष्टिकोण में, Kassis एट अल। पोत संकुचन, लसीका प्रवाह और मेसेंतेरिक लसीका वाहिकाओं 33 में फ्लोरोसेंट लिपिड सांद्रता के बीच मात्रात्मक तुलना में सक्षम बनाता है जो सीटू इमेजिंग प्रणाली में एक दोहरे चैनल (उच्च गति उज्ज्वल क्षेत्र वीडियो और प्रतिदीप्ति) की स्थापना की। इन विट्रो प्रणालियों में ऊपर उल्लिखित पर इस मॉडल का एक लाभ यह lymphatics के माध्यम से प्रतिरक्षा कोशिकाओं के पारित होने की सटीक ट्रैकिंग सक्षम बनाता है। बड़े पैमाने पर लिपिड (या दवा) परिवहन के निरपेक्ष माप, हालांकि, अभी तक इमेजिंग तरीकों का उपयोग कर स्थापित कर दिया। इन विट्रो और सिलिको में विशेष रूप से भी 40-42 प्रकाशित किया गया है आंतों lymphatics के माध्यम से lipophilic दवा परिवहन की हद तक की भविष्यवाणी करने के लिए दृष्टिकोण नहीं कर रहे हैं। कई ग के उदाहरण के लिए, पूर्व vivo आत्मीयताप्लाज्मा chylomicrons के लिए ompounds विवो 41 में उनके लसीका परिवहन के साथ काफी अच्छी तरह से सहसंबंधी पाया गया था। बाद में, एक ही समूह के कई भौतिक गुणों 40 के आधार पर chylomicrons के लिए दवा आत्मीयता की भविष्यवाणी करने सिलिको मॉडल में एक की स्थापना की। होल्म एट अल। भी एकमुश्त आणविक वर्णनकर्ता 42 के आधार पर lipophilic यौगिकों के लसीका परिवहन की भविष्यवाणी करने सिलिको मॉडल में एक अपेक्षाकृत जटिल स्थापना की। इन मॉडलों को अज्ञात दवाओं के लसीका परिवहन की हद तक की भविष्यवाणी करने के लिए एक उपयोगी दृष्टिकोण प्रदान कर सकता है। दवाओं की और विभिन्न प्रयोगशालाओं के पार एक विस्तृत श्रृंखला के साथ मॉडल की मान्यता, हालांकि, उनकी शुद्धता और reproducibility पुष्टि करने के लिए आवश्यक हो जाएगा।
Mesenteric लिम्फ वाहिनी के cannulation इस प्रकार सीधे छोटी आंत और कारकों (कोशिकाओं, प्रोटीन की जटिल सरणी के पारगमन दर draining लिम्फ की सामग्री की जांच करने के लिए एकमात्र साधन बनी हुई है,एक vivo स्थिति में लिम्फ में पेप्टाइड्स, लिपिड, ड्रग्स)। इस के साथ साथ हम mesenteric लिम्फ और anaesthetized चूहों से प्रणालीगत रक्त का संग्रह में सक्षम बनाता है कि mesenteric लिम्फ वाहिनी और मन्या धमनी की केन्युलेशन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। प्रतिनिधि डाटा मॉडल मेसेंतेरिक लसीका प्रणाली के माध्यम से आंत से लिपिड और नशीली दवाओं के परिवहन की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि कैसे प्रदर्शित करता है। यह मॉडल और एक समस्या निवारण गाइड स्थापित करने में सामना किया जा सकता है कि कठिनाइयों की चर्चा के बाद है। एक बार स्थापित मॉडल आंतों लसीका परिवहन की जांच के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है।
Protocol
Representative Results
Discussion
चूहे mesenteric लिम्फ केन्युलेशन मॉडल विभिन्न पदार्थों की चुनौती के लिए एकाग्रता और विभिन्न कोशिकाओं और आंत से लसीका में और जवाब में पाए जाते हैं कि इन में परिवर्तन (जैसे लिपिड और दवाओं के रूप में) के अणुओं के…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Funding from the Australian Research Council (ARC) and National Health and Medical Research Council (NHMRC) is gratefully acknowledged.
Materials
| Sterile saline | Baxter healthcare | AHB 1307 | Any brand can be used. Example here is Baxter 100 ml saline bags, box of 50 |
| 70 % ethanol in water | Any | Any brand can be used | |
| Chlorhexidine gluconate solution (Microshield 4) | Livingstone International | JJ60243L | Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L |
| Betadine solution | Livingstone International | BU0510 | Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =BU0510 |
| Ilium Ketamil (Ketamine 100 mg/ml) | PROVET VICTORIA | KETA I 1 | http://www.provet.com.au/ |
| Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml) | PROVET VICTORIA | TRO-3828 | http://www.provet.com.au/ |
| ACP 10 Injection (Acepromazine 10 mg/ml) | PROVET VICTORIA | VTG-DACP010020 | http://www.provet.com.au/ |
| Sodium pentobarbitone | PROVET VICTORIA | 24529 | Any brand can be used. Example here is Lethabarb® 325 mg/ml sodium pentobarbitone, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au |
| Heparin (35000I.U. in 35 mL) | Sigma Pharmaceuticals | 337220 | http://sigmaco.com.au/ |
| Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disodium salt dihydrate | Sigma-Aldrich | E1644 | Any brand can be used. Example here is disodium salt of EDTA from Sigma. |
| Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.96 mm x i.d. 0.58 mm | Microtube extensions | PE8050 | Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.8×0.5 mm, 30 m |
| Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.8 mm x i.d. 0.5 mm | Microtube extensions | PE9658 | Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.96×0.58 mm, 30 m |
| Ruler | Any | Any brand can be used | |
| Markers | Any | Any brand can be used | |
| Cigarette lighter | Any | Any brand can be used | |
| Cyanoacrylate glue | Any | Any brand can be used | |
| 23 gauge needles | Livingstone International | DN23GX0.75LV | Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV |
| 25 gauge needles | Livingstone International | DN25GX1.0LV | Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV |
| 1 ml syringe | Livingstone International | T3SS01TA | Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA |
| 10 ml syringe | Livingstone International | T3SS10SA | Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA |
| Gauze swabs | Livingstone International | GSC075 | Any brand can be used and cut to required size. Example here is gauze swabs cotton filled 7.5×7.5 cm, 8 ply. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075 |
| Cotton buds | Livingstone International | CTAST075DP | Any brand can be used. Example here is Livingstone cotton applicator plastic double tipped. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP |
| Heating pad | Ratek | WT1 | Any brand that keeps temperature at 37C can be used. Example here is Ratek warming tray. |
| Surgical light | Harvard Apparatus | 72-0215 with 72-0267 | Any brand can be used. Example here is Harvard apparatus V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_ -1_HAI_ProductDetail and http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_ -1_HAI_ProductDetail___ |
| Surgical microscope | Zeiss | 495005-0014-000 | Any brand can be used. Example here is Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C with Stand S Double Spot and KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143 |
| Silk suture | Livingstone International | DTSK163019F4 | Any brand can be used. Example here is * Email this item to my friend 3/8 Circle Reverse Cut Silk Suture 3/0 Thread 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4 |
| Scalpel blades | Fine Science Tools (FST) | 10020-00 | Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Blade #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191 |
| Scalpel handle | Fine Science Tools (FST) | 10004-13 | Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51 |
| 1 x Small surgical scissors | Fine Science Tools (FST) | 14060-09 | Any brand can be used. Example here is FST Fine Scissors, 9 cm with 21 mm cutting edge, sharp, straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17 |
| 2 x Forceps with serrated curved tip | Fine Science Tools (FST) | 11001-13 | Any brand can be used. Example here is FST 13 cm standard pattern forceps with curved 2.8×1.4 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32 |
| 1 x Iridectomy scissors | Fine Science Tools (FST) | 15000-08 | Any brand can be used. Example here is FST Vannas Spring Scissors – 2.5mm Cutting Edge, Straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16 |
| 1 x Forceps with straight serated tip | Fine Science Tools (FST) | 11650-10 | Any brand can be used. Example here is FST Graefe 10 cm straight with serrated 1 x 0.99 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32 |
| 1 x Forceps with smooth sharp straight fine tip | Fine Science Tools (FST) | 11251-10 | Any brand can be used. Example here is FST Dumont #5 forceps straight 11cm with 0.08 x 0.04mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29 |
| 1 x Forceps with smooth fine curved forceps | Fine Science Tools (FST) | 11063-07 | Any brand can be used. Example here is FST Delicate Forceps 9 cm with smooth 0.4 x 0.3mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360 |
| 2 x Hemostats | Fine Science Tools (FST) | 13010-12 | Any brand can be used. Not all operators use the hemostats. Example here is FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats with 20 mm length x 1.3 mm width serrated, straight tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33 |
| 1 x Suture needle holder | Fine Science Tools (FST) | 12001-13 | Any brand can be used. Example here is FST 13cm Hasley Needle Holder with 16 mm length x 1.9 mm width tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70 |
| 1 x Artery clamp | Fine Science Tools (FST) | 18050-28 | Any brand can be used. Example here is FST Bulldog Serrefines straight, 28 mm long, 9×1.6 mm jaw dimension with medium clamp press. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82 |
| Oleic acid | Sigma Aldrich | O1008 | When required, any brand can be used. Example here is 99% pure oleic acid. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en®ion=AU |
| 14C-oleic acid | Perkin | NEC317050UC | Any brand can be used. Example here is Oleic Acid, [1-14C]-, 50µCi (1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC |
| Sodium taurocholate | Sigma Aldrich | T4009 | Any brand can be used. Example here is taurocholic acid sodium salt hydrate ≥95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en®ion=AU |
| Halofantrine | Glaxo Smith Kline | Halofantrine was kindly provided as a gift from Glaxo Smith Kline | |
| Sodium phosphate monobasic | Sigma Aldrich | 71507 | Any brand can be used. Example here is sodium phosphate monobasic monohydrate, BioXtra, for molecular biology, >99.5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en®ion=AU |
| Sodium phosphate dibasic | Sigma Aldrich | 71643 | Any brand can be used. Example here is sodium phosphate dibasic dihydrate, BioUltra, for molecular biology, >99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en®ion=AU |
References
- Barrowman, J. A., Tso, P. Gastrointestinal lymphatics. Comprehensive Physiology. , 1733-1777 (2010).
- Karaman, S., Detmar, M. Mechanisms of lymphatic metastasis. J Clin Invest. 124 (3), 922-928 (2014).
- Mossel, E. C., Ramig, R. F. A lymphatic mechanism of rotavirus extraintestinal spread in the neonatal mouse. J Virol. 77 (22), 12352-12356 (2003).
- Pantaleo, G., et al. Hiv-Infection Is Active and Progressive in Lymphoid-Tissue during the Clinically Latent Stage of Disease. Nature. 362 (6418), 355-358 (1993).
- Chakraborty, S., Zawieja, S., Wang, W., Zawieja, D. C., Muthuchamy, M. Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, R94-R102 (2010).
- Dixon, J. B. Lymphatic lipid transport: sewer or subway. Trends Endocrinol Metab. 21 (8), 480-487 (2010).
- Weid, P. -. Y., Rehal, S., Ferraz, J. G. Role of the lymphatic system in the pathogenesis of Crohn’s disease. Current Opinion in Gastroenterology. 27 (4), 335-341 (2011).
- Wang, Y., et al. Chylomicrons promote intestinal absorption and systemic dissemination of dietary antigen (ovalbumin) in mice. PloS one. 4 (12), e8442 (2009).
- Ji, Y., et al. Activation of rat intestinal mucosal mast cells by fat absorption. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302 (11), G1292-G1300 (2012).
- Kohan, A., Yoder, S., Tso, P. Lymphatics in intestinal transport of nutrients and gastrointestinal hormones. Ann N Y Acad Sci. 1207, E44-E51 (2010).
- Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Targeted drug delivery to lymphocytes: a route to site-specific immunomodulation. Mol Pharm. 7 (6), 2297-2309 (2010).
- Rothkotter, H. J., Huber, T., Barman, N. N., Pabst, R. Lymphoid cells in afferent and efferent intestinal lymph: lymphocyte subpopulations and cell migration. Clin Exp Immunol. 92 (2), 317-322 (1993).
- Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Lipid-based delivery systems and intestinal lymphatic drug transport: a mechanistic update. Adv Drug Deliv Rev. 60 (6), 702-716 (2008).
- Mansbach, C. M., Dowell, R. F., Pritchett, D. Portal transport of absorbed lipids in rats. Am J Physiol. 261 (3 Pt 1), G530-G538 (1991).
- Kohan, A. B., Howles, P. N., Tso, P. Methods for studying rodent intestinal lipoprotein production and metabolism. Curr Protoc Mouse Biol. 2, 219-230 (2012).
- Porter, C. J., Trevaskis, N. L., Charman, W. N. Lipids and lipid-based formulations: optimizing the oral delivery of lipophilic drugs. Nat Rev Drug Discov. 6 (3), 231-248 (2007).
- Trevaskis, N. L., et al. The role of the intestinal lymphatics in the absorption of two highly lipophilic cholesterol ester transfer protein inhibitors (CP524,515 and CP532,623). Pharm Res. 27 (5), 878-893 (2010).
- Choo, E. F., et al. The Role of Lymphatic Transport on the. Systemic Bioavailability of the Bcl-2 Protein Family Inhibitors Navitoclax (ABT-263) and ABT-199. Drug Metabolism and Disposition. 42 (2), 207-212 (2014).
- Han, S., et al. Targeted delivery of a model immunomodulator to the lymphatic system: comparison of alkyl ester versus triglyceride mimetic lipid prodrug strategies. J Control Release. 177, 1-10 (2014).
- Bollman, J. L., Cain, J. C., Grindlay, J. H. Techniques for the collection of lymph from the liver, small intestine, or thoracic duct of the rat. J Lab Clin Med. 33 (10), 1349-1352 (1948).
- Porter, C. J., Charman, S. A., Charman, W. N. Lymphatic transport of halofantrine in the triple-cannulated anesthetized rat model: effect of lipid vehicle dispersion. J Pharm Sci. 85 (4), 351-356 (1996).
- Boyd, M., Risovic, V., Jull, P., Choo, E., Wasan, K. M. A stepwise surgical procedure to investigate the lymphatic transport of lipid-based oral drug formulations: Cannulation of the mesenteric and thoracic lymph ducts within the rat. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 49 (2), 115-120 (2004).
- Porter, C. J., Charman, S. A., Humberstone, A. J., Charman, W. N. Lymphatic transport of halofantrine in the conscious rat when administered as either the free base or the hydrochloride salt: effect of lipid class and lipid vehicle dispersion. J Pharm Sci. 85 (4), 357-361 (1996).
- Caliph, S. M., Charman, W. N., Porter, C. J. Effect of short-, medium-, and long-chain fatty acid-based vehicles on the absolute oral bioavailability and intestinal lymphatic transport of halofantrine and assessment of mass balance in lymph-cannulated and non-cannulated rats. J Pharm Sci. 89 (8), 1073-1084 (2000).
- Edwards, G. A., Porter, C. J., Caliph, S. M., Khoo, S. M., Charman, W. N. Animal models for the study of intestinal lymphatic drug transport. Adv Drug Deliv Rev. 50 (1-2), 45-60 (2001).
- Noguchi, T., Charman, W. N. A., Stella, V. J. Lymphatic Appearance of Ddt in Thoracic or Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rats. International Journal of Pharmaceutics. 24 (2-3), 185-192 (1985).
- Trevaskis, N. L., et al. A mouse model to evaluate the impact of species, sex, and lipid load on lymphatic drug transport. Pharm Res. 30 (12), 3254-3270 (2013).
- Kota, J., et al. Lymphatic absorption of subcutaneously administered proteins: influence of different injection sites on the absorption of darbepoetin alfa using a sheep model. Drug Metab Dispos. 35 (12), 2211-2217 (2007).
- McHale, N. G., Adair, T. H. Reflex modulation of lymphatic pumping in sheep. Circ Res. 64 (6), 1165-1171 (1989).
- White, D. G., Story, M. J., Barnwell, S. G. An Experimental Animal-Model for Studying the Effects of a Novel Lymphatic Drug Delivery System for Propranolol. International Journal of Pharmaceutics. 69 (2), 169-174 (1991).
- Khoo, S. M., Edwards, G. A., Porter, C. J., Charman, W. N. A conscious dog model for assessing the absorption, enterocyte-based metabolism, and intestinal lymphatic transport of halofantrine. J Pharm Sci. 90 (10), 1599-1607 (2001).
- Kararli, T. T. Comparison of the gastrointestinal anatomy, physiology, and biochemistry of humans and commonly used laboratory animals. Biopharm Drug Dispos. 16 (5), 351-380 (1995).
- Kassis, T., et al. Dual-channel in-situ optical imaging system for quantifying lipid uptake and lymphatic pump function. J Biomed Opt. 17 (8), 086005 (2012).
- Dahan, A., Hoffman, A. Evaluation of a chylomicron flow blocking approach to investigate the intestinal lymphatic transport of lipophilic drugs. Eur J Pharm Sci. 24 (4), 381-388 (2005).
- Xiao, C., Lewis, G. F. Regulation of chylomicron production in humans. Biochim Biophys Acta. 1821 (5), 736-746 (2012).
- Seeballuck, F., Ashford, M., O’Driscoll, C. The Effects of Pluronic® Block Copolymers and Cremophor EL on Intestinal Lipoprotein Processing and the Potential Link with P-Glycoprotein in Caco-2 Cells. Pharmaceutical Research. 20 (7), 1085-1092 (2003).
- Levy, E., Mehran, M., Seidman, E. Caco-2 cells as a model for intestinal lipoprotein synthesis and secretion. The FASEB Journal. 9 (8), 626-635 (1995).
- Cartwright, I. J., Higgins, J. A. Isolated rabbit enterocytes as a model cell system for investigations of chylomicron assembly and secretion. Journal of Lipid Research. 40 (7), 1357-1365 (1999).
- Dixon, J. B., Raghunathan, S., Swartz, M. A. A Tissue-Engineered Model of the Intestinal Lacteal for Evaluating Lipid Transport by Lymphatics. Biotechnology and Bioengineering. 103 (6), 1224-1235 (2009).
- Gershkovich, P., et al. The role of molecular physicochemical properties and apolipoproteins in association of drugs with triglyceride-rich lipoproteins: in-silico prediction of uptake by chylomicrons. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 61 (1), 31-39 (2009).
- Gershkovich, P., Hoffman, A. Uptake of lipophilic drugs by plasma derived isolated chylomicrons: Linear correlation with intestinal lymphatic bioavailability. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 26 (5), 394-404 (2005).
- Holm, R., Hoest, J. Successful in silico predicting of intestinal lymphatic transfer. International Journal of Pharmaceutics. 272 (1-2), 189-193 (2004).
- Trevaskis, N. L., Porter, C. J., Charman, W. N. Bile increases intestinal lymphatic drug transport in the fasted rat. Pharm Res. 22 (11), 1863-1870 (2005).
- Miura, S., et al. Increased proliferative response of lymphocytes from intestinal lymph during long chain fatty acid absorption. Immunology. 78 (1), 142-146 (1993).
- Caliph, S. M., et al. The impact of lymphatic transport on the systemic disposition of lipophilic drugs. J Pharm Sci. 102 (7), 2395-2408 (2013).
- Caliph, S. M., Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Intravenous dosing conditions may affect systemic clearance for highly lipophilic drugs: implications for lymphatic transport and absolute bioavailability studies. J Pharm Sci. 101 (9), 3540-3546 (2012).
- Trevaskis, N. L., et al. Tissue uptake of DDT is independent of chylomicron metabolism. Arch Toxicol. 80 (4), 196-200 (2006).
