غشاء المشيمة (CAM) يعاني من نقص المناعة والأوعية الدموية بدرجة عالية ، مما يجعله نموذجا طبيعيا في الجسم الحي لنمو الورم وتكوين الأوعية. في هذا البروتوكول ، نصف طريقة موثوقة لزراعة أورام سرطان الخلايا الكبدية الوعائية ثلاثية الأبعاد (HCC) باستخدام مقايسة CAM.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
غشاء مشيمائي الفرخ (CAM) يبدأ في تطوير بعد يوم 7 بعد الإخصاب وينضج بعد يوم 12. وCAM هو العوز المناعي بشكل طبيعي وأوعية دموية للغاية، مما يجعله نظام مثالي للورم زرع. علاوة على ذلك، CAM يحتوي على البروتينات المصفوفة خارج الخلية مثل فبرونيكتين، laminin، الكولاجين، إنتغرين ألفا (V) beta3، وMMP-2، مما يجعلها نموذجا جذابا لدراسة غزو الورم والانبثاث. وقد أخذ العلماء منذ فترة طويلة الاستفادة من علم وظائف الأعضاء من CAM عن طريق استخدامه كنموذج من الأوعية الدموية. وفي الآونة الأخيرة، تم تعديل مقايسة CAM في العمل بوصفه في الجسم الحي طعم أجنبي نظام نموذجي لمختلف أنواع السرطان الذي يسد الفجوة بين العمل الأساسي في المختبر ونماذج سرطان الحيوانات أكثر تعقيدا. مقايسة CAM يسمح لدراسة نمو الورم، والعلاجات المضادة للورم، والمؤيدة للورم المسارات الجزيئية في نظام بيولوجيا في آن معا من حيث التكلفة وفعالة في الوقت المحدد. هنا، نحن تصف تطوير CAM كسيننموذج ograft من سرطان الخلايا الكبدية (HCC) مع معدلات البقاء على قيد الحياة الجنينية لمدة تصل إلى 93٪ والورم موثوق تأخذ يؤدي إلى نمو ثلاثية الأبعاد، وأورام أوعية دموية.
المقدمة
سرطان الخلايا الكبدية (HCC) هو السبب الرئيسي الثالث 3 وفيات السرطان في العالم 1. حاليا 30٪ فقط من المرضى HCC مؤهلة للحصول على العلاجات الجراحية يحتمل العلاجية 2، والعلاج الكيميائي النظامية ليس فعال 3. ولذلك، هناك حاجة ملحة السريرية غير الملباة لعلاجات HCC جديدة، وتطوير نظم نموذج مناسبة لاختبار كفاءة وكلاء الجديد. يوفر فرخ مشيمائي غشاء (CAM) فحص واستنساخه وفعالة من حيث التكلفة، وسريع طريقة متوسطة مرت من اختبار العقاقير المحتملة المضادة للورم في الجسم الحي.
وقد استخدمت مقايسة CAM على نطاق واسع لدراسة الأوعية ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
الحضانة 1. البيض
- الحصول على 8 يوم البيض خالية من مسببات الأمراض المحددة القديمة المحتوي.
- وضع البيض في الدورية علبة البيض، وينتهي ختمها تواجه صعودا، ووضع علبة الدورية داخل حاضنة البيض. احتضان البيض لمدة 48 ساعة على 36 درجة مئوية والرطوبة 50٪.
2. اسقاط CAM وفتح البيض
- جمع البيض من الحاضنة. مكان البيض في رف البيض، يختم حتى الجانب،....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وتظهر الصور التمثيلية من الخطوات الرئيسية في البروتوكول هنا. الشكل 1A يدل على استخدام كاندلر لتصور الجنين النامي، كيس الهواء، والأوعية الدموية من CAM إظهار الشكل 1B-1C عملية اسقاط CAM بجعل اثنين من الثقوب ثم الضغط السلبي باستخدام لمبة السلامة، و1D الشكل يدل على تراجع بنجاح CAM مع فقاعة الهواء كبيرة تحت حفرة بعلامات قلم رصاص. الشكل 1E والشكل 1F تثبت استخدام الأداة الدوارة DREMEL لجعل الضرورة تخفيضات في وعاء فوق فقا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
العديد من الخطوات الرئيسية في هذا البروتوكول على الأرجح حساب لتحسين البقاء على قيد الحياة الجنينية، وكذلك زيادة موثوقية نمو الورم. اسقاط CAM بعيدا عن قذيفة من خلال تطبيق الشفط لكيس الهواء هو أقل الغازية من الطرق الأخرى القائمة (باستخدام إبرة لإزالة الزلال من البيضة، تشريح حادة، وما إلى ذلك). باستخدام دبوس دفع العقيمة لإنشاء اثنين من الثقوب الصغيرة المطلوبة لهذه الطريقة هو الجزء الأكثر تحديا للبروتوكول. يمكن استخدام الكثير من القوة يؤدي إلى تلف الأوعية الدموية CAM وعن طريق الإفراط .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
تتلقى A.S. تمويلا من شركة Advaxis Pharmaceutical لدعم تجربة سريرية بدأها المحقق.
شكر وتقدير
< p class = 'jove_content'>A.S. تم دعمه جزئيا من خلال منح من المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ، والمعهد الوطني لأبحاث طب الأسنان والقحف الوجهي (5R03DE021741-02) والمعهد الوطني للسرطان (1K08CA154963-01A1).
قدم معهد هوارد هيوز الطبي تمويلا ل M.L. من خلال برنامج زمالة البحوث الطبية HHMI.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| بيض محتضن ممتاز | تشارلز ريفر | N / A | حاضنات بيض http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx |
| GQF | Hova-Bator 2362N | ||
| صواني بيض دوارة | GQF | 1611 شمعة بيض تيرنر | |
| ليون | هاي باور 950-070 | ||
| Dremel 100 أداة دوارة مع عجلة قطع 15/16 | Dremel | 100-N / 7 | |
| ملقط معقم ، دبوس دفع ، مقص تشريح ، شريط | |||
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
| قوارير مبردة ، خيط خارجي مع غسالة سيليكون | Corning | 430659 | |
| Collagenase من Clostridium histolyticum | Sigma | C9891 |
المراجع
- Sangiovanni, A., et al. Increased survival of cirrhotic patients with a hepatocellular carcinoma detected during surveillance. Gastroenterology. 126 (4), 1005-1014 (2004).
- Lopez, P. M., Villanueva, A., Llovet, J. M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
