Embryonated चिकन अंडे में इन्फ्लुएंजा वायरस प्रचार
Summary
Fertile chicken eggs are widely used to produce large amounts of human influenza A virus as they provide a convenient and cost-effective system to prove high yields of virus.
Abstract
इन्फ्लूएंजा संक्रमण के बारे में 36,000 लोगों की मृत्यु और संयुक्त राज्य अमेरिका में 200,000 से अधिक अस्पताल में भर्ती हर साल के साथ जुड़ा हुआ है। उत्परिवर्तन और फिर से वर्गीकरण के कारण नया इन्फ्लूएंजा वायरस उपभेदों के सतत उद्भव वायरस के नियंत्रण पेचीदा और उपन्यास दवाओं और टीकों के स्थायी विकास जरूरी है। इन्फ्लूएंजा की प्रयोगशाला आधारित अध्ययन वायरस के प्रसार के लिए एक विश्वसनीय और लागत प्रभावी विधि की आवश्यकता है। इधर, एक व्यापक प्रोटोकॉल लगातार उच्च अनुमापांक वायरल शेयरों पैदावार जो उपजाऊ चिकन अंडे में इन्फ्लुएंजा ए वायरस के प्रसार के लिए प्रदान की जाती है। 11 दिन – संक्षेप में, सीरम रोगज़नक़ मुक्त (एसपीएफ़) निषेचित चिकन अंडे 37 डिग्री सेल्सियस और 10 के लिए 55-60% नमी में incubated रहे हैं। इस अवधि के दौरान, भ्रूण के विकास को आसानी से एक अंडा Candler का उपयोग करते हुए नजर रखी जा सकती है। वायरस टीका एक सुई का उपयोग allantoic गुहा में वायरस शेयर के इंजेक्शन के द्वारा किया जाता है। 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के दो दिनों के बाद, अंडे कर रहे हैं4 डिग्री सेल्सियस पर कम से कम 4 घंटे के लिए ठंडा। हवा की थैली और chorioallantoic झिल्ली से ऊपर खोल तो ध्यान से खुल रहे हैं, और वायरस युक्त द्रव्य काटा जाता है। तरल पदार्थ, centrifugation द्वारा मलबे से मंजूरी दे दी aliquoted और लंबी अवधि के भंडारण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस को सौंप दिया है। बड़ी राशि आम तौर पर इस प्रोटोकॉल के साथ हासिल की है और जो उच्च वायरस अनुमापांक (वायरस युक्त अंडा प्रति तरल पदार्थ के 5-10 मिलीग्राम) बड़ी मात्रा की आवश्यकता होती है जो इन विट्रो अध्ययन के लिए विशेष रूप से, वायरस तैयारी हमारे अनुकूल विधि के लिए अंडे का उपयोग कर दिया गया है वायरस की, जिसमें एक ही वायरस शेयर की उच्च dosages की जरूरत है।
Introduction
इन्फ्लुएंजा एक मानव स्वास्थ्य के लिए एक बड़ा खतरा बना हुआ है। यह एक बड़े वैश्विक बोझ दुनिया भर में प्रतिवर्ष एक 500,000 से होने वाली मौतों के लिए ऊपर के कारण के साथ एक संभावित विनाशकारी सांस की बीमारी है। इन्फ्लुएंजा वायरस परिवार Orthomyxoviridae में हैं और उनके जीनोम 1,2 में आठ नकारात्मक भावना एकल असहाय शाही सेना ले। वायरल जीनोम की उच्च mutability (यानी, प्रतिजनी "बहाव") लंबी अवधि के उन्मुक्ति को रोकता है। इसके अलावा, इन्फ्लूएंजा विरोधी वायरल दवाओं 3 के लिए तेजी से प्रतिरोधी है।
2009 H1N1 इन्फ्लूएंजा महामारी इन्फ्लूएंजा रोग (महामारी तनाव, विरोधी वायरल प्रतिरोध, देरी वैक्सीन उत्पादन) के साथ जुड़े सभी चुनौतीपूर्ण मुद्दों पर प्रकाश डाला। टीका तैयार करने की संभावना सबसे अधिक रोगजनक इन्फ्लूएंजा उपभेदों 4 (H1N1, H3N2 और इन्फ्लूएंजा बी के लिए एक-एक) के लिए विश्व स्वास्थ्य संगठन द्वारा प्रतिवर्ष निर्धारित किया जाता है। इस विधि की भविष्यवाणी इन्फ्लूएंजा तनाव पर आधारित है क्योंकिएस, रोगजनक उपभेदों कभी कभी गलत ढंग से पहचान की है और टीका प्रभावकारिता नाटकीय रूप से बूँदें हैं। इसके अलावा, उपन्यास इन्फ्लूएंजा उपभेदों की उपस्थिति महामारी रोग 2 के कारण इन preventative के कार्यक्रमों को दरकिनार कर सकते हैं।
एक सार्वभौमिक इन्फ्लूएंजा टीका के निर्माण के लिए 5 मायावी किया गया है। इसलिए, अनुसंधान फेफड़ों की चोट के रोगजनन को समझने में जारी रहना चाहिए। सुविधा प्रयोगशाला अनुसंधान करने के लिए, कई तरीकों वायरल अलगाव और प्रचार 6 के लिए विकसित किया गया है। मानव इन्फ्लूएंजा वायरस स्तनधारी सेल substrates के एक किस्म में परिलक्षित किया जा सकता है। हालांकि, बड़ी मात्रा में पैदा करने के लिए उच्च अनुमापांक वायरस सबसे अच्छा embryonated अंडे में प्राप्त कर रहे हैं। निम्नलिखित प्रोटोकॉल इन्फ्लूएंजा के लिए मौजूदा वायरस शेयरों से एक वायरस के प्रसार और भंडारण के लिए एक तकनीक का वर्णन है।
Protocol
Representative Results
Discussion
इन्फ्लुएंजा बीमारी की एक बड़ी वैश्विक बोझ का कारण बनता है, और काम फेफड़ों की चोट 7 के रोगजनन को समझने में जारी है। इस घातक बीमारी में मदद की अनुसंधान करने के लिए विभिन्न तरीकों इन्फ्लूएंजा वायरस 6</s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The present study was supported by the NIH grants HL120947 (P.C.), HL103868 (P.C.), and the American Heart Association Grant-in-Aid (P.C.)
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Cellgro | 21-040-CV | |
| serum pathogen-free (SPF) fertilized chicken eggs | VALO BioMedia | n/a | |
| humidified egg incubator | FARM iNNOVATORS | Model 2100 | |
| automatic egg turner | FARM iNNOVATORS | Model 3200 | |
| egg candler | FARM iNNOVATORS | Model 3300 | |
| 1 ml syringe | BD Bioscience | 309659 | |
| 18G needle | BD Bioscience | 305196 | |
| 20G / 22G needle | BD Bioscience | 305176 / 305156 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| Ethanol, >99.5% | Sigma-Aldrich | 459844 | diluted to 70% using water |
| glue gun "Ad tech Hi Temp Project Pro" | Ad tech, Adhesive Technologies, Inc. | Model 1105 | |
| glue "Ad tech MINI SIZE, Multi Temp" | Ad tech, Adhesive Technologies, Inc. | 220-34ZIP30 | |
| MDCK cells | ATCC | CRL-2935 | |
| Washed Pooled Turkey Red Blood Cells, 10% | Lampire Biological Laboratories | 724908 |
References
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