Cardioplegic गिरफ्तारी के साथ मायोकार्डियल बहतरीन एसोसिएटेड की Murine पृथक दिल मॉडल
Summary
The goal of this protocol to assess myocardial stunning following ischemic cardioplegic arrest in rodents.
Abstract
निम्नलिखित प्रोटोकॉल बिगड़ा हृदय समारोह या दौरे तेजस्वी निम्नलिखित उदारवादी इस्कीमिक अपमान का मूल्यांकन करने के लिए काम का नहीं है। तकनीक cardioplegic गिरफ्तारी और कार्डियोपल्मोनरी बाईपास, बंद पंप सीएबीजी, प्रत्यारोपण, एनजाइना, संक्षिप्त ischemia, आदि के साथ हृदय शल्य चिकित्सा सहित कई नैदानिक प्रासंगिक घटना के साथ जुड़े इस्कीमिक चोट मॉडलिंग के लिए उपयोगी है। प्रोटोकॉल दौरे सिकुड़ा समारोह की माप पर ध्यान केंद्रित कर कृंतक दिलों में hypothermic hyperkalemic cardioplegic गिरफ्तारी और reperfusion की मॉडल करने के लिए एक सामान्य विधि प्रस्तुत करता है। संक्षेप में, एक माउस दिल, langendorff मोड में perfused है एक intraventricular गुब्बारे के साथ instrumented, और आधारभूत हृदय कार्यात्मक मापदंडों दर्ज हैं। स्थिरीकरण के बाद, दिल डायस्टोलिक गिरफ्तारी आरंभ करने के लिए एक cardioprotective hypothermic हृदय का पक्षाघात समाधान के अर्क जानकारी देने के लिए तो विषय है। हृदय का पक्षाघात 2 घंटे से अधिक रहकर वितरित किया जाता है। दिल तो reperfused और warme हैnormothermic तापमान और मायोकार्डियल समारोह की वसूली करने के लिए डी नजर रखी है। कृन्तकों में सकल दौरे ऊतक के नुकसान से मुक्त विश्वसनीय उदास हृदय सिकुड़ा समारोह में इस प्रोटोकॉल के परिणामों का प्रयोग करें।
Introduction
तेजस्वी myocardial ischemia या cardioprotection 1,2,3,4,5 साथ इस्कीमिक अपमान की लंबी अवधि का एक संक्षिप्त अवधि के बाद पर्याप्त मात्रा में रक्त प्रवाह की बहाली के बावजूद प्रतिवर्ती कम सिकुड़ा गतिविधि के रूप में परिभाषित किया गया है। प्रस्तुत विधि विशेष रूप से सिकुड़ा समारोह में प्रतिवर्ती दोष में परिणाम कर सकते हैं जो नैदानिक प्रासंगिक इस्कीमिक अपमान मॉडल का उपयोग किया जाता है (यानी, कार्डियक सर्जरी cardioplegic गिरफ्तारी, ischemia, एनजाइना, आदि का संक्षिप्त अवधि के उपयोग के साथ जुड़े इस्कीमिक अपमान)। गंभीर ischemia के अध्ययन (रोधगलन, परिगलन) के विपरीत इस प्रोटोकॉल ऊतक चोट, remodeling, और कोशिका मृत्यु के बिना दौरे कार्यात्मक वसूली और cardioprotection मूल्यांकन करने के लिए विकसित किया गया था। कागज के बहुमत हाइपोथर्मिया और रुक-रुक कर हृदय का पक्षाघात वितरण का उपयोग कर एक कार्डियक सर्जरी करने के लिए इसी तरह के तत्वों के साथ एक मानक cardioplegic गिरफ्तारी प्रोटोकॉल पर चर्चा।
मायोकार्डियल protकार्डियक सर्जरी के बहुमत के दौरान ection हृदय का पक्षाघात और कार्डियोपल्मोनरी बाईपास पर निर्भर करता है। हृदय का पक्षाघात (सीपी) समाधान और रणनीतियों (रक्त, crystalloid, ठंड, गर्म आदि) व्यापक रूप से भिन्न हालांकि सबसे आम तत्व, 1) hyperkalemia और / या जिससे दौरे संकुचन से उत्पन्न ऊर्जा के उपयोग को सीमित करने, पाद लंबा में दिल की गिरफ्तारी के लिए अन्य रणनीतियों रहे हैं और 2) हाइपोथर्मिया चयापचय धीमी और गिरफ्तार कर लिया, जबकि एटीपी और अन्य ऊर्जा भंडार बनाए रखने में मदद करने के लिए। वर्तमान हृदय का पक्षाघात समाधान अन्यथा घातक साबित होता है कि इस्कीमिक अपमान के खिलाफ दिल को सुरक्षा प्रदान करते हैं। हालांकि, शल्य इस्कीमिक अपमान दौरान cardioprotective रणनीतियों सही नहीं हैं, और उसके एवज में हल्के इस्कीमिक चोट पर्याप्त रक्त प्रवाह के बावजूद प्रतिवर्ती हृदय सिकुड़ा रोग में परिणाम कर सकते हैं (तेजस्वी दौरे), एसिडोसिस, cardiomyocyte क्षति, और कम कोरोनरी छिड़काव और vasospasm सहित संवहनी प्रभाव।
इस प्रोटोकॉल अलग हैसंक्षिप्त ischemia या cardioplegic गिरफ्तारी के साथ जुड़े इस्कीमिक अपमान निम्नलिखित बिगड़ा हृदय समारोह में परिणाम कर सकते हैं जो रोधगलन और यह मामूली इस्कीमिक अपमान का मूल्यांकन करता है कि में गंभीर ischemia के मूल्यांकन के मानक अलग दिल ischemia के मॉडल से। (- 8 Langendorff छिड़काव तकनीक और मैं पर समीक्षा के लिए / आर पढ़ाई 6 देखें)। सामान्य दिशा निर्देशों और माउस पृथक perfused दिल के साथ जुड़े प्रयोगात्मक मापदंडों का गहन विश्लेषण के लिए सदरलैंड ई टी अल देखना। 2003 यहाँ प्रस्तुत तकनीक मज़बूती माउस दिलों में आश्चर्यजनक प्रेरित करने के लिए आवश्यक उपकरण, अभिकर्मकों, कदम, रणनीतियों और सुझावों का विवरण 9। छोटा बदलाव चूहों के लिए तकनीक को लागू करने के लिए आवश्यक हैं।
संक्षेप में पृथक माउस दिलों Langendorff एक hyperkalemic hypotherm की डिलीवरी के माध्यम से ठंड संरक्षित हृदय की गिरफ्तारी के द्वारा, शारीरिक क्रेब्स-Henseleit बफर (KHB) के साथ लगभग 30 मिनट के लिए perfused पीछा कर रहे हैंआईसी हृदय का पक्षाघात समाधान। गिरफ्तारी के बाद हृदय कार्यात्मक वसूली rewarming और KHB के साथ दिल की reperfusion के दौरान नजर रखी है। हृदय सिकुड़ा समारोह की वसूली की डिग्री में परिवर्तन cardioprotective एजेंटों और विभिन्न cardioprotection रणनीतियों का आकलन करने के लिए मूल्यांकन किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
पूर्ववर्ती प्रोटोकॉल विवरण के तरीकों cardioplegic गिरफ्तारी के साथ जुड़े वैश्विक ischemia के लिए दौरे तेजस्वी माध्यमिक मूल्यांकन करने के लिए। हमारे हाथ में इस प्रोटोकॉल हृदय समारोह में एक ~ लगभग 40% की कमी का उत्पाद…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Cardioplegia Solution (St Thomas II) | Symbol / Concentrations (mM) | ||
| Sodium Chloride | NaCl; 110 | ||
| Potassium chloride | KCl; 16 | ||
| Calcium Chloride | CaCL2; 1.5 | ||
| Magnesium Chloride | MgCL2; 16 | ||
| Sodium Bicarbonate | NaHCO3; 10 | ||
| Krebs-Heinslet Buffer | |||
| Sodium Chloride | NaCl; 118 | ||
| Potassium Chloride | KCl; 4.8 | ||
| Magnesium Sulfate | MgSO4; 1.7 | ||
| Sodium Bicarbonate | NaHCO3; 24.9 | ||
| Potassium Phosphate (monobasic) | KH2PO4; 1.2 | ||
| Calcium Chloride | CaCL2; 1.4 | ||
| Sodium Pyruvate | Na pyruvate; 2 | ||
| Glucose | C6H12O6; 6 | ||
| Balloon reagents | |||
| Corn Syrup | |||
| Spaghetti | |||
| Silicon Dispersion Gel | |||
| styrofoam block | |||
| lab oven/incubator ( 50C) | |||
| Langendorff Perfusion equipment | |||
| Isolated perfused heart sytem (IH-SR (Hugo-Sachs) or equivalent) | |||
| Data acquisition system (DSI, ADinstruments or equivalent) | |||
| Heated water circulator | |||
| Cooling water circulator | |||
| Perfusion pump capable of 2-30 ml/min | |||
| Inline perfusion filters – 1 um glass fiber | |||
| Pressure sensors and amplifiers for LVP and perfusion pressure | |||
| Small graduated cylinder (~10 mL) | |||
| Small temperature probe and thermometer (Werner or equivalent) | |||
| perfusion resevoir (1L) | |||
| cardioplegia resevoir (~200 mL) | |||
| gas bubbler | |||
| 95/5 O2/CO2 mix | |||
| Surgical tools and reagents | |||
| Metzenbaum and Potz surgical scissors | |||
| two Dumont size 5 forceps | |||
| ketamine | |||
| xylazine | |||
| heparin | |||
| small clamp with soft sides to hold aorta (i.e. terminal clamp with taped ends) | |||
| Silk 2-0 and 4-0 sutures |
References
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