चूहे में गंध भेदभाव और आदी होना के लिए परीक्षण
Summary
This manuscript describes a protocol to examine the olfactory system of rodents. The olfactory habituation/dishabituation test will allow investigators to determine whether a mouse habituates to a repeatedly presented odor and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented a novel odor.
Abstract
This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the mouse can discriminate between non-social odors and social odors, whether the mouse habituates to a repeatedly presented odor, and whether the mouse demonstrates dishabituation when presented with a novel odor. Since many social behavior tests measure the experimental animal’s response to a familiar or novel mouse, false positives can be avoided by establishing that the animals can detect and discriminate between social odors. There are similar considerations in learning tests such as fear conditioning that use odor to create a novel environment or olfactory cues as an associative stimulus. Deficits in the olfactory system would impair the ability to distinguish between contexts and to form an association with an olfactory cue during fear conditioning.
In the odor habitation/dishabituation test, the mouse is repeatedly presented with several odors. Each odor is presented three times for two minutes. The investigator records the sniffing time directed towards the odor as the measurement of olfactory responsiveness. A typical mouse shows a decrease in response to the odor over repeated presentations (habituation). The experimenter then presents a novel odor that elicits increased sniffing towards the new odor (dishabituation). After repeated presentation of the novel odor the animal again shows habituation. This protocol involves the presentation of water, two or more non-social odors, and two social odors. In addition to reducing experimental confounds, this test can provide information on the function of the olfactory systems of new knockout, knock-in, and conditional knockout mouse lines.
Introduction
चूहे अन्य व्यक्तियों को पहचानने के लिए, खाना खोजने, नए वातावरण नेविगेट करने के लिए महक पर निर्भर कर रहे हैं, और यौन व्यवहार 1-3। यह जांचकर्ताओं प्रायोगिक पशुओं के भोजन, सामाजिक संपर्क, या माउस से एक प्रतिक्रिया प्रकाश में लाना करने का इरादा किसी भी odors शामिल है कि व्यवहार परीक्षण प्रशासन से पहले गंध के कामकाज की समझ नहीं है या नहीं, की स्थापना आवश्यक है। Anosmia या अक्षमता व्यवहार मानदंड की एक विस्तृत विविधता में झूठी सकारात्मक या नकारात्मक में परिणाम सकता है, अलग odors के बीच भेद करने के लिए है, इसलिए व्यवहार परीक्षण के अन्य प्रकार के प्रदर्शन कर रहे हैं इससे पहले पता लगाने और odors भेद करने के लिए एक माउस की क्षमता स्थापित किया जाना चाहिए।
घ्राण आदी होना / dishabituation परीक्षण पहले 1980 के दशक 4 में वर्णित किया गया था। परीक्षण डीआरएस द्वारा चूहों में उपयोग के लिए अनुकूलित किया गया है। म्यू यांग और जैकलिन क्रौले 5। इस अन्वेषक एस्टा के लिए अनुमति देता है एक सरल और सस्ती परीक्षा हैएक माउस का पता लगाने और odors के बीच अंतर कर सकते हैं कि blish। महक का परीक्षण करने के अलावा, इस परीक्षण के अन्वेषक माउस के सामान्य व्यवहार का निरीक्षण करने के लिए और जल्दी एक परीक्षण के आहार में किया जाना चाहिए की अनुमति देता है। गुणात्मक माउस की हरकत के बारे में टिप्पणियों, चिंता के लक्षण, गतिविधि के स्तर पर, और भोजन odors को बनाम सामाजिक odors के लिए प्रतिक्रिया परीक्षण से बाहर किया जा सकता है, जिसमें नए क्षेत्रों का संकेत हो सकता है।
इस परीक्षण में, विभिन्न odors को में डूबा कपास swabs एक पंक्ति में एक माउस को तीन बार प्रस्तुत कर रहे हैं। एक गंध से प्रत्येक दोहराया प्रस्तुति के साथ, माउस प्रत्येक बाद प्रस्तुति के साथ यह जांच कम समय खर्च, कपास झाड़ू को आदत डालना होगा। एक नए गंध प्रस्तुत किया जाता है, dishabituation होता है, और एक ठेठ माउस यह वर्तमान और पिछले odors को 5 के बीच भेदभाव कर सकते हैं यह दर्शाता है कि झाड़ू की जांच में अधिक समय बिताना होगा। इस परीक्षा में एक समय में एक माउस को दिलाई और एक 45 मिनट एसीसी शामिल हैlimation अवधि के परीक्षण के 45 मिनट के द्वारा पीछा किया।
इस परीक्षण के लिए बाहर ले जाने के लिए आसान है हालांकि यह माउस घ्राण प्रणाली के बारे में परिष्कृत सवालों की जांच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। ऐसे दफन खाद्य परीक्षण के रूप में महक के अन्य लोकप्रिय परीक्षण, बस anosmia की उपस्थिति या अनुपस्थिति की स्थापना। हालांकि, घ्राण भेदभाव और आदी होना परीक्षण अन्वेषक एक माउस odors को पता लगाने के लिए, लेकिन अलग odors के बीच भेदभाव कर सकते हैं क्षमता है कि न केवल निर्धारित करने के लिए अनुमति देता है। आदी होना और dishabituation की तर्ज नई म्यूटेंट odors को 6,7 के बीच भेदभाव कर सकते हैं स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। एक आश्चर्य की बात एक अध्ययन में, Fadool और उनके सहयोगियों ने सामान्य चूहों 8 से बेहतर बहुत समान odors को भेदभाव कर सकते हैं कि "सुपर smellers" Kv1.3 चैनल के जीन-लक्षित विलोपन के साथ कि चूहों कर रहे हैं दिखाने के लिए odors का जटिल मिश्रण का इस्तेमाल किया।
एक नए पीटकर माउस मॉडल का परीक्षण करते समय यह establis के लिए उपयोगी हैएच बुनियादी संवेदी कार्यों के लिए सामान्य व्यवहार की उपस्थिति। एक परीक्षण के आहार में जल्दी से किया है, गंध भेदभाव और आदी होना परीक्षण एक अन्वेषक किसी भी असामान्य व्यवहार का पालन करने का अवसर देता है। इन टिप्पणियों उत्परिवर्ती की विशेषताओं confounding के कारण कर रहे हैं कि बाद में परीक्षण में झूठी सकारात्मक या नकारात्मक परिणामों को रोकने सकता है। शोधकर्ताओं सामाजिक व्यवहार बुनियादी घ्राण समारोह सत्यापित करने की आवश्यकता जांच करने के लिए जारी रखने के रूप में तेजी से महत्वपूर्ण हो जाता है। उत्परिवर्ती लाइनों में महक की जांच करने के अलावा, इस परीक्षण में इस तरह के सभी गंध उत्तेजनाओं को एक औषधीय उपचार विशेष रूप से सामाजिक गंध उत्तेजनाओं के लिए एक जानवर की प्रतिक्रिया बढ़ जाती है, चाहे के रूप में या उनकी प्रतिक्रिया बढ़ जाती है अगर विशिष्ट सवालों का पता करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस पत्र में प्रदान की जाती परिणामों चूहों के लिए इष्टतम है। चूहों के एक उपन्यास गंध करने के लिए एक मजबूत प्रतिक्रिया दिखाना है, तो जल्दी आदत डालना। इस विधि में महत्वपूर्ण कदमों में से एक odors की तैयारी है?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work is supported by a Baylor University Research Council grant and by a research grant from the Epilepsy Foundation.
Materials
| Mouse cage | Allentown | Standard mouse cage | |
| Wire lid | Allentown | BCU Mouse WBL 2500 | |
| Bedding | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| Cotton swabs | VWR | 89031-270 | 6” wooden handle |
| Banana extract | McCormick | ||
| Almond extract | McCormick | ||
| Laboratory tape | VWR | 89098-062 | |
| Stop watch | VWR | 62374-000 | |
| Nitrile gloves | VWR | 82026 | |
| Timing device | VWR | 61161-350 | |
| 15 mL conical tubes | VWR | 89003-294 | |
| 2 L beakers | Pyrex | 1003 | |
| Parafilm | Parafilm | PM-992 | 4” x 250’ |
| 1 L bottle with cap | VWR | 89000-240 |
References
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