Imagerie in vivo et le suivi de technétium 99m Étiqueté moelle osseuse Cellules souches mésenchymateuses dans Tendinopathie Hippique

Résumé

Ce protocole décrit le radiomarquage des cellules souches mésenchymateuses équines et leur implantation dans les lésions tendineuses chez le cheval afin de déterminer la survie cellulaire et la distribution tissulaire à l’aide de la scintigraphie gamma.

Résumé

Les récents progrès dans l'application des cellules souches mésenchymateuses de la moelle osseuse (BMMSC) pour le traitement des tendons et des ligaments blessures chez le cheval suggèrent une amélioration des mesures de résultats dans les deux études expérimentales et cliniques. Bien que le BMMSC sont implantés dans la lésion du tendon en grand nombre (généralement 10 - 20 millions de cellules), seul un nombre relativement faible de survivre (<10%), bien que ceux-ci peuvent persister jusqu'à 5 mois après l'implantation. Cela semble être une observation commune dans d'autres espèces où BMMSC ont été implantés dans d'autres tissus et il est important de comprendre quand cette perte se produit, combien survivre au processus d'implantation initiale et si les cellules sont effacés dans d'autres organes. Le suivi le devenir des cellules peut être réalisée par marquage radioactif de la BMMSC avant l'implantation qui permet non invasive de l'imagerie in vivo d'emplacement de cellule et quantification du nombre de cellules.

Ce protocole décrit une labeli cellulaireng procédure qui utilise le technétium 99m (Tc-99m), et le suivi de ces cellules après implantation dans tendons fléchisseurs blessés chez les chevaux. Tc-99m est un (t _1/2 de 6,01 hr) isotope de courte durée qui émet des rayons gamma et peut être internalisé par les cellules en présence du composé d'oxime hexamethylpropyleneamine lipophile (HMPAO). Ces propriétés, il est idéal pour une utilisation dans les cliniques de médecine nucléaire pour le diagnostic de nombreuses maladies différentes. Le sort des cellules marquées peut être suivi à court terme (jusqu'à 36 h) par scintigraphie gamma de quantifier à la fois le nombre de cellules retenues dans la lésion et la distribution des cellules dans les poumons, la thyroïde et d'autres organes. Cette technique est adaptée de l'étiquetage des leucocytes du sang et pourrait être utilisé pour l'image implanté BMMSC dans d'autres organes.

Introduction

Stratégies de régénération pour la réparation des tissus malades ou endommagés sont basées sur des cellules souches multipotentes dérivées d'une variété de tissus et implantés dans la zone touchée. Les récents progrès dans l'application des autologue BMMSC pour le traitement de tendon et les lésions ligamentaires chez le cheval ont montré l'amélioration des mesures de résultats à la fois expérimentale ^1-5 et ⁶ études cliniques. Le cheval est un modèle particulièrement intéressant pour évaluer l'efficacité des cellules souches traitements liés, car il souffre d'âge et surmenage des blessures liées à des tendons de la patte ant....

Protocole

Les cas décrits ici ont été effectuées après la permission éthique accordée par le Comité de l'éthique animale et du bien-être du Colegio de Veterinarios de Malaga, en Espagne, et la Royal Veterinary College, North Mymms, Royaume-Uni Les procédures utilisées sur les chevaux sont basées sur les protocoles approuvés qui sont utilisé dans la clinique sur des chevaux recevant des thérapies à base de cellules souches, qui comprend la sédation, l'aspiration de la moelle osseuse, l'injection intra-tendineux, perfusion régionale, l'injection intraveineuse, la gestion du traitement et de la douleur post-opératoire et le suivi après l'implantation.

Résultats

Tc-99m-HMPAO incorporation dans BMMSs ne nuisent pas à leur capacité à adhérer à la culture de tissus en plastique et tandis qu'ils montrent la capacité de prolifération pour former des monocouches (Figure 1), nous avons pas entièrement déterminé si les taux de prolifération ou d'autres phénotypes cellulaires sont affectées. Leur morphologie est similaire à cellules non marquées avec une forme typique de la broche. L'efficacité du marquage cellulaire (par exemple., L'absorption .......

Discussion

En plus de la moelle osseuse, les cellules souches isolées à partir de sources telles que le tissu adipeux sont adaptés pour le marquage avec ce protocole. En outre, les cellules de l'état congelé peuvent être repris et développés en culture pour les chiffres désirés pour les études de marquage ^12.

Un facteur critique qui détermine l'efficacité de marquage de l'BMMSC est le temps entre l'élution de la Tc-99m provenant du générateur de molybdène à la radiopharmacie,.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Technétium99m  ;			Veuillez vous renseigner auprès du fournisseur local de rayonnements d’ionisation conformément aux exigences légales. L’isotope doit être utilisé dans les 2 heures suivant l’élution du générateur de molybdène-99
Ceretec - Hexaméthylpropylèneamine oxime (HMPAO)  ;	GE HealthCare		Veuillez vous renseigner directement auprès de GE HealthCare
Microfuge, Minispin/Minispin Plus	Ependorf	22620100
18 G et 19 G Aiguilles	Terumo Medical	NN-1838R (18 G) ;   ;   ;   ;   ;   ;   ;   ;   ; NN1938R (19 g)
Seringues 1 ml et 2 ml	Scientific Laboratory Supplies Ltd	SYR6200 (1 ml) ; SYR6003 (2 ml)
Tubes de microcentrifugation 1,5 ml	Greiner Bio-One Ltd	616201
PBS - Saline tamponnée au phosphate	LifeTechnologies	14190
Écouvillons de gaze stériles	Shermond Ltd	UNG602
Bandage auto-adhésif CoflexVet	Andover Healthcare, Inc.	3540RB-018
Logiciel d’imagerie à ultrasons	Scion Image, Scion Corporation, États-Unis
Logiciel de traitement de scintigrammes MicasXplus	Bartec Technologies Ltd		http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html
Compteur d’isotopes de champ pour la surveillance des isotopes	John Caunt Royaume-Uni	GMS1800a	http://www.johncaunt.com/ Compteur de
puits pour les mesures isotopiques, calibrateur de dose	Capintec Southern Scientific	CRC-25R