Questo protocollo descrive la radiomarcatura delle cellule staminali mesenchimali equine e il loro impianto nelle lesioni tendinee del cavallo al fine di determinare la sopravvivenza cellulare e la distribuzione dei tessuti utilizzando la scintigrafia gamma.
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Articolo metodologico
In Vivo Imaging e tracciamento di tecnezio-99m etichetta cellule staminali mesenchimali del midollo osseo in Equine Tendinopatia
In questo articolo
Sommario
Abstract
I recenti progressi nell'applicazione delle cellule staminali mesenchimali del midollo osseo (BMMSC) per il trattamento di lesioni legamentose e tendinee nel cavallo suggeriscono una migliore misure di esito in entrambi gli studi sperimentali e clinici. Sebbene la BMMSC vengono impiantati nella lesione tendinea in gran numero (di solito 10 - 20 milioni cellule), solo un numero relativamente piccolo sopravvivere (<10%) anche se questi possono persistere per 5 mesi dopo l'impianto. Questo sembra essere un comune osservazione in altre specie dove BMMSC sono stati impiantati in altri tessuti ed è importante capire quando si verifica questa perdita, quanti sopravvivono il processo di impianto iniziale e se le cellule vengono cancellati in altri organi. Il monitoraggio del destino delle cellule può essere ottenuto mediante radiomarcatura il BMMSC prima dell'impianto che permette non invasivo imaging in vivo di posizione di cella e la quantificazione dei numeri di cellulare.
Questo protocollo descrive un labeli cellulareProcedura ng che usa tecnezio-99m (Tc-99m), e il monitoraggio di queste cellule dopo l'impianto in tendini flessori feriti nei cavalli. Tc-99m è un (t 1/2 del 6,01 hr) isotopo breve durata che emette raggi gamma e può essere internalizzati dalle cellule in presenza del hexamethylpropyleneamine ossima composto lipofilo (HMPAO). Queste proprietà lo rendono ideale per l'uso in cliniche di medicina nucleare per la diagnosi di molte malattie differenti. Il destino delle cellule marcate può essere seguita a breve termine (fino a 36 ore) per la scintigrafia gamma di quantificare sia il numero di cellule conservate nella lesione e distribuzione delle cellule nei polmoni, tiroide e altri organi. Questa tecnica è adattato dall'etichettatura di leucociti del sangue e può essere utilizzato per l'immagine impiantato BMMSC in altri organi.
Introduzione
Strategie rigenerativa per la riparazione di tessuti malati o danneggiati sono basate su cellule staminali multipotenti derivate da una varietà di tessuti e impiantati nella zona colpita. I recenti progressi nell'applicazione delle autologo BMMSC per il trattamento di tendini e lesioni legamentose nel cavallo hanno dimostrato di migliorare le misure di outcome sia sperimentale 1-5 e studi clinici 6. Il cavallo è un modello particolarmente interessante per valutare l'efficacia delle cellule staminali trattamenti correlati perché soffre di età e affaticare le lesioni riportate ai tendini dell'arto anteriore distale, è un animale atleti....
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Protocollo
I casi descritti nel presente documento sono stati eseguiti seguente autorizzazione etico concessa dal Etica e il benessere Comitato degli animali del Colegio de VETERINARIOS de Malaga, in Spagna, e il Royal Veterinary College, North Mymms, Regno Unito Le procedure utilizzate sui cavalli si basano su protocolli approvati che sono usato in clinica per i cavalli che ricevono terapie basate sulle cellule staminali, che comprende la sedazione, l'aspirazione del midollo osseo, iniezione intra-tendinee, perfusione regionale, iniezione endovenosa, il trattamento e la gestione del dolore post-procedurale e il monitoraggio dopo l'impianto.
1....
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Risultati
Tc-99m-HMPAO incorporazione in BMMSs non compromettere la loro capacità di aderire alla cultura del tessuto plastico e mentre mostrano capacità proliferazione di formare monostrati (figura 1), non abbiamo pienamente determinato se i tassi di proliferazione o altri fenotipi cellulari sono interessati. La loro morfologia è simile alle cellule non marcate con una tipica forma a fuso. L'efficienza etichettatura cellulare (es., L'assorbimento di etichetta) varia tipicamente da circa 1,5% al .......
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Discussione
Oltre al midollo osseo, cellule staminali isolate da fonti come il tessuto adiposo sono adatti per l'etichettatura con questo protocollo. Inoltre, le cellule da uno stato congelato può essere ripreso e ampliato in coltura per i numeri desiderati per gli studi di etichettatura 12.
Un fattore critico che determina l'efficienza di etichettatura del BMMSC è il tempo tra eluizione del Tc-99m dal generatore di molibdeno al radiofarmacia, preparazione di Tc-99m-HMPAO e l'uso .......
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Dichiarazioni
JD e RKS sono membri del comitato consultivo scientifico di ReCellerate Inc.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare il finanziamento dell'Horserace Betting Levy Board UK (numero di sovvenzione 721) e di VetCell BioScience Ltd, Regno Unito e di Consejerìa de Innovaciòn, Ciencia y Empresa, Junta de Andalucìa, Spagna.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Tecnezio99m | Si prega di informarsi con il fornitore locale di radiazioni ionizzanti in conformità con i requisiti legali. L'isotopo deve essere utilizzato entro 2 ore dall'eluizione dal generatore di molibdeno-99 | ||
| Ceretec - Esametilpropileneammina ossima (HMPAO). | GE HealthCare | Si prega di informarsi direttamente con GE HealthCare | |
| Microfuge, Minispin/Minispin Plus | Ependorf | 22620100 | |
| aghi da 18 G e 19 G | Terumo Medical | NN-1838R (18 G); NN1938R (19 G) | |
| Siringhe da 1 ml e 2 ml | Scientific Laboratory Supplies Ltd | SYR6200 (1 ml); SYR6003 (2 ml)Provette | |
| microcentrifuga 1,5 ml | Greiner Bio-One Ltd | 616201 | |
| PBS - Soluzione salina tamponata con fosfato | LifeTechnologies | 14190 | |
| Tamponi di garza sterili | Shermond Ltd | UNG602 | |
| Benda autoadesiva CoflexVet | Andover Healthcare, Inc. | 3540RB-018 | |
| Software per l'imaging ad ultrasuoni | Scion Image, Scion Corporation, USA | ||
| Software per l'elaborazione degli scintigrammi MicasXplus | Bartec Technologies Ltd | Contatore di | |
| isotopi http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html Field per il monitoraggio degli isotopi | John Caunt U.K. | GMS1800a | a http://www.johncaunt.com/ |
| pozzetti per misure isotopiche, calibratore di dose | Capintec Southern Scientific | CRC-25R |
Riferimenti
- Becerra, P., et al. Distribution of injected technetium(99m)-labeled mesenchymal stem cells in horses with naturally occurring tendinopathy. Journal of Orthopaedic Research. 31, 1096-1102 (2013).
- Nixon, A. J., Dahlgren, L. A., Haupt, J. L., Yeager, A. E., Ward, D. L.
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Ristampe e permessi
