마우스 폐 암 연구에 유용한 점안 및 고정 방법

Summary

이 논문의 목적은 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명하는 것입니다. 우리는 간단하고 확실하게 폐 instillations, 정착, 폐 용적 측정을 수행하는데 3 프로토콜을 제시한다.

Abstract

부상 또는 쥐를 죽이지 않고 직접 폐로 라이브 제제, 세포, 또는 화학 물질을 주입하는 능력은 폐암 연구에서 중요한 도구이다. 폐 기능 측정을 위해 마우스를 삽관하는 방법을 보여주는 게시 된 많은 방법이 있지만, 아무도는 마우스의 큰 동료의 급격한 기관 점안에 대한 잠재적 인 문제없이 없습니다. 본 논문에서는 간단하고 빠른 방법은 효율적인 방식으로 이러한 instillations을 수행하는 연구자있게 것이 기재되어있다. 이 방법은 특별한 도구 나 조명을 필요로하지 않고 약간의 연습을 배울 수 있습니다. 또한, 마우스를 마취 기관을 시각화 목에 작은 절개를 제작 한 후 직접 정맥 카테터를 삽입하는 것을 포함한다. 작은 절개 빠르게 조직 접착제로 폐쇄하고, 마우스를 복구 할 수있다. 숙련 된 학생 또는 기술자는 2 분 / 마우스의 평균 속도로 instillations을 수행 할 수 있습니다. T 일단암이 확립 그는, 폐의 조직 학적 정량 분석​​에 대한 요구가 빈번하다. 전통적으로 고정하는 동안 폐 인플레이션을 표준화 귀찮게하지 않습니다 일반적으로 병리학 및 분석은 종종 매우 주관적 일 수있는 평가 시스템을 기반으로합니다. 이 언젠가 폐 종양의 크기의 추정을위한 총 충분히 적합 할 수 있지만, 폐 세포 구조 또는 임의의 적절한 stereological 정량화 재현성 정착 과정 및 후속 폐 량 측정을 필요로한다. 여기에서 우리는 모두 압력 폐를 고정하고 정확하게 고정 폐 용적을 측정하는 간단한 신뢰할 수있는 절차에 대해 설명합니다. 유일한 요구 사항은 MG-1 300 g의 범위에 걸쳐 정확한 실험 실용 저울이다. 그러므로 여기에 제시된 절차는 크게 마우스에서 폐암을 생성 처리, 및 분석 할 수있는 능력을 향상시킬 수있다.

Introduction

여러 가지 이유로, 폐암 널리 마우스에서 연구되지 ​​않았다. 그 이유 중 하나는 폐에 대한 액세스가 생체 내에서 매우 곤란하며, 고정 된 폐의 정량 분석은 일반적으로 수행되지 않는다는 것이다. 이 문서에서 설명하는 방법은이 상황을 해결하기 위해 설계되었습니다. 목표는 여기에 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명한다. 이러한 방법 중 어느 것도 완전히 새로운 없지만, 그들은 여기에 설명 된대로 단순화 된 방식으로 독립 실행 형 방법으로 함께 제시되지 않았다.

주로 길이 연구에서 개별 마우스에서 반복 폐 기능 또는 기관지 세척을하는 목적 마우스 폐 삽관 용 방법을 설명 하였다 원고있어왔다. 그 원래의 종이 때문에, MOUS에 다른 접근 방식을 설명했다 몇 가지 다른 논문이 있었다전자 삽관 ^{1 -9.} 이들 방법 모두가 성공적으로 사용될 수 있지만, 그들은 일반적으로 상당한 훈련이 필요하며, 사소 실패율없이 종종있다. 또한, 폐 기능의 측정을 수행하기 위해, 캐 뉼러는 공기 누설이 없도록 충분히 밀접 기관 적합해야한다. 그러나, 삽관 용 다른 실용적인 사용은 폐에 직접 특정 에이전트 (암세포 또는 기타 욕설) 또는 치료제를 제공하는 것이다. 이러한 절차는 꽉 ....

Protocol

다음 프로토콜은 20-35g 마우스에서 잘 작동하는 시스템을 설명합니다. 방법은 쉽게 간단히 카테터의 크기를 변경하여 더 크거나 작은 마우스에 적응 될 수있다. 모든 동물 프로토콜은 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.

1. 폐 떨어 뜨림

1. 삽관에 사용하는 상용 1 인치 긴 20g 정맥 캐뉼라를 선택합니다.
2. 수동으로도 1에 도시 된 바와 같이 그 선단부에 약간의 곡률을 생성하도록 절곡 카테터 팁을 수정한다.
3. IP는 케타민 (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (15 ㎎ / ㎏)의 혼합물로 마취 주사 마우스, 반사 및 움직임의 부재를 확인하여 마취. 즉시 마취 후 눈에 수의학 연고를 적용합니다. 마취는 눈에 수의학 연고를 적용하고 이후 수술 및 점안 마취에 대한 카프로 펜 (5 ~ 10 ㎎ / ㎏ SQ)을 얻었다 직후.
4. 양해 각서 (MOU)를 배치경 사진 플랫폼에 자체 부정사. 도 2에 도시 된 바와 같이, 봉합 루프와 함께 큰 사무실 바인더 완벽 잘 작동에 녹화.
5. 목 청소의 복부 부분을 면도하고 70 % 알코올로 목 영역을 소독. 새로운 라텍스 -와 powder- 무....

Results

절차는 그 자체로 어떤 일반화 된 결과로 연결되지 않는 첫 번째 프로토콜에 대해 설명합니다. 단지 직접 기관지 내로 물질을 주입하기위한 수단을 더 믿을만한 설명한다.도 7은 트립 판 블루가 여기에 기재된 방법에 주입시킨 폐의 일례를 도시한다. 기관 또는 마우스 ^{(11, 12)에} 주어진 다른 염료 또는 추적자로 볼 된 것과 유사한 염료의 광범위한 분포는있다. 우리는 또한 각각 널리 섬유증이나 폐기종, 결과 폐에 블레오 마이신 또는 엘라 스타 제를 제공하기 위해이 방법을 사용했다.

사후 폐에서 구조적 변화를 정량화 기재된 절차는 25cm의 H ₂ O의 압력으로 고정 폐 볼륨에 데이터를 제공 할 이러한 볼륨 측정은 총 수 ^(10)에 세포 또는 조직 밀도의 후속 편견 조직 학적 측정을 변환하는 것이 필수적이다. 본 논문 만 드매우 정확한 폐 용적을 구하는 수단을 스.......

Discussion

여기에 설명 된 절차는 여러 가지 장점이있다. 먼저 필요한 장비는 간단하고 저렴하다. 둘째, 삽관 빠르게 거의 오류없이 수행 할 수있다. 셋째로, 고정 폐 용적을 일정한 압력으로 폐를 고정하고 측정하는 능력은 폐 ^(10)의 구조 또는 셀의 적절한 정량을 허용한다.

삽관에 한 가지 단점은 작은 수술이다. 이것은 2 ^{차 점적} 주입이 필요한 경우의 절차를 반복 할 수있는 능력을 제한 할 수있다. 그러나, 접착제의주의 수술과 응용 프로그램과 함께 우리는 정기적으로 또는 두 개의 나중에 제 점안 일주일을 할 수 있었다. 연속 반복 instillations가 필요 또는 반복적으로 폐 기능 검사가 필요한 경우, 다른 삽관 방식은 ^13,14 더 바람직 할 수있다합니다.

점안을함으로써, 언급해야 몇 가지 실제적인 문제가 있습니다. 그것은 중요 T입니다오 입의 초기 개방의 혀의 움직임.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
실험실 저울	Ohaus	Adventurer Pro 모델 AV 313	범위가 1-300g인 경우 다른 저울을 사용할 수 있습니다
20g Luer 정맥 카테터	Insylte		다른 여러 가능한 공급업체, 예: , Jelco Optiva
500ml 실험실 병	다양한		기타 여러 가능한 공급업체