Thromboembolische Schlaganfallmodelle sind wichtige Werkzeuge zur Optimierung der Rekanalisationstherapie. In dieser Arbeit berichten wir über ein murines thrombotisches Schlaganfallmodell, das auf einem transitorischen zerebralen hypoxisch-ischämischen (tHI) Insult basiert, der Thrombose und Infarkt auslöst und positiv auf die durch Gewebeplasminogenaktivator (tPA) vermittelte Fibrinolyse in einem therapeutischen Fenster ähnlich wie bei Schlaganfallpatienten anspricht.
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Methodenartikel
A thrombotischer Schlaganfall Modell basierend auf Transient zerebrale Hypoxie-Ischämie
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Stroke Forschung hat viele Rückschläge bei der Übersetzung neuroprotektive Therapien in die klinische Praxis ausgehalten. Im Gegensatz dazu die reale Therapie (tPA Thrombolyse) selten produziert Vorteile in mechanischen Verschluss-basierten experimentellen Modellen, die präklinische Schlaganfallforschung dominieren. Diese Spaltung zwischen der Bank und Nacht schlägt vor, die Notwendigkeit, die tPA-responsive Modelle in präklinische Schlaganfallforschung beschäftigen. Zu diesem Zweck ist ein einfacher und tPA-reaktiven thrombotischer Schlaganfall-Modell erfunden und hier beschrieben. Dieses Modell besteht aus transienten Okklusion der einseitigen Arteria carotis communis und die Lieferung von 7,5% Sauerstoff über eine Gesichtsmaske in erwachsenen Mäusen für 30 min, während die Tier rektale Temperatur bei 37,5 ± 0,5 ° C. Obwohl reversible Ligation des einseitigen Karotis oder Hypoxie jeweils drückt zerebralen Blutfluß nur vorübergehend, die Kombination beider Beleidigungen verursacht dauerhafte Reperfusion Defiziten, Fibrin und die Blutplättchenablagerung und große Infarct in der A. cerebri media versorgten Gebiet. Wichtig ist, dass Schwanzvenen-Injektion von rekombinantem tPA bei 0,5, 1, oder 4 Stunden nach der THI (10 mg / kg) bereitgestellt zeitabhängige Verringerung der Sterblichkeit und die Infarktgröße. Diese neue Hub-Modell ist einfach und kann in Laboren standardisiert auf experimentellen Ergebnissen zu vergleichen. Ferner induziert es Thrombose ohne Kraniektomie oder zu vorgeformten Embolien. Angesichts dieser einzigartigen Verdienste ist die THI-Modell eine sinnvolle Ergänzung zum Repertoire präklinische Schlaganfallforschung.
Einleitung
Thrombolyse und Rekanalisation ist die effektivste Therapie des akuten ischämischen Schlaganfalls in der klinischen Praxis 1. Dennoch war die Mehrheit der präklinischen Forschung Neuroprotektion in einem transienten Mechaniker Obstruktion Modell (intraluminale Naht mittleren Hirnarterie), die schnelle Wiederherstellung des zerebralen Blutflusses nach dem Entfernen des Gefäßverschlusses erzeugt und zeigt wenig bis keine Vorteile tPA Thrombolyse durchgeführt. Es wurde vorgeschlagen, dass die zweifelhaften Wahl der Taktmodelle beigetragen, zumindest teilweise auf die Schwierigkeit bei der Übersetzung neuroprotektive Therapie für die Patienten 2,3. ....
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Protokoll
Dieses Protokoll wird von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) der Emory University zugelassen und folgt den National Institutes of Health der Leitlinie für die Pflege und Verwendung von Labortieren.
1. Setup-
- Vorbereitung des chirurgischen Bett auf Erwärmung Pad mit Wärmepumpe bei 37 ° C für mindestens 15 min vor der Operation verbunden sind. Legen Sie eine Nackenrolle mit dem Lauf 3-ml-Spritze auf dem OP-Bett. Bereiten Sie das Anästhesiegas mit 2% Isofluran in der medizinischen Luft.
- Bereiten autoklaviertem Zangen, Scheren, Nadelhalter Mikro, Gefäßklemme, Wattestäbchen und Nähte. Bereiten Ge....
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Ergebnisse
Zweidimensionale Laserfleckenkontrast-Bildgebung (LSCI) 16 wurde verwendet, um die Änderungen des zerebralen Blutflusses (CBF) durch 30-minütiges transienten einseitige Carotisokklusion (tCCAO), 30 min Einwirkung von Hypoxie (7,5% Sauerstoff) und 30 min einseitigen Vergleichs Karotis-Ligation unter Hypoxie (THI). Dieses Experiment zeigte, dass unter Normoxie tCCAO drückte die CBF auf der Carotis, ligiert Hemisphäre zu ~ 50% des Ausgangswertes, der schnell auf über 85% nach dem Lösen der Carotisokklusion (R in.......
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Diskussion
Schlaganfall ist ein großes gesundheitliches Problem von wachsender Bedeutung für jede Gesellschaft mit einer alternden Bevölkerung. Weltweit ist Schlaganfall die zweithäufigste Todesursache mit einem geschätzten 5,9 Millionen tödlichen Ereignisse im Jahr 2010, das entspricht 11,1% aller Todesfälle 18. Schlaganfall ist die dritthäufigste Ursache für Behinderungen bereinigte Lebensjahre (DALYs) verloren global im Jahr 2010, die sich aus dem fünften Platz im Jahr 1990 19. Diese epidemiologischen Date.......
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Danksagungen
Diese Studie wurde durch den NIH-Zuschuss NS074559 (an C. K.) unterstützt. Wir danken allen Mitarbeitern, die zu unseren Forschungsartikeln beigetragen haben, auf denen der vorliegende Methodikbericht basiert.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| adulte männliche Mäuse | Charles River | C57BL/6 | 10-13 Wochen alt (22-30 g) |
| Mobiles Anästhesiesystem für Labortiere | VetEquip | 901807 | Anästhesie |
| Medizinischer Lufttank (komprimiert) Airgas | UN1002 | Anästhesie | |
| Isofluran | Piramal Healthcare | NDC 66794-013-25 | Anästhesie |
| Multi-Station Labor AnästhesieSystem für Labortiere | Surgivet | V703501 | Hypoxiesystem |
| 7,5 % O2 ausgeglichen durch 92,5 % N2 Tank | Airgas | UN1956 | Hypoxie-System |
| Temperaturregler mit Heizlampe | Cole Parmer | EW-89000-10 | Temperaturregler |
| Rektalsonde | Cole Parmer | NCI-00141PG | Temperaturregler |
| Präpariermikroskop | Olympus | SZ40 | chirurgische |
| Einrichtung Wärmepumpe mit Wärmekissen | Gaymar | TP700 | Chirurgischer Aufbau |
| Fein gebogene Pinzette (gezahnt) | FST | 11370-31 | chirurgisches Instrument |
| Fein gebogene Pinzette (glatt) | FST | 11373-12 | für chirurgisches Instrument |
| Mikroschere | FST | 15000-03 | für chirurgische Instrumente |
| FST | 12060-01 | chirurgisches Instrument | |
| Halsted-Mosquito Hämostaten | FST | 13008-12 | chirurgisches Instrument |
| 5-0 Seidennaht | Harvard Apparat | 624143 | chirurgisches |
| Zubehör 4-0 Nylon monofile Naht | LOOK | 766B | chirurgisches Zubehör |
| Gewebekleber | Abbott Laboratories | NC9855218 | chirurgisches Zubehör |
| Puralube Vet Salbe | Fisher | NC0138063 | Vorbeugung von Augentrockenheit |
| MoorFLPI-2 Blutfluss-Imager | Moor | 780-nm Laserquelle | Laser Speckle Contrast Imaging |
| Mannitol | Sigma | M4125 | in vivo TTC |
| 2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) | Sigma | T8877 | in vivo TTC |
| Vibratome | Stoelting | 51425 | Gehirnschnitt für in vivo TTC |
| Digitalmikroskop | Dino-Lite | AM2111 | Ganzhirn-Bildgebung |
| O.C.T. Verbindung | Sakura Finetek | 4583 | |
| Ziege Anti-Kaninchen Alexa Fluro 488 | Invitrogen | A11008 | Immunhistochemie |
| Kryostat | Vibratome | ultrapro 5000 | Gehirnschnitt für IHC |
| Evans blau | Sigma | E2129 | Detektion von Gefäßen Perfusion |
| Mikrotom | Elektronenmikroskopie Sciences | 5000 | Gehirnschnitt für die Histologie |
| Avertin (2, 2, 2-Tribromethanol) | Sigma | T48402 | Euthanasie |
| Fluoreszenzmikroskop | Olympus | DP73 | |
| Meloxicam SR | ZooPharm | NSAID Analgesie |
Referenzen
- Broderick, J. P., Hacke, W. Treatment of acute ischemic stroke: Part I: recanalization strategies. Circulation. 106 (12), 1563-1569 (2002).
- Hossmann, K. A. Pathophysiological basis of translational stroke research. Folia Neuropathol. 47 (3), 213-227 (20....
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Nachdrucke und Genehmigungen
