We describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action.
The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is limited to cell proliferation and gene expression endpoints. However, in the organism, mammary morphogenesis occurs in a 3D environment. 3D culture systems help bridge the gap between monolayer cell culture (2D) and the complexity of the organism. Herein, we describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action. It uses the commercially available hormone-responsive human breast epithelial cell line, T47D, and rat tail collagen type 1 as a matrix. This 3D culture model responds to the main mammotropic hormones: estradiol, progestins and prolactin. The influence of these hormones on epithelial morphogenesis can be observed after 1- or 2-week treatment according to the endpoint. The 3D cultures can be harvested for analysis of epithelial morphogenesis, cell proliferation and gene expression.
В отличие от стандартных 2D культур, 3D клеточных культур суррогатных модели позволяют для изучения эпителиального клеточного поведения в физиологически соответствующей контексте, одной напоминающей ткань. 3D культуры молочной железы помогли выяснить многие аспекты развития молочных желез и неоплазии. Тем не менее, большинство моделей культуры 3D доступных в настоящее время являются неподходящими для изучения гормональное действие, поскольку эпителиальные клеточные линии человека, используемые для выполнения этой задачи лишены экспрессии 6,7,9 рецептора гормона.
Здесь мы описываем 3D модель культуры эпителия молочной железы человека, который подходит для изучения гормона действие 12. Эта модель использует коммерчески доступный гормон реагирует человеческий клеточную линию рака молочной эпителиальных, T47D 3,11,13, которые были первоначально полученную из плеврит, полученной из 54-летней пациентки в с проникающими раком протоков молочной железы. Мы используем крысиного хвоста коллагена типа 1 в качестве матрицы. Эта 3D культЮр модель подходит для изучения действия трех основных mammotropic гормонов (эстрадиола, promegestone (аналог прогестерона), и пролактина) на клетках рака молочной эпителиальных человека. Гормон-индуцированный эпителиальный морфология может быть оценена количественно с течением времени с помощью морфометрического анализа 12.
Необходимости повышения плотности посева дает эти 3D культур должны храниться в течение 2-х недель. К этому времени, разработка структур является достаточным для надежного количественной оценки действия гормонов на эпителиальной морфологии. Гели могут также быть собраны в более ранних временных точках для клеточной пролиферации и экспрессии генов анализов. Кроме того, эта модель подходит для проверки эффектов последовательного гормонального лечения; Например, после обработки эстрадиола в течение первой недели и замены с другими гормона / комбинации гормонов в течение следующей недели. Эффект эстрогенных соединений и антиэстрогены, такие как ICI 182,780, также могут быть стуумер использовании этого 3D культуры модель 12.
Here, we describe a hormone-sensitive 3D culture model to test the action of hormones on breast epithelium. The response to hormones can be assessed at the tissue morphology, cell proliferation and gene expression levels 12. One limitation of this technique is that visualization during the culture period is restricted to light microscopy since the cultures are grown in a plastic bottom plate. The 3D culture system could be adapted to glass bottom plates to allow for live imaging of the cultures 1.</…
The authors have nothing to disclose.
Мы высоко ценим редакционных взносы от Шерил Schaeberle. Это исследование было поддержано Avon грантов # 02-2009-093 и 02-2011-095 и NIEHS / NIH ES 08314 до AMS. Этот материал предназначен исключительно ответственности авторов и не обязательно отражает официальную точку зрения Национального института гигиены окружающей среды наук или Национального института здоровья.
12-well Tissue Culture Plates (Falcon) | Fisher Scientific | 08-772-29 | |
15 ml polystyrene conical Tubes | Fisher Scientific | 14-959-49D | |
Activated Charcoal | Sigma | C-5510 | |
Carmine Alum | Sigma | C1022-100G | |
Collagenase, Type 3 | Worthington | S0C11784 | |
Confocal Microscope | Zeiss | LSM510 | Equiped with HeNe 633nm laser |
Dextran T-70 | Abersham/Pharmacia | 17-0280-01 | |
DMEM/F-12, HEPES, no phenol red | Life Technologies | 11339-021 | Phenol red-free media for hormone use |
DMEM, low glucose, pyruvate, no glutamine, no phenol red | Life Technologies | 11054-020 | Phenol red-free media for hormone use |
17-β-Estradiol | EMD Millipore | 3301 | Dissolved in Ethanol |
Ethanol | Koptec | V1001 | |
Fetal Bovine Serum | Hyclone | SH30070.03 | For use with hormones, must be Charcoal Dextran stripped |
Filters (115ml) | Nalgene | 380-0080, 245-0045, 120-0020 | 0.88, 0.45, 0.20 micron, respectively |
Formalin, 10% | Fisher Scientific | SF93-20 | |
L-Glutamine (200 mM) | Life Technologies | 25030-081 | |
ICI 182,780 (fulvestrant) | Sigma Aldrich | I4409-25MG | Dissolved in DMSO |
Microtome | Leica | RM2155 | |
Tissue embedding media | McCormick Scientific | 39502004 | |
Penicillin | Sigma | 7794-10MU | Dissolved in 10 ml of distilled deionized water |
Permount | Fisher Scientific | SP15-500 | |
Phosphate Buffered Saline pH 7.4 | Sigma Aldrich | P3813-10PAK | |
Prolactin | Sigma Aldrich | L4021-50UG | Dissolved in distilled deionized water |
Promegestone | Perkin Elmer | NLP004005MG | Dissolved in Ethanol |
Rat-Tail Collagen | Corning | 354236 | Lots may contain varying concentrations, note accordingly |
Scalpel | Miltex | 4311 | |
Semi-enclosed Benchtop Tissue Processor | Leica | TP1020 | |
Sodium Hydroxide | Sigma Aldrich | S5881 | Prepare 1N NaOH stock |
StaticMaster Anti-static brush | Amstat | C3500 | |
Stripette Serological Pipettes | Corning | 4101 | |
T-25 flasks | Corning | 430168 | |
Tissue Cassettes | Fisher Scientific | 15-200-403E | |
Wheaton Vials, Glass, 20mL | Fisher Scientific | 03-341-25D | |
Xylene | VWR | 95057-822 |