A preparação apresentada aqui para o condicionamento do piscar de olhos sinalizado pelo bigode em camundongos com a cabeça fixa estimula precisamente bigodes específicos, permitindo que os camundongos deambulem em uma esteira cilíndrica. Um estímulo condicionado de estimulação de bigode (CS) emparelhado com um estímulo incondicionado de choque periorbital (US) resulta em aprendizado associativo confiável neste aparelho.
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Artigo de método
sinalizado-Bigode Eyeblink condicionamento clássico em Ratos fixo-Cabeça
Neste artigo
Resumo
Resumo
O condicionamento do piscar de olhos é um paradigma comum para investigar os mecanismos neurais subjacentes ao aprendizado e à memória. Para melhor utilizar o extenso repertório de técnicas científicas disponíveis para estudar o aprendizado e a memória no nível celular, é ideal ter uma plataforma craniana estável. Como os camundongos não toleram prontamente a contenção, eles geralmente são treinados enquanto se movem livremente em uma câmara. As informações de estímulo condicionado (CS) e estímulo incondicionado (US) são fornecidas e as respostas de piscar de olhos são registradas por meio de uma corda conectada à cabeça do mouse. No aparelho de cabeça fixa apresentado aqui, os ratos podem correr como quiserem enquanto suas cabeças estão presas para facilitar a experimentação. O condicionamento confiável da resposta ao piscar de olhos é obtido com este aparelho de treinamento, que permite a administração de estimulação do bigode como o CS, um choque elétrico periorbital como o US e a análise da atividade eletromiográfica (EMG) da pálpebra para detectar respostas ao piscar.
Introdução
condicionado piscar de olhos é uma forma de condicionamento pavloviano e um sistema modelo para investigar os mecanismos neurais de aprendizagem associativa e memória. Tem sido investigada em várias espécies, incluindo humanos, coelhos, gatos, ratos e ratinhos. O paradigma envolve a apresentação de dois estímulos emparelhados: um estímulo neutro condicionado (CS; por exemplo, um tom, um flash de luz, ou a estimulação whisker), e um estímulo incondicionado saliente (US; por exemplo, um sopro de ar para o olho, ou choque periorbital). Os EUA provoca uma incondicionada, a resposta eyeblink reflexiva (ou seja, UR). Eventualmente, após várias ap....
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Protocolo
Todos os procedimentos envolvendo ratos foram realizados de acordo com os protocolos aprovados pelo Animal Care Institucional da Universidade Northwestern e do Comitê Use com base nas diretrizes emitidas pelo Instituto Nacional de Saúde.
1. O cilindro (Figura 2A)
- Construir o cilindro, como descrito por Chettih et ai. E Heiney et al., A partir de um cilindro de espuma de longa 14-15. Cortar um comprimento de 10 cm de cilindro e perfurar um furo através do centro para encaixar o eixo, um metal haste de 12,7 mm (0,5 pol.) De diâmetro. Montar o cilindro com o seu eixo para uma placa de ensaio óptico de ....
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Resultados
8-10 semana do sexo masculino de idade ratinhos C57BL6 / J foram treinados sobre trace eyeblink condicionado no aparelho esteira cilíndrico fixo-cabeça. 8 ratos foram treinados com apresentações emparelhadas CS-americanos (grupo condicionado) e 9 ratos foram treinados com apresentações CS e US desemparelhados (grupo pseudoconditioned).
Exemplo EMG gravações de uma resposta condicionada de um ratinho condicionados são apresenta.......
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Discussão
Classical eyeblink condicionado é uma forma de aprendizagem associativa que é uma ferramenta útil para a compreensão das bases neurais subjacentes à aprendizagem e memória. Os métodos anteriores empregues para o condicionamento de piscar de roedores, tais como ratinhos envolveu uma câmara que permitiu que o animal se mover livremente. A preparação fixa-cabeça para o condicionamento de piscar de ratinhos, usando o aparelho descrito por Chettih et ai. E Heiney et ai., E utilizados mais recentemente, em l.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo Departamento de Defesa (W81XWH-13-01-0243) e os Institutos Nacionais de Saúde (R37 AG008796). Agradecemos Alan Baker em oficina mecânica da Universidade Northwestern para a construção do aparelho de cilindro fixo-cabeça. Agradecemos ao Dr. Shoai Hattori por sua orientação em MATLAB e Solidworks. Agradecemos ao Dr. John Power para o software LabView que controlava o experimento.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Rolo de Espuma TeraNova Exervo 36" x 6" | Amazon | B002ONUM0E | Para cilindro |
| de Plexiglas | Feito sob medida; | ||
| Varetas de Metal de 1 cm de espessura (12.7 mm de diâmetro) | de máquina 4-40 feito sob medida | ||
| (.25 em. longo) | Amazon Supply | B00F33Q8QO | Para cilindro |
| Design Clássico Pente de Cabelo | Conair | 93505WG-320 | Para estimulação de bigode |
| Atuador de Dobra Retangular de 2 Camadas | Piezo Systems | T220-A4-303X | Para estimulação do bigode |
| Kit de solda e fluxo | Sistemas piezoelétricos | MSF-003-NI | Para estimulação do bigode |
| Base magnética | Thor Labs | MB175 | Para estimulação do bigode |
| Haste roscada para base | Tiras feitas | ||
| sob medida com base em conectores de tira de nylon da série 221 da Electronic Connector Corp. | Feito sob medida, baseado em Weiss e Disterhoft, | ||
| Transistor Estilo TO-220 | Amazon Supply | B0002ZPZYO | Para conector; para as asas |
| Soquetes Relia-Tac Conector | Eletrônico Corp. | 220-S02 | Para conector |
| Relia-Tac Pins | Electronic Connector Corp. | 220-P02 | Para cabeça |
| 0-80 parafuso de máquina de aço inoxidável (1 pol. de comprimento) | de | Bloqueio | Amazon Supply |
| B000FN68EE 0-80 parafuso de máquina de aço inoxidável porca sextavada (5/32 pol. de espessura) | Amazon Supply | B000N2TK7Y | Cabeça de Parafuso |
| de Travamento Loctite Super Cola-Loctite Líquida | 1365896 | Cola cianoacrílica; para o parafuso de travamento | |
| Ajuste Rápido Epoxy | Ace Hardware | 18613 | Para sistema de estimulação de conector e bigode |
| Fios de | O cabo Ethernet pode ser desmontado para usar os fios individuais para o conector | ||
| Fios de aço inoxidável revestidos com poliimida (2 em. de comprimento, 0,005 pol. diâmetro) | PlasticsOne | 005sw/2.0 37365 S-S | Para antena, EMG e fios de choque |
| Fio de aço inoxidável não revestido (.005 em. diâmetro) | AM Systems | 792800 | Para capacete, fios terra |
| Tenma Autotransformador Variável | Tenma | 72-110 | Para a estimulação do bigode; reostato para ajustar a corrente para o atuador de flexão |
| Amplificador | A-M Systems | 1700 | Amplificador para filtrar e amplificar sinais EMG |
| WPI A385R isolador de estímulo World | Precision Instruments | 31405 | Para o choque elétrico |
| Isothesia (Isoflurano) | Henry Schein: Saúde Animal | 50031 | Para cirurgia; anestesia |
| Buprenex Injetável CIII | Reckett Benckiser Pharmaceuticals Inc | NDC 12496-0757-1 | Para cirurgia; analgésico |
| Akwa Tears: Lubrificante Pomada Oftálmica | Akorn | NDC 17478-062-35 | Pomada lacrimal artificial para prevenir olhos secos enquanto sob anestesia |
| Almofadas de Preparação de Povidina-Iodo | PDI | NDC 10819-3883-1 | Para cirurgia; Almofadas |
| Podem ser compradas em qualquer farmácia padrão | |||
| Cabos de bisturi cirúrgico de aço inoxidável (no.3) | Integra Miltex | 4-7.Para | cirurgia |
| Lâminas de bisturi cirúrgico de aço inoxidável | Integra Miltex | 4-310 ou 4-315 | Para cirurgia; lâmina de bisturi número 10 ou 15 |
| % de Peróxido de | Pode ser comprado de qualquer farmácia padrão | ||
| Micro Clip | Roboz | RS-5459 | Para cirurgia, para segurar a pele |
| 00-90 parafuso de máquina de aço inoxidável (0.0625 em. longo) | Amazon Supply | B002SG89X4 | Para cirurgia, para enrolar o fio terra ao redor |
| Ferramenta rotativa profissional | Walnut Hollow | 29637 | Broca manual para cirurgia, para fazer furos no crânio |
| Rebarba de cone invertido | Roboz | RS-6282C-34 | Tamanho da rebarba de cone invertido 34; para cirurgia, para fazer furos no crânio |
| Broca de corte de gravação | Dremel | 106 | Cortador de gravura; broca de 1,6 mm; para cirurgia, para fazer furos no crânio |
| C & B Metabond-Rápido! Sistema de cimento "B" Base Rápida | Parkell | S398 | Para cirurgia; sistema de cimento cimentante adesivo; importante para evitar a avulsão |
| do capacete C & B Metabond-Rápido! Sistema de cimento L-Powder | transparente Parkell | S399 | Para cirurgia; sistema de cimento de cimentação adesiva; importante para evitar a avulsão |
| do capacete C & B Metabond-Rápido! Catalizador universal 0,7 ml | Parkell | S371 | TBB do cimento Para a cirurgia; sistema de cimento de cimentação adesiva; importante impedir a avulsão |
| C& do headpiece B Metabond-Rápido! Sistema de Cimento Prato de Mistura de Cerâmica com faixa de temperatura | Parkell | S387 | Para cirurgia; sistema de cimento de cimentação com adesivo; importante para prevenir a avulsão do capacete |
| Pinças Suíças, estilo #5 | World Precision Instruments | 504506 | Para cirurgia |
| Aplicadores Puritanos com Ponta de Algodão | VWR International | 10806-005 | Para cirurgia |
| Kit de cimento de aperto de calafetagem dental | Dentsply | 675570 | Para cirurgia; cimento dental |
Referências
- Clark, R. E., Squire, L. R. Classical conditioning and brain systems: the role of awareness. Science. 280 (5360), 77-81 (1998).
- Thompson, R. F., Kim, J. J. Memory systems in the brain and localization of a memory. PNAS. 93 (24), 13438-13444 (1996).
- Solomon, P. R., Vande....
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Reimpressões e permissões
