पौधों में मछली के लिए उपयुक्त एक फास्ट हवा शुष्क गिराने क्रोमोजोम तैयारी विधि
Summary
A protocol is described for the preparation of high-quality mitotic plant chromosome spreads by a fast air-dry dropping method suitable for the FISH detection of single and high copy DNA probes.
Abstract
गुणसूत्र फैलता की तैयारी स्वस्थानी संकरण में प्रतिदीप्ति के सफल प्रदर्शन (मछली) के लिए एक शर्त है। उच्च गुणवत्ता के पौधे गुणसूत्र फैलता की तैयारी की वजह से कठोर कोशिका दीवार को चुनौती दे रहा है। संयंत्र गुणसूत्रों की तैयारी के लिए मंजूरी दे दी तरीकों में से एक एक तथाकथित बूंद तैयारी भी बूंद-प्रसार या हवा सुखाने तकनीक के रूप में जाना जाता है। यहाँ, हम mitotic गुणसूत्र के तेजी से तैयार करने के लिए एक प्रोटोकॉल एकल और उच्च प्रतिलिपि डीएनए जांच की मछली का पता लगाने के लिए उपयुक्त फैलता प्रस्तुत करते हैं। इस विधि को 50% -55% की सापेक्ष आर्द्रता के तहत प्रदर्शन हवा शुष्क ड्रॉप विधि के एक उन्नत संस्करण है। इस प्रोटोकॉल अपने आवेदन, आसान, कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाने धोने कदम की एक कम संख्या में शामिल हैं। इस दृष्टिकोण का स्पष्ट लाभ सफल मछली के विश्लेषण के लिए एक आदर्श शर्त के रूप में सेवारत अच्छी तरह से फैला है, क्षतिग्रस्त और कई मेटाफ़ेज़ गुणसूत्रों हैं। इस प्रोटोकॉल का उपयोग हम उच्च गुणवत्ता वाले क्रोम प्राप्तosome फैलता है और Hordeum vulgare, एच bulbosum, एच Marinum, एच murinum, एच pubiflorum और Secale cereale के लिए प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मछली का परिणाम है।
Introduction
सीटू संकरण (मछली) में प्रतिदीप्ति गुणसूत्र के स्तर पर एकल और उच्च प्रतिलिपि दृश्यों की शारीरिक मानचित्रण के लिए एक प्रभावी उपकरण है। शर्त उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र फैलता की तैयारी है। पौधे और पशु कोशिकाओं के लिए समान रूप से उपयुक्त होगा कि कोई सामान्य गुणसूत्र तैयारी प्रोटोकॉल है। संयंत्र गुणसूत्रों की तैयारी की वजह से विभिन्न प्रजाति के भीतर कठोर कोशिका दीवार और विभिन्न कोशिका द्रव्य स्थिरता के लिए विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण है। संयंत्र गुणसूत्रों की तैयारी के लिए अनुकूल तरीकों में से एक भी बूंद-प्रसार के लिए तकनीक और हवा सुखाने तकनीक 1,2 के रूप में जाना जाता है एक तथाकथित ड्रॉप तकनीक है। इस विधि पहले इन विट्रो उगाया स्तनधारी कोशिकाओं 3 के लिए Rothfels और Siminovitch द्वारा 1958 में शुरू की गई थी। बाद में मार्टिन एट अल। 4 और काटो एट अल। 5 पौधों के लिए इस विधि अनुकूलित।
अभी हाल ही में एक विधि नाम 'SteamDrop &# 39; गैर अतिव्यापी गुणसूत्रों 6 की तैयारी के लिए पानी भाप का इस्तेमाल किया है, जो विकसित किया गया था। , उच्च आर्द्रता का सकारात्मक प्रभाव पहले 7 मनाया गया था, 'SteamDrop' उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र की तैयारी 6 के एक नियंत्रित कार्यप्रवाह बचाता है। भाप उपचार शायद गुणसूत्र प्रोटीन के कुछ संशोधनों से जुड़ा गुणसूत्रों की खींच का कारण बनता है। पूरा metaphase की पर्याप्त संख्या के बनाए रखने की बाद में मछली प्रयोगों के लिए तकनीकी विशेषज्ञता की मांग फैलता है, हालांकि मेटाफ़ेज़ फैलता है जिसके परिणामस्वरूप की गुणवत्ता में बहुत अधिक है।
यहाँ हम एकल और उच्च प्रतिलिपि जांच 5.8 की मछली का पता लगाने के लिए उपयुक्त mitotic अनाज गुणसूत्रों की तैयारी के लिए एक प्रोटोकॉल उपस्थित थे। इस विधि को काटो 50% -55% के सापेक्ष आर्द्रता के तहत प्रदर्शन 9 (चित्रा 1) द्वारा वर्णित हवा शुष्क छोड़ने विधि के एक उन्नत संस्करण है। इस प्रोटोकॉल के लिए एक कम नंबर शामिलअपने आवेदन, आसान, कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाने धोने कदम की। हम Hordeum vulgare, एच bulbosum, एच Marinum, एच murinum, एच pubiflorum और Secale cereale के लिए उच्च गुणवत्ता वाले गुणसूत्र फैलता है और मछली परिणाम प्राप्त इस प्रोटोकॉल का उपयोग करना।
Protocol
Representative Results
Discussion
गुणसूत्र तैयारी प्रयोग घास परिवार (Poaceae) से संबंधित अनाज की युवा जड़ों का उपयोग कर बाहर किया गया है। सभी का विश्लेषण प्रजातियों द्विगुणित जीनोम सेट में 14 अपेक्षाकृत लंबे mitotic मेटाफ़ेज़ गुणसूत्रों (11-15 माइ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We gratefully thank the DFG for financial support (HO 1779/21-1) as well as Katrin Kumke and Dr. Veit Schubert (IPK, Gatersleben) for technical advice.
Materials
| Hot Plate | MEDAX GmbH | 12603 | |
| Cellulase R10 | Duchefa | C8001 | |
| Cellulase | CalBioChem | 219466 | |
| Pectolyase | Sigma | P3026 | |
| Cytohelicase | Sigma | C8274 | |
| Texas Red-12-dUTP | Invitrogen | C3176 | direct fluorochrome |
| Fluor488-5-dUTP | Invitrogen | C11397 | direct fluorochrome |
| Fluorecsence microscope | Olympus BX61 | BX61 | |
| CCD camera | Orca ER, Hamamatsu | C10600 | |
| 4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) | Vector Laboratories | H-1200 | fluorecsent dye |
References
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