Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.
Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.
दूध नवजात शिशु के स्तनधारी, शिशु विकास और विकास 1,2 के लिए ऊर्जा और पोषक तत्वों को उपलब्ध कराने के लिए पोषण का एकमात्र स्रोत है। दूध मुख्य रूप से कोशिकाओं, लिपिड, और प्रोटीन 1 के होते हैं, यह भी एंजाइमों, कार्बोहाइड्रेट, हार्मोन, एंटीबॉडी, विकास कारकों साइटोकिन्स, exosomes, microvesicles, और छोटे RNAs ऐसे सहित वंश के प्रारंभिक जीवन के विकास मिलाना कि bioactive यौगिकों के ढेर सारे शामिल microRNA 1,2 के रूप में। शिशुओं की बीमारी से 2 कम संभावना है स्तनपान कि सबूत के साथ युग्मित प्रतिरक्षा वंश और आंत्र स्वास्थ्य 3 की स्थापना में मातृ दूध की मौलिक भूमिका, प्रारंभिक जीवन में रोग प्रक्रियाओं के साथ जुड़े दूध घटकों और शामिल आणविक तंत्र की पहचान करने के महत्व पर प्रकाश डाला गया उनके कार्यों में। विकासशील चूहा विभिन्न पोषण, शारीरिक के प्रभाव की जांच के लिए एक लोकप्रिय मॉडल है, और जल्दी पर रासायनिक हस्तक्षेप-Life विकास 4। चूहा दूध का विश्लेषण इसलिए मातृ और संतानों के स्वास्थ्य में उपन्यास अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकता है।
वर्तमान वैज्ञानिक प्रगति अब स्वास्थ्य और रोग पर विशेष दूध घटक के प्रभाव की गहराई से जांच के लिए अवसरों में वृद्धि प्रदान करते हैं। उदाहरण के लिए, दूध बैक्टीरियल प्रोफाइल के अनुक्रमण शिशु पेट 5 के शुरुआती आंतों उपनिवेशन में उनकी भूमिका को स्पष्ट किया गया है, दूध oligosaccharides के मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण मातृ आहार 6, और में स्रावित microRNA की गहरी अनुक्रमण के माध्यम से दूध oligosaccharide प्रोफाइल के परिवर्तन में अंतर्दृष्टि प्रदान की है मां के दूध के वसा ग्लोबुलेस जीन प्रतिलेखन, चयापचय, और प्रतिरक्षा समारोह 7 में संभव भूमिकाओं पर प्रकाश डाला गया।
चूहे मॉडल मातृ अध्ययनों 8,9 में इस्तेमाल सबसे लोकप्रिय मॉडल जीवों में से एक का प्रतिनिधित्व करते हैं। एक लाभ यह केवल approximat तक चलने वाले उनके छोटे हमल और स्तनपान की अवधि है,इली 21 दिनों के प्रत्येक; इसलिए स्तनपान करने के लिए गर्भावस्था के शुरू होने से कुल समय मूल्यवान डेटा उत्पन्न किया जा सकता है, जिसमें समय की एक छोटी अवधि का प्रतिनिधित्व करता है। चूहों की तुलना में चूहों के बड़े आकार, दूध संग्रह के संदर्भ में, दूध और दूध संग्रह में आसानी की मात्रा के संबंध में एक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान कर सकता है; माउस में दूध का उत्पादन, उदाहरण के लिए, और अधिक दूध 10 उत्पादन भारी चूहों के साथ शरीर के कुल वजन पर निर्भर हो रहा है।
इधर, स्तनपान कराने वाली चूहों से दूध के मैनुअल के संग्रह के लिए एक सामान्य वर्णन प्रदान की जाती है। इस प्रोटोकॉल, कम से कम उपकरणों की आवश्यकता है सस्ती, गैर इनवेसिव है, और आगे नीचे की ओर विश्लेषण के लिए दूध की पर्याप्त मात्रा में एकत्र करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। संक्षेप में, बांध दूध अपमान ऑक्सीटोसिन से प्रेरित है, isoflurane साथ anesthetized है, और दूध का दूध के मैनुअल अभिव्यक्ति के माध्यम से केशिका ट्यूब में एकत्र किया जाता है। अंत में, दूध के दो प्रमुख घटकों के रूप में प्रोटीन, एक संक्षिप्त descriptio मोटे हैं औरcreamatocrit माप 11 और एक मानक प्रोटीन परख का उपयोग कर कुल प्रोटीन एकाग्रता की मात्रा का ठहराव का उपयोग दूध वसा की मात्रा का आकलन करने के n प्रस्तुत किया है।
Investigations into maternal milk components have increased as interest in early life development research rises. As the sole source of nutrition during the neonatal period, the bioactive compounds in milk are essential for ideal growth and development, especially in the context of intestinal and immune health3. The method presented here is a simple, non-invasive method of collecting milk from the lactating rat in amounts sufficient for downstream analysis, such as oligosaccharide profiling6. The me…
The authors have nothing to disclose.
यह काम करता है प्राकृतिक विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल (RGPIN 238,382-2011) और स्वास्थ्य अनुसंधान (MOP115076) की कनाडा के संस्थानों से अनुदान के माध्यम से समर्थन किया था। हीदर पॉल एक प्राकृतिक विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल स्नातकोत्तर छात्रवृत्ति और एक अलबर्टा innovates स्वास्थ्य समाधान छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित किया गया। मेगन हलम एक प्राकृतिक विज्ञान और इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद स्नातकोत्तर छात्रवृत्ति, एक फ्रेडरिक बैंटिंग और चार्ल्स बेस्ट कनाडा ग्रेजुएट छात्रवृत्ति, और एक अलबर्टा बच्चों के अस्पताल अनुसंधान संस्थान प्रशिक्षण जेनेटिक्स में पुरस्कार, बाल विकास, और स्वास्थ्य द्वारा समर्थित किया गया।
Equipment – Milking | |||
1 ml syringes | BD-Canada | 309602 | |
25 G needles | BD-Canada | 305122 | |
18 G needles | BD-Canada | 305196 | |
50 ul Microdispenser Capillary Tubes | Fisher Scientific | 21-169D | |
Oxytocin (20 USP Units/ml) | Bimeda-MTC | 1OXY015 | |
PPC Vet Isoflurane Inhalation Anesthetic, 250 ml | Fresenius Kabi | M60302 | Used on the order of a veterinarian |
Sterile Alcohol Prep Pad | Dukal | 853 | |
Absorbent Bench Underpad | VWR | 82020-845 | |
Maxi-Therm Hyper/Hypothermia Blanket | Cincinnati Sub-Zero | 274 | |
Rodent Anesthesia Machine with Vaporizer | Benson Medical Industries Inc. | Subject to individual laboratory needs | |
Animal Masks | Benson Medical Industries Inc. | 50100/50102 | |
Microcentrifuge Tubes | Axygen | MCT-060-C | |
ChroMini Professional Trimmer | Wahl | – | |
Equipment – Creamatocrit | |||
StatSpin SafeCrit Plastic Microhematocrit Tubes (Untreated) | Fisher Scientific | 22-274-914 | |
Critoseal Capillary Tube Sealant Tray | VWR | 470161-478 | |
StatSpin CritSpin Microhematocrit Centrifuge | Beckman Coulter, Inc | X00-004999-001 |