Het uitvoeren van virale tests in een BSL-4 laboratorium is complexer vergeleken met werk in een BSL-2 laboratorium vanwege de vereiste aanvullende veiligheidsmaatregelen. Hier presenteren we een overzicht van de praktijken en procedures die in een BSL-4 laboratorium worden gebruikt, waaronder het correct gebruik van klasse II bioveiligheidskasten, afvalbeheer/verwijdering en monsterverwijdering.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Veiligheidsmaatregelen en operationele procedures in een (A) BSL-4 Laboratory: 2. Algemene Practices
In dit artikel
Erratum-melding
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Samenvatting
Samenvatting
Het werk in een bioveiligheid niveau 4 (BSL-4) containment laboratorium vergt tijd en veel aandacht voor detail. Hetzelfde werk dat wordt gedaan in een BSL-2 laboratorium met non-high-gevolg ziekteverwekkers zullen aanzienlijk langer duren in een BSL-4 setting. Deze verhoogde keer eis is te wijten aan een veelheid van factoren die gericht zijn op het beschermen van de onderzoeker van het laboratorium verworven infecties, de werkomgeving tegen mogelijke besmetting en de lokale gemeenschap van mogelijk vrijkomen van high-gevolg ziekteverwekkers. Binnen het laboratorium, wordt beweging beperkt door luchtslangen aan de verplichte full-body veiligheid past. Daarnaast wordt ontsmet elk item dat uit klasse II Bioveiligheidskasten (BSC) wordt verwijderd vereist. Laboratorium specialisten worden opgeleid in de praktijken van de BSL-4 laboratorium en moet een hoge vaardigheid in de vaardigheden die ze presteren tonen. De focus van dit artikel is om de juiste procedures en technieken om het laboratorium b garanderen schetseniosafety en experimentele nauwkeurigheid met behulp van een standaard virale plaque assay als een voorbeeld procedure. In het bijzonder, de juiste technieken om veilig in een BSL-4 omgeving werken bij het uitvoeren van een experiment visueel worden benadrukt. Deze technieken zijn onder meer: het opzetten van een klasse II BSC voor experimenten, een goede reiniging van de klasse II BSC als u klaar bent werken, afvalbeheer en veilige verwijdering van afval dat wordt gegenereerd in een BSL-4 laboratorium, en het verwijderen van geïnactiveerde monsters van binnen uit een BSL- 4 laboratorium naar de BSL-2 laboratorium.
Inleiding
Als de veiligheid van het laboratoriumpersoneel in de behandeling van high-gevolg ziekteverwekkers (geen infectie profylaxe of behandeling opties bestaan) voorop staat, heeft het Amerikaanse Department of Health and Human Services richtlijnen voor facility bouw en best practices voor de veilige uitvoering van het werk gelegd met pathogenen in biomedische en klinische laboratoria vanuit een perspectief bioveiligheid 1. Door middel van wet- en regelgeving, veel van de praktijken en procedures hebben dwingende voorschriften die moeten worden gevolgd voor het werken met deze pathogenen worden. In de VS, ziekteverwekkers die gemakkelijk worden overgedragen van ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Laboratorium Entry
- Verzamel alle benodigdheden van een BSL-2 laboratorium voor het experiment (bijvoorbeeld cellen, media, en verbruiksgoederen) voorafgaand aan binnenkomst in de BSL-4 laboratorium.
- Vul het BSL-4 binnenkomst procedure (in detail beschreven in referentie 7).
2. Voorbereiding van een klasse II bioveiligheid kast in de BSL-4 Laboratory
- Eenmaal in de BSL-4 laboratorium zorgen de dagelijkse interne checklist (figuur 1) is afgesloten. Voltooi de controlelijst als de checklist niet eerder is ingevuld en aan welke virussen worden gebruikt. Als de contro....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Naar aanleiding van de juiste procedures binnen de BSL-4 laboratorium zijn van cruciaal belang voor het waarborgen van veilige en effectieve voltooiing van de assays. Onder verwijzing naar de voltooide dagelijkse interne checklist (figuur 1), laboratoriumpersoneel zorgen dat apparatuur volledig operationeel. Juiste positionering van het lichaam in het midden van de BSC zorgt ervoor dat het experiment werd uitgevoerd onder optimale luchtstroom omstandigheden (figu.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het werk in een BSL-4 laboratorium vergt veel tijd en extra aandacht voor detail. Elk type van het werk in deze omgeving vereist goed opgeleid, grondig, en gewetensvolle individuen. De standaard virale plaque assay biedt een nauwkeurig model van een gemeenschappelijke procedure voor het werken met high-gevolg ziekteverwekkers in het BSL-4 laboratorium, als de test bestaat uit verschillende belangrijke concepten waarin laboratorium werknemers moet worden getraind.
De eerste belangrijke concep.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De inhoud van deze publicatie weerspiegelt niet noodzakelijkerwijs de standpunten of beleidslijnen van het Amerikaanse Department of Health and Human Services (DHHS) of van de instellingen en bedrijven die gelieerd zijn aan de auteurs. Dit werk werd gedeeltelijk gefinancierd via het hoofdcontract van Battelle Memorial Institute met het Amerikaanse National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) onder contractnummer HHSN272200700016I. M.R.H., D.P., L.B., K.J. en J.W. voerden dit werk uit als werknemers van Battelle Memorial Institute. Onderaannemers van Battelle Memorial Institute die dit werk hebben uitgevoerd zijn: S.M. als werknemer van MRI Global; M.G....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818500 | |
| 2 ml 96-Deep Well Plates | Fisher | 278743 | |
| 10 ml Serological Pipette | Fisher | 13-678-11E | |
| 25 ml Serological Pipette | Fisher | 13-678-11 | |
| 6-well plates | Fisher | 140675 | |
| Crystal Violet | Sigma | HT90132-1L | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher | 22-050-105 | |
| Tragacanth | Fisher | 50-702-2000 | |
| 20 µl Pipette Tips | Fisher | 21-402-550 | |
| 200 µl Pipette Tips | Fisher | 21-402-561 | |
| 1,000 µl Pipette Tips | Fisher | 21-402-581 | |
| DMEM | Lonza | 12-604Q | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | |
| Penicillin/Streptomycin | Lonza | 17-602E | |
| 2x EMEM | Quality Biological | 115-073-101 | |
| Pipettor | Drummond | 4-000-101 | |
| 1,000 µl Pipette | Rainin | L-1000XLS+ | |
| 200 µl Pipette | Rainin | L-200XLS+ | |
| 12-Well, Multichannel 200 µl Pipettor | Rainin | L12-200XLS+ | |
| 8-Well, Multichannel 1,000 µl Pipettor | Rainin | LA8-1200XLS | |
| Attest | Express Medical Supplies | MMM12192 | |
| Autoclave | Getinge | GEB 2404 AMB-2 | |
| Autoclave Bag | Fisher | 01-828E | |
| 2,000 ml Beaker | Fisher | 02-591-10H | |
| Autoclave Tray | Fisher | 13-359-20B | |
| Pipette Tray | Fisher | 13-361-5 | |
| 37 °C Incubator | Fisher | WU-39321-00 | |
| Biohazard Can | Rubbermaid Commercial | FG614500 RED | |
| Autoclave Tape | Fisher | 15-903 | |
| Autoclave Rod | Made by IRF Facility | N/A | |
| Light Box | Fisher | S11552 | |
| Heat Sealer | Fisher | NC9793612 | |
| Heat Seal Pouches | Fisher | 01-812-25H | |
| Biohazard Bag | Fisher | 01-828E |
Referenties
- Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 5th edn. Chosewood, L. C., Wilson, D. E. , , U.S. Dept. of Health and Human Services. Washington, D.C. Available from: http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/ (2009).
- Bioterrorism agents/diseases by category. , Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta, GA, USA. Available from: http://emergency.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp (2014).
- Executive order 13546 -- Optimizing the security of Biologi....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
Erratum
Formal Correction: Erratum: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
Posted by JoVE Editors on 12/05/2016. Citeable Link.
A correction was made to the authors section in: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
One of the authors names was corrected from:
Nicole Joselyn
to:
Nicole Josleyn
