L'esecuzione di saggi virali in un laboratorio BSL-4 è più complessa rispetto al lavoro in un laboratorio BSL-2 a causa delle precauzioni di sicurezza aggiuntive richieste. Qui, presentiamo una panoramica delle pratiche e delle procedure utilizzate all'interno di un laboratorio BSL-4 che illustrano il corretto utilizzo della cabina di biosicurezza di Classe II, la gestione/smaltimento dei rifiuti e la rimozione dei campioni.
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Articolo metodologico
Misure di sicurezza e procedure operative in un (A) laboratorio BSL-4: 2. Pratiche generali
In questo articolo
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Sommario
Abstract
Lavoro in un laboratorio di contenimento livello di biosicurezza 4 (BSL-4) richiede tempo e grande attenzione ai dettagli. Lo stesso lavoro che viene fatto in un laboratorio BSL-2 con gli agenti patogeni non ad alta conseguenza ci vorrà molto più tempo in un ambiente BSL-4. Questo aumento di requisito di tempo è dovuto ad una moltitudine di fattori che mirano a proteggere il ricercatore dalle infezioni acquisite in laboratorio, l'ambiente di lavoro dalla contaminazione potenziale e la comunità locale dal possibile rilascio di agenti patogeni ad alto conseguenza. All'interno del laboratorio, il movimento è limitato a causa di tubi dell'aria fissati ai obbligatorie tute di sicurezza di tutto il corpo. Inoltre, è necessaria la disinfezione di ogni elemento che viene rimosso dagli armadi classe II biosicurezza (BSC). specialisti del laboratorio devono essere addestrati nelle pratiche del laboratorio BSL-4 e devono dimostrare di alta competenza nelle abilità che stanno svolgendo. Il focus di questo articolo è quello di delineare le procedure e le tecniche per garantire laboratorio b adeguatiiosafety e precisione sperimentale utilizzando un saggio di placca virale standard, come un esempio di procedimento. In particolare, tecniche adeguate per lavorare in sicurezza in un ambiente BSL-4 durante l'esecuzione di un esperimento verrà sottolineata visivamente. Queste tecniche comprendono: la creazione di un BSC Classe II per gli esperimenti, la corretta pulizia del BSC Classe II, quando finito di lavorare, di gestione dei rifiuti e lo smaltimento sicuro dei rifiuti prodotti all'interno di un laboratorio BSL-4, e la rimozione di campioni inattivati dall'interno di un BSL- 4 di laboratorio al laboratorio BSL-2.
Introduzione
Poiché la sicurezza del personale di laboratorio di manipolazione di agenti patogeni ad alto conseguenza (non esistono profilassi delle infezioni, né le opzioni di trattamento) è di primaria importanza, il Dipartimento di Salute e Servizi Umani ha stabilito le linee guida per la costruzione impianto e le migliori pratiche per lo svolgimento sicuro del lavoro con agenti patogeni Biomediche e laboratori clinici dal punto di vista sicurezza biologica 1. Attraverso la legislazione e la regolamentazione, molte delle pratiche e delle procedure sono diventate requisiti obbligatori che devono essere seguite per il lavoro con questi patogeni. Negli Stati Uniti, gli....
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Protocollo
1. Ingresso Laboratorio
- Raccogliere tutte le forniture da un laboratorio BSL-2 per l'esperimento (per esempio, le cellule, i media, e materiali di consumo) prima dell'entrata in laboratorio BSL-4.
- Completare la procedura di inserimento BSL-4 (descritto in dettaglio in riferimento 7).
2. Preparazione di una classe II biosicurezza Gabinetto nel laboratorio BSL-4
- Una volta all'interno del laboratorio BSL-4, assicurare la lista di controllo interno giornaliero (Figura 1) è stato completato. Completare l'elenco di controllo se la lista di controllo non è....
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Risultati
A seguito di procedure corrette all'interno del laboratorio BSL-4 sono fondamentali per garantire il completamento sicuro ed efficace di test. Con riferimento alla lista di controllo interno giornaliero completato (Figura 1), personale di laboratorio affinché le attrezzature è pienamente operativo. Posizionamento del corpo corretto nel centro della BSC assicura che l'esperimento viene eseguito in condizioni di flusso dell'aria ottimali (Figura 2).
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Discussione
Lavoro in un laboratorio BSL-4 richiede molto tempo e ulteriore attenzione ai dettagli. Qualsiasi tipo di lavoro in questo ambiente richiede ben addestrato, approfondita, e gli individui coscienziosi. Il saggio di placca virale standard fornisce un modello accurato di una procedura comune per lavorare con gli agenti patogeni ad alto conseguenza in laboratorio BSL-4, come il saggio coinvolge alcuni importanti concetti in cui devono essere addestrati personale di laboratorio.
Il primo concetto.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Il contenuto di questa pubblicazione non riflette necessariamente le opinioni o le politiche del Dipartimento della Salute e dei Servizi Umani degli Stati Uniti (DHHS) o delle istituzioni e delle aziende affiliate agli autori. Questo lavoro è stato finanziato in parte attraverso il contratto principale del Battelle Memorial Institute con il National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) degli Stati Uniti nell'ambito del contratto n. HHSN272200700016I. M.R.H., D.P., L.B., K.J. e J.W. hanno svolto questo lavoro come dipendenti del Battelle Memorial Institute. I subappaltatori del Battelle Memorial Institute che hanno svolto questo lavoro sono: S.M. come d....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Etanolo | Fisher | BP2818500 | |
| 2 ml Piastre a 96 pozzetti | profonde Fisher | 278743 | |
| Pipetta sierologica da 10 ml | Fisher | 13-678-11E | |
| Pipetta sierologica da 25 ml | Fisher | 13-678-11 | |
| Piastre a 6 pozzetti | Fisher | ||
| Crystal Violet | Sigma | HT90132-1L | |
| 10% Formalina tamponata neutra | Fisher | 22-050-105 | |
| Tragacanth | Fisher | 50-702-2000 | |
| 20 μ l Puntali per pipette | Fisher | 21-402-550 | |
| 200 μ l Puntali per pipette | Fisher | 21-402-561 | |
| 1.000 μ l Puntali per pipette | Fisher | 21-402-581 | |
| DMEM | Lonza | 12-604Q | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | |
| Penicillina/Streptomicina | Lonza | 17-602E | |
| 2x EMEM | Quality Biologico | 115-073-101 | |
| Pipettatore | Drummond | 4-000-101 | |
| 1.000 μ l Pipetta | Rainin | L-1000XLS+ | |
| 200 μ l Pipetta | Rainin | L-200XLS+ | |
| 12 pozzetti, multicanale 200 μ l Pipettatore | Rainin | L12-200XLS+ | |
| 8 pozzetti, multicanale 1.000 μ l Pipettatore | Rainin | LA8-1200XLS | |
| Attesta | mediche espresse | ||
| Autoclave | Getinge | GEB 2404 AMB-2 | |
| Sacca per autoclave | Fisher | 01-828E | |
| 2.000 ml Becher | Fisher | 02-591-10H | |
| Vassoio per autoclave | Fisher | 13-359-20B | |
| Vassoio per pipette | Fisher | 13-361-5 | |
| 37 ° C Incubatrice | Fisher | WU-39321-00 | |
| Lattina a rischio biologico | Rubbermaid Commercial | FG614500 Nastro | |
| Fisher | 15-903 | ||
| Asta per autoclave | prodotta da IRF Facility | N/A | |
| Light Box | Fisher | S11552 | |
| Termosigillatrice | Fisher | NC9793612 | |
| Buste termosaldate | Fisher | 01-812-25H | |
| Borsa per rischi biologici | Fisher | 01-828E |
Riferimenti
- Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 5th edn. Chosewood, L. C., Wilson, D. E. , , U.S. Dept. of Health and Human Services. Washington, D.C. Available from: http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/ (2009).
- Bioterrorism agents/diseases by category. , Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta, GA, USA. Available from: http://emergency.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp (2014).
- Executive order 13546 -- Optimizing the security of Biologi....
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Ristampe e permessi
Errata corrige
Formal Correction: Erratum: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
Posted by JoVE Editors on 12/05/2016. Citeable Link.
A correction was made to the authors section in: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
One of the authors names was corrected from:
Nicole Joselyn
to:
Nicole Josleyn
