Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Видео с изображениями и Пространственно-временные Карты для анализа моторику желудочно у мышей

14.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53828

⸱

3 февраля 2016 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье описывается метод видеовизуализации и пространственно-временного картирования с высоким разрешением для выявления изменений в нейронной регуляции моторики толстой кишки у взрослых мышей. С помощью этого подхода можно обнаружить тонкие эффекты на функцию желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) в изолированных тканевых препаратах, чтобы улучшить наше понимание заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Аннотация

Энтеросолюбильное нервной системы (ENS) играет важную роль в регуляции желудочно (ГИ) подвижность и может функционировать независимо от центральной нервной системы. Изменения функции ENS являются основной причиной симптомов GI и болезни и может способствовать желудочно-кишечные симптомы, зарегистрированных в нервно-психических расстройств, включая аутизм. Хорошо известно, что изолированные сегменты кишки генерировать спонтанные, ритмические сокращения, известные как ободочной мигрирующий моторный комплекс (CMMCs). Процедура для анализа кишечно нервной регуляции CMMCs в Экс Vivo препараты толстой кишки мыши описана. Толстой кишки рассекают от животного и промыть, чтобы удалить фекальные содержание до того, как канюлю в ванночку. Данные приобрела с помощью видеокамеры, расположенной над ванночку и преобразуется в высоком разрешении пространственно-временных карт с помощью пакета программного обеспечения в доме. Используя эту технику, базовые модели сократительные и фармакологическое действие на функции ENS в толстой кишки сegments можно сопоставить по 3-4 ч. Кроме того, длина распространения и скорость CMMCs могут быть записаны, а также изменения в диаметре кишки и частоты сокращений. Этот метод полезен для характеристики желудочно-кишечной активности узоры в трансгенных мышах (и в других видов, включая крыс и морских свинок). Таким образом, фармакологически индуцированные изменения в CMMCs записываются в мышей дикого типа и в мышиной модели R451C нейролигины-3 аутизма. Кроме того, этот метод может быть применен и в других регионах желудочно-кишечного тракта, включая двенадцатиперстной кишки, тощей и подвздошной кишки и в различном возрасте развития у мышей.

Введение

Энтеросолюбильное нервной системы (ENS) представляет собой характеристическую нейронной сети из желудочно-кишечного тракта и модулирует различные функции, такие как переваривание содержимого кишечника, всасывание питательных веществ и секреции и реабсорбции жидкости. Нейроны ENS находятся в мышечной оболочки кишечника и подслизистой сплетения. Мышечной оболочки кишечника сплетения играет важную роль в регуляции желудочно-кишечного 1 тогда подслизистой сплетения в основном занимается контролем секреции 2,3. Мышечной оболочки кишечника сплетения расположен между продольными и круговыми слоями мышечных желудочно-стены. Сократительной активности сло....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Обработка животных и цервикальной дислокации животных до Все эксперименты проводились в строгом соответствии с процедурами, утвержденными экспериментирование комитета животных в Университете Мельбурна по (по этике ID: 1212494,7)

1. Ткань Сбор и Препарирование

  1. Эвтаназии взрослых мышей путем смещени шейных позвонков. Если возможно избежать анестезии, чтобы предотвратить влияние на функции кишечника с помощью рецепторов, расположенных на нейронных популяций, представляющих интерес.
  2. Запишите общую массу тела животного, контактный корпус (с помощью четырех лапах, брюшная сторона подвергается экспериментатор) твердо рассече....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

До 90% пациентов с РАС испытать массив желудочно-кишечных расстройств, в том числе диареи и запора 18,24,25. Тем не менее, основные причины этих желудочно-кишечных проблем неизвестны. Многие мутации, выявленные у пациентов с расстройствами аутистического спектра связаны с синаптические белки способствуют изменений и нарушений в синаптической передаче или функции. Одним из таких мутаций, в гене, кодирующем клеточной адгезии молекулы нейролигины-3 (NL3 R451C), был идентифицирова.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Используя эту технику визуализации видео, частота CMMC измеряли как показатель моторику толстого кишечника в дикого типа и мышей NL3 R451C, мышиной модели расстройства аутистического спектра 17. Наши результаты свидетельствуют о снижении числа CMMCs в мутантных мышей NL3 R451C по сравнению с мышами дикого типа в присутствии антагониста рецептора 5HT 3/4 трописетрон предполагая, что у мышей NL3 R451C проявляют повышенную чувствительность к трописетрон. Соответственно.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать

Благодарности

JCB и ELH-Y были поддержаны Департаментом США программы обороны CDMRP аутизма исследований (AR11034). NHMRC (1047674), чтобы ELH-ности У. мая Stewart Стипендии-Университета Мельбурна доверия финансируется стипендию РС. Мы благодарим Али Тахер, Фатима Ramalhosa и Gracia Seger по техническим взносов.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильные>реагенты
NaCl (МВт: 58,44)Сигма-ОлдричS7653-250G
KCl (МВт: 74,55)Сигма-ОлдричP9333-500G
<суб>2PO<суб>4.2H<суб>2О (МВ: 156,01)Химическое снабжение471-500Г
MgSO<суб>4 .7H20 (MW: 246.48)Chem SupplyMA048
CaCl2.2H2O (MW: 147.02)Chem SupplyCA033
D-глюкоза безводная (MW: 180.16)Chem SupplyGA018-500G
NaHCO3 (MW: 84.01)Chem SupplyGA018-500G
Name>Company<strong>Номер в каталогеКомментарии
>Материалы
Двухкамерная органная ванна
Размеры: 14 см x 8 см x 3 см
Индивидуальнаяконтактная лаборатория напрямую 
  732 МНОГОЦЕЛЕВОЙ ГЕРМЕТИК ПРОЗРАЧНЫЙDow Corning Australia Pty Ltd1890573
SYLGARD 184 НАБОР СИЛИКОНОВЫХ ЭЛАСТОМЕРОВ Dow Corning Australia Pty Ltd1064291
ЗАПОРНЫЙ КРАН 3 WAY FEM-ML L/LOCK STerumo Medical Corporation0912-2006
ШПРИЦЫ с наконечниками Luer Lock 50 мл, 20 мл, 10 млTerumo MedicalCorporation N/A
1,57 мм (ID) x 3,16 мм (OD) - Силастические трубкиMasterflex508-008
1,02 мм (ID) x 2,16 мм (OD) - Силастические трубкиMasterflex508-005
1,50 мм (ID) x 2,50 мм (OD) - Силастическая трубкаMasterflex508-007
1,60 мм (ID) - Платиновая силиконовая трубка Masterflex96410 - 14
4.40 мм (ID) - Трубки из платинового отверждения Мастерфлекс96410 - 15 
3,10 мм (внутренний диаметр) - Платиновая силиконовая трубка Masterflex96410 -16
Градуированные лабораторные стеклянные бутылки - 500 мл         Thermofisher Scientific 100-400
ПРОБКА ИЗ ХИМИЧЕСКОЙ РЕЗИНЫ 57 x 65 мм 
ПРОБКА ИЗ ХИМИЧЕСКОЙ РЕЗИНЫ 29 мм x 32 мм
Водонагреватель  (терморегулятор) Ratek TH7000 
Веб-камера LogitechLogitech
Name<strong>CompanyКаталожный номерКомментарии
Программное обеспечение
Virtual Dub - 1.9 11virtualdub.org
MATLAB R2012a Планшет Graph Pad
Программное обеспечение для веб-камеры Logitech

Ссылки

  1. Powell, A. K., O'Brien, S. D., Fida, R., Bywater, R. A. Neural integrity is essential for the propagation of colonic migrating motor complexes in the mouse. Neurogastroenterol Motil. 14, 495-504 (2002).
  2. Furness, J. B. The enteric nervous....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Мигрирующие моторные комплексы толстой кишкиэнтеральная нервная систематолстая кишка мышиорганный резервуарметод канюляциилечение трописетрономNeuroligin-3 R451C