Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular

Resumo

Este artigo descreve um processo para induzir a lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada em ratos. lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada serve para modelar patologias humanas caracterizadas por oxigénio e entrega de nutrientes comprometida na retina, permitindo aos investigadores para examinar os mecanismos celulares e potenciais tratamentos para doenças humanas da unidade neurovascular da retina.

Resumo

Retinal isquemia-reperfusão (I / R) é um processo patofisiológico contribuir para os danos celulares em várias condições oculares, incluindo o glaucoma, retinopatia diabética, e oclusões vasculares retinianas. modelos de roedores de lesão de I / R estão fornecendo insights significativos em mecanismos e estratégias de tratamento para o homem I / lesão R, especialmente no que diz respeito a danos neurodegenerativa na unidade neurovascular da retina. Apresentado aqui é um protocolo para a indução de lesões retinianas I / R em ratos através da elevação da pressão intra-ocular (PIO). Neste protocolo, a câmara anterior ocular é canulada com uma agulha, por onde corre o gotejamento de um reservatório de solução salina elevada. Usando este gotejamento para elevar a PIO acima da pressão arterial sistólica, um praticante de pára temporariamente o fluxo sangüíneo da retina interna (isquemia). Quando a circulação é reposta (reperfusão) por remoção da cânula, o dano celular grave resulta, em última instância, resulta na neurodegeneração da retina. garanhão recentes demonstrar inflamação, da permeabilidade vascular, e degeneração capilar como elementos adicionais desse modelo. Em comparação com metodologias I / R retina alternativas, como a ligadura arterial da retina, retinal I / lesão R por PIO elevada oferece vantagens na sua especificidade anatómica, tractability experimental, e acessibilidade técnica, apresentando-se como uma ferramenta valiosa para examinar patogênese neuronal e terapia em a unidade neurovascular da retina.

Introdução

Retinal isquemia-reperfusão (I / R) caracteriza muitas patologias da retina humana, incluindo o glaucoma, retinopatia diabética, e oclusões vasculares retinianas ^1. Na retina I / R, redução do fluxo sanguíneo (isquemia) na vasculatura retiniana cria um estado de hipersensibilidade da retina ao oxigénio e outros nutrientes, precipitando oxidativo grave e dano inflamatório quando a circulação é, subsequentemente, reposta (reperfusão) ^2. A retina neural parece particularmente vulnerável a estas mudanças, a neurodegeneração da retina sendo talvez a característica mais saliente do dano induzido R I /. Apresentado aqui é um protocolo para a modelagem ....

Protocolo

Declaração de Ética: Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Comitê Animal Care Institucional e Use da Universidade Johns Hopkins.

Nota: Os ratinhos utilizados durante a filmagem são ratinhos C57BL / 6 de Jackson, embora também possam ser utilizadas outras estirpes ou espécies de roedores. Ao utilizar outras estirpes ou espécies, estar ciente de que as doses de anestesia e cronograma lesão pode variar. É importante para adaptar as condições de I / R para acomodar estirpe, a espécie e variações experimentais.

1. Prepare o Cocktail Anestesia

1. Combinar 1,25....

Resultados

Os efeitos neurodegenerativos da retina de I / R de elevada pressão intra-ocular são geralmente avaliadas utilizando duas abordagens convencionais. NeuN imunomarcação dos núcleos neuronais revelou perda de células neuronais significativa após I / R insulto (Figura 1). Em resumo, os olhos enucleados 7 dias após I / R, foram fixadas em paraf ormaldeído, marcado com o marcador da célula neuronal NeuN, e todo-montado. As imagens foram capturadas usando microscopia confocal, .......

Discussão

I retina / lesões R por PIO elevada provou a sua utilidade na modelagem de danos celulares e disfunção, especialmente neurodegeneração, na unidade neurovascular da retina de roedores. Este procedimento fornece um tecido de controle robusto e é facilmente acessível em termos de sofisticação técnica. Tem-se observado neste e em outros modelos de lesão I / R que o aumento da pressão e da duração da isquemia pode aumentar a gravidade da lesão ^24. Por esta razão, alguns profissionais têm optado por usar pressões i.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Injeção de heparina sódica, USP	Abraxis Pharmaceutical Products		1.000 USP/ml
BSS Solução de irrigação estéril	Alcon Laboratories, Inc.	9007754-0212	500 ml
SC-2 kg Balança de bolso digital	American Weigh Scales, Inc.	SC-2 kg
Solução Oftálmica de Tropicamida USP 1%	Bausch + Lomb		1% (10 mg/ml)
Solução Oftálmica de Cloridrato de Proparacaína USP, 0,5%	Bausch + Lomb		0,5% (5 mg/ml)
Tubo de Polietileno INTRAMEDIC	Becton Dickinson and Company	427400	Diâmetro interno: 427400
30 G 1/2 Agulhas PrecisionGlide	Benton Dickinson and Company
Seringa 305106 BC 1 ml TB, Ponta Fina com Agulha Biselada Intradérmica, 26 G x 3/8	Seringa Benton Dickinson and Company	309625
BD 60 ml Ponta Luer-Lok	Benton Dickinson and Company	309653
Microscópio Zeiss OPMI Visu 200/S8	Carl Zeiss AG	000000-1179-101
Filtro de Seringa Estéril	Corning Inc.	CLS431224	0,20 µ m
Durasorb Underpads	Covidien	1038	23 x 24 polegadas
Preparação de Álcool	Covidien	6818 2	Ply, Médio
Estudante Dumont #5 Fórceps	Fine Science Tools	91150-20
Hartman Hemostats	Fine Science Tools	13002-10
Conjunto Primário, Macrobore, Pré-perfurado Y-Site, 80 Polegadas	Hospira	12672-28
Solução salina tamponada com fosfato pH 7,4 (1x)	Invitrogen	10010-049	500 ml
Água destilada	Invitrogen	15230-204	500 ml
C57BL/6J Camundongos	The Jackson Laboratory	664
AnaSed Injection: Solução estéril de xilazina	LLOYD, Inc.		20 mg/ml
de geléia lubrificante, bacteriostático solúvel em água	MediChoice		3-Gram Packet
NAMIC Angiographic Pressure Monitoring Manifold	Navilyst Medical, Inc.	70039355	Coletor de 5 válvulas com sete portas fêmeas
Goniosoft, Hypromellose 2,5% Solução Oftálmica Emoliente: Hidroxipropilmetilcelulose	OCuSOFT, Inc.		2,5% (25 mg/ml)
Ketaset CIII: Cloridrato de cetamina	Pfizer, Inc.		100 mg/ml
Trans-Pal I.V. Suporte	Produtos Pryor	372	Fornecido com uma extensão de aço inoxidável de 60 cm construída em casa
Acepromazina: Injeção de maleato de acepromazina, USP	Vet One		10 mg/ml
Mesa de cirurgia V-Top/Hidráulico ajustável	VSSI	100-4041-21
Encaixe de tubo Luer Macho para Luer Macho	Warner Instruments	64-1579