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Article de méthode

Nouvelle approche pour l’enregistrement simultané de l’activité nerveuse sympathique rénale et de la pression artérielle avec une perfusion intraveineuse, conscients, souris sans retenue.

10.6K vues

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DOI :

10.3791/54120

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14 février 2018

 , 

Dans cet article

Résumé

Anesthésiés souris présentent artérielle systémique non physiologiques, qui s’oppose à une évaluation pertinente de tonus autonome étant donné la relation intime entre la pression artérielle et le système nerveux autonome. Ainsi, une nouvelle méthode pour l’activité nerveuse sympathique rénale en même temps record et la pression artérielle avec une perfusion intraveineuse chez des souris conscientes est exposée.

Résumé

Les nerfs sympathiques rénaux contribuent de manière significative à des phénomènes physiologiques et physiopathologiques. Évaluation de l’activité nerveuse sympathique rénale (RSNA) est d’un grand intérêt dans de nombreux domaines de recherche tels que l’insuffisance rénale chronique, hypertension, insuffisance cardiaque, le diabète et l’obésité. Évaluation sans équivoque du rôle du système nerveux sympathique est donc impérative pour la bonne interprétation des résultats expérimentaux et de la compréhension des processus morbides. RSNA a été traditionnellement mesurée chez les rongeurs anesthésiés, y compris la souris. Cependant, souris habituellement présentent une pression artérielle systémique très basse et une instabilité hémodynamique pendant plusieurs heures pendant l’anesthésie et la chirurgie. Une interprétation significative de RSNA est confondue par cet État non physiologiques, étant donné la relation intime entre tonus nerveux sympathique et l’État cardiovasculaire. Pour remédier à cette limitation des approches traditionnelles, nous avons développé une nouvelle méthode pour mesurer la RSNA chez les souris conscients, se déplaçant librement. Souris ont été instrumentés chroniquement avec radio-télémètres pour la surveillance continue de la pression artérielle ainsi qu’un cathéter veineux jugulaire et électrode bipolaire sur-mesure pour un enregistrement direct de la RSNA. Après une période de récupération de 48 à 72 heures, le taux de survie était de 100 % et toutes les souris se sont comportés normalement. À ce moment, RSNA a été avec succès enregistré dans 80 % des souris, avec des signaux viables acquis jusqu'à 4 et post-chirurgie de 5 jours à 70 % et 50 % des souris, respectivement. Les pressions sanguines physiologiques ont été enregistrées dans toutes les souris (116±2 mmHg ; n = 10). RSNA enregistré a augmenté à manger et de toilettage, aussi bien établi dans la littérature. En outre, RSNA a été validée par un blocage ganglionnaire et modulation de la pression sanguine avec les agents pharmacologiques. Ici, une méthode efficace et facile à gérer pour un enregistrement clair de RSNA chez les souris conscients, se déplaçant librement est décrite.

Introduction

Intérêt à utiliser la souris dans plusieurs domaines de la recherche biomédicale poursuit son expansion avec le développement d’innombrables modèles issus du génie génétique. Pour la plupart, ont suivi le rythme des progrès techniques avec l’utilisation croissante des souris en physiologie et il y a maintenant un choix impressionnant d’appareils miniaturisés développé spécifiquement pour mesurer des paramètres physiologiques importants chez les souris. Bien que les appareils télémétriques pour une mesure du système nerveux autonome directement tonus nerveux chez le rat conscient ont été disponibles pour plus d’une décennie, des appareils miniaturisés pour l’évaluation....

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Protocole

Toutes les procédures expérimentales sont en conformité avec le Guide National des instituts de santé pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire et ont été approuvés par le Comité de l’utilisation du centre médical de l’Université du Mississippi et d’institutionnels animalier.

1. les animaux et du logement

  1. Souris domestiques (24-35 g) à son arrivée à l’animalerie de laboratoire institutionnel.
  2. Offre souris standard chow rongeur et ad libitum à toutes les étapes du protocole expérimental dans un environnement contrôlé la température et l’humidité de l’eau du robinet.

2. sur mesure Fabrication de l....

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Résultats

Suivant le protocole décrit, le taux de survie était de 100 % - toutes les souris instrumentés dans cette étude ont survécu et récupéré bien après l’intervention chirurgicale. Dans les 24 heures de préparation chirurgicale, toutes les souris s’est comportés normalement, exposer à manger typiques, des comportements de toilettage et exploratoires. Aucun animal n’a montré aucun signe de douleur ou de détresse en ce moment. 48 heures après la chirurgie, un signal clair et vérifiable de RSNA a.......

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Discussion

Ci-après nous avons exposé, démontré et validé une nouvelle méthode d’évaluation ciblée de la RSNA chez des souris conscientes, libres de se déplacer et reposer confortablement dans leur maison. Suite à l’implantation chirurgicale d’un radiotelemeter de la pression artérielle, un cathéter de perfusion intraveineuse demeure et une électrode bipolaire sur-mesure à RSNA, souris récupéré de la chirurgie et ont été laissés intacts pendant 48 à 72 heures. Souris est restée confortablement établis dans leur cage maison à tout m.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

S.M.H. a été soutenue par des bourses de recherche postdoctorales de l’Institut canadien pour le Health Research (CIHR), Heart & Stroke Foundation du Canada (FMCC) et Alberta Innovates Health Solutions (AiHS) ; J.E.H. est soutenu par une subvention du National Heart, Lung and Blood Institute PO1HL-51971.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Fil multibrins en acier inoxydable revêtu de téflonA-M Systems7932000,001 pouce de diamètre nu ; 0,0055 pouce de diamètre enduit
#11 Lame de scalpelFisher ScientificALMM9011
fer à souder et soudureToute marque ou modèle adapté
Connecteurs à broches miniatures mâlesA-M Systems520200Laiton avec placage or
Connecteurs à broches miniatures femellesA-M Systems520100Laiton avec placage or
Gaine thermorétractableRadio ShackModèle # : 278-1610 |  ; Catalogue # : 2781610diamètre 1,6 mm
VWRCA-63018-703Diamètre intérieur de 0,86 mm ; diamètre extérieur de 1,27 mm
Microscope de dissectionLeica MicrosystemsLeica M80Toute marque ou modèle également adapté
Tube en polyéthylène 10 (PE10) BraintreeScientificPE10  ; 50 FT0,28 mm de diamètre intérieur ; 0,61 mm de diamètre extérieur
Super Glue LiquidLoctiten/aLiquid Formula ; toute marque appropriée
Super Glue GelLoctiten/aGel Formula ; toute marque appropriée
Tube en polyéthylèneCommodités scientifiquesBB31695-PE / 13Pour piédestal Diamètre intérieur de 2,7 mm ; Diamètre
extérieur de 4,0 mmServices de stérilisation hospitalière et Sachets de stérilisation àContacter les services de stérilisation de l’hôpital local
Anesthésie à l’isofluraneAbbott05260-05
Coussins chauffants isothermes Deltaphase & table chirurgicaleBraintree Scientific39OPGarder les coussins chauffants au chaud dans un 37° ; C bain-marie ; Table chirurgicale correspondante essentielle
GlycopyrrolateAmdipharm Mercury Company Limitedn/a
Système de vaporisation d’isoflurane et débitmètreBraintree ScientificVP IComprend une alimentation en oxygène de qualité médicale
Ciseaux à tissusOutils scientifiques fins14173-12
Ciseaux à ressort finsOutils scientifiquesfins 15006-09
Petits applicateurs à embout en cotonFisher Scientific23400100
Fine Straight ForcepsFine Science Tools11254-20#5, FST by Dumont Biologie
Tip Angled ForcepsFine Science Tools11251-35#5/45 FST by Dumont
Small Absorbent SpearsFine Science Tools18105-03
ParafilmSigma AldrichBR701605  ; ALDRICH
Kwik-Sil 2 composants Silicone PolymèreWorld Precision Instruments (WPI)KWIK-SILAchetez des embouts spécialisés supplémentaires auprès de WPI
5-0 Polysorb SutureTyco Healthcaren/a
6-0 Suture en soieBraintree ScientificSUT-S  ; 104Deknatel marque, bobine
Sonde de radiotélémétrieData Sciences International (DSI)TA11-PAC10
Récepteur de radiotélémétrieData Sciences International (DSI)PhysioTel RPC-1
Référence de pressionambiante Data Sciences International (DSI)Apr-01
Adaptateur de sortie de pressionData Sciences International (DSI)R11CPA
Rena Pulse TubingBraintree ScientificRPT-040
Pivot d’infusionInstech Solomon375/D/22
Bras de support pivotant & MontInstech SolomonSMCLA
Polysulfone button  ;Instech SolomonLW62S/6
Ressort en acier inoxydableInstech SolomonPS62
Vetbond adhésif chirurgical3Mn/a
Triple Pommade antibiotiqueFougeran/a
PowerLab Système d’acquisition de données à 8 canaux & LogicielADInstrumentsPowerLab 8/35
Câble isolé en PVCBeldenCâble de connexion audio en PVC 32 AWG
Préamplification HeadstageDagan CorporationModèle 4002
Amplificateur différentielDagan CorporationEX4-400
Nitroprussiate de sodiumSigma Aldrich71778-25G
PhényléphrineSigma AldrichP6126-5G
Saline physiologique stérile 0,9 % NaClBeckton DickinsonContactez le fournisseur hospitalier local
hexaméthoniumSigma AldrichH0879-5G
Table anti-vibration supérieure en acier inoxydablen/a n/aconçue sur mesure en interne ; Une plaque d’acier solide sur un banc convient également à
cage de Faradayn/an/a n/aTondeuse à poils de petits animaux conçue et construite sur mesure en interne
n/an/aDrugstore, tondeuse à barbe pour hommes adaptée
Crème dipilatoiren/an/ade marque Veet, formule pour peau sensible
10 % Povidone IodinePurdue ProductsBétadiène
70 % éthanoln/an/a
micro-écarteurs en aciern/an/a fabriquésen interne. Pliez un trombone en acier & boucle 4-0 soie pour former un écarteur
HemostatsFine Science Tools13011-12
Pistolet thermiqueFisher Scientific09-201-27
Tube en polyéthylène 90 (PE90) de l’ozone la

Références

  1. Young, C. N., Davisson, R. L. In vivo assessment of neurocardiovascular regulation in the mouse: principles, progress, and prospects. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 301 (3), H654-H662 (2011).
  2. Kass, D. A., Hare, J. M., Georgakopoulos, D. Murine card....

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Réimpressions et autorisations

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