Immature dendritic cells can be selectively differentiated into tolerogenic or mature dendritic cells to regulate the balance between immunity and tolerance. This work presents a means to generate from immature monocyte derived dendritic cells (moDCs), in vitro tolerogenic and mature moDCs that differ in metabolic phenotypes.
प्रतिजन गैर विशिष्ट सहज प्रतिरक्षा प्रणाली और विशिष्ट प्रतिजन अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली के बीच एक जटिल परस्पर क्रिया से प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का परिणाम है। प्रतिरक्षा प्रणाली आत्म अणुओं को सहिष्णुता बनाए रखने और रोगजनकों के लिए तेजी से प्रतिक्रिया में एक निरंतर संतुलन है। वृक्ष के समान कोशिकाओं (डीसी) शक्तिशाली पेशेवर प्रतिजन कोशिकाओं कि अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए सहज प्रतिरक्षा प्रणाली से जोड़ने और आत्म और गैर आत्म बीच अनुकूली प्रतिक्रिया को संतुलित कर रहे हैं। परिपक्वता संकेतों पर निर्भर करता है, अपरिपक्व वृक्ष के समान कोशिकाओं चुनिंदा immunogenic या tolerogenic डीसी में अंतर करने के लिए प्रेरित किया जा सकता है। Immunogenic वृक्ष के समान कोशिकाओं क्लोनल विस्तार के लिए विशिष्ट प्रतिजन टी कोशिकाओं को प्रसार संकेतों प्रदान करते हैं; tolerogenic वृक्ष के समान कोशिकाओं प्रतिजन विशेष टी सेल विलोपन या नियामक टी कोशिकाओं की क्लोनल विस्तार से सहिष्णुता को विनियमित करते हैं। इस अनूठी संपत्ति के कारण, वृक्ष के समान कोशिकाओं को अत्यधिक कैंसर और स्व-प्रतिरक्षित डीआईएसई के लिए के रूप में चिकित्सीय एजेंट के बाद की मांग कर रहे हैंases। वृक्ष के समान कोशिकाओं इन विट्रो में विशिष्ट एंटीजन के साथ भरी हुई है और मानव शरीर में इंजेक्शन एक विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया दोनों immunogenic और tolerogenic माउंट करने के लिए किया जा सकता है। इस काम monocytes, अपरिपक्व monocyte व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं (moDCs), tolerogenic और परिपक्व moDCs कि सतह मार्कर अभिव्यक्ति, समारोह और चयापचय phenotypes में अलग से इन विट्रो में उत्पन्न करने के लिए एक साधन प्रस्तुत करता है।
डीसी पहले देर से उन्नीसवीं सदी में पॉल आइलेट्स (Langerhans कोशिकाओं) द्वारा वर्णित के रूप में Jolles 1 द्वारा संदर्भित और 1973 के जो उन्हें पेशेवर प्रतिजन कोशिकाओं 2 के रूप में मान्यता में राल्फ Steinman और Zanvil कोहन की विशेषता थी। डीसी परिधीय रक्त में और इस तरह के त्वचा (Langerhans कोशिकाओं के रूप में उपस्थित) के रूप में और नाक, फेफड़े, पेट के अस्तर और आंतों जो सक्षम में शरीर, बाहरी वातावरण के संपर्क में हैं कि ऊतकों में विशेष रूप से प्रचुर मात्रा में से ज्यादातर के ऊतकों में पाया जाता है उन्हें बाह्य एंटीजन मुठभेड़ की। अपरिपक्व डीसी endocytic क्षमता है, लेकिन अपेक्षाकृत कम क्षमता टी कोशिकाओं 3 प्रोत्साहित करने के लिए है। अपरिपक्व डीसी विभिन्न पैटर्न मान्यता रिसेप्टर्स (PRRS) उस पर कब्जा रोगज़नक़ जुड़े आणविक पैटर्न (PAMPs) या क्षति से जुड़े आणविक पैटर्न (damps) 4 व्यक्त करते हैं। को सक्रिय खतरे का संकेत immunogenic डीसी की ओर परिपक्वता ड्राइव करते हुए आत्म अणुओं टी सेल unresponsivene में परिणामएस एस और apoptosis 5। Immunogenic डीसी MHC अणुओं और सह उत्तेजक सतह अणुओं और प्रधानमंत्री भोले टी कोशिकाओं 6.7 करने के लिए अपनी क्षमता का अपरेगुलेशन की विशेषता है।
अपरिपक्व DCs भी विटामिन डी 3 मेटाबोलाइट 1 ए, 25 (ओ) 2 डी से 3 और कुछ immunosuppressive एजेंटों इंटरल्युकिन-10 (आईएल -10) की तरह, dexamethasone और 8-9 rapamycin के जवाब में एक Treg उत्प्रेरण या tolerogenic राज्य की ओर से परिपक्व जा सकता है। Tolerogenic डीसी immunoreceptor tyrosine आधारित निरोधात्मक रूपांकनों (ITIMs) सतह रिसेप्टर्स और ligands युक्त उनकी अभिव्यक्ति की विशेषता है। Tolerogenic डीसी में ILT परिवार के सदस्यों, ILT3 और ILT4 युक्त ITIMs के संकेत पारगमन alloproliferation रोकना और ड्राइव Foxp3 + Treg विस्तार 10,11। Tolerogenic डीसी के इन अद्वितीय गुण विवो में उनकी गहन शक्ति, अर्थात् प्रत्यारोपित एलोजेनिक ग्राफ्ट और suppr करने के लिए टिकाऊ सहिष्णुता के लिए प्रेरित करने की क्षमता के लिए नेतृत्वस्व-प्रतिरक्षित बीमारियों के विकास ईएसएस। Tolerogenic डीसी परिपक्व ध्रुवीकरण DCs जो प्रतिरक्षा सक्रियण के निषेध में समारोह का एक उपप्रकार के रूप में इसलिए देखी जा सकती है।
Plasmacytoid डीसी और माइलॉयड DCs 12: वर्तमान में, वहाँ मानव परिधीय रक्त में वृक्ष के समान कोशिकाओं के दो सामान्य उपसमुच्चय है। परिसंचारी डीसी मानव रक्त में ल्यूकोसाइट्स की 2% से कम करने के लिए दुर्लभ गठन कर रहे हैं और यह उनके immunoregulatory कार्यों का अध्ययन करने के लिए डीसी की एक उचित संख्या के अलगाव के लिए एक कठिनाई बन गया है। इस समस्या को दूर करने के लिए, एककेंद्रकश्वेतकोशिका भेदभाव डीसी वृक्ष के समान सेल समारोह के अध्ययन के लिए इन विट्रो मॉडल के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं। इन विट्रो में डीसी इन विवो डीसी की तुलना में समान रिसेप्टर्स और कार्य किया है। इन विवो डीसी की और इन विट्रो उत्पन्न एककेंद्रकश्वेतकोशिका निकाली गई DCS (moDCs) में विस्तृत तुलना अन्य प्रयोगशालाओं 13, 14, 15 से जांच कर रहे हैं। यह भी बताया जाता है कि moDCs और सीडी-1 सी + डीसी प्रतिजन और टी सेल समारोह 15 उत्प्रेरण पर बराबर थे।
इस पत्र में, हम परिधीय रक्त monocytes से अपरिपक्व moDCs पैदा करने और फिर उन्हें immunogenic और tolerogenic डीसी में फर्क करने की एक विधि का वर्णन है। ये monocyte व्युत्पन्न वृक्ष के समान कोशिकाओं (moDCs) उनकी सतह मार्कर, साइटोकाइन प्रोफाइल, immunoregulatory कार्यों और चयापचय राज्यों की विशेषता है। Immunogenic और tolerogenic वृक्ष के समान कोशिकाओं अलग साइटोकिन्स जो या तो allogenic टी कोशिकाओं या नियामक टी कोशिकाओं के विस्तार में परिणाम का उत्पादन। इस पत्र में, साइटोकाइन प्रोफाइलिंग मल्टीप्लेक्स प्रौद्योगिकी का उपयोग कर सिस्टम के साथ किया जाता है। कोशिकाओं के विकास को मध्यम एंटीबॉडी स्थिर रंग कोडित मोतियों के साथ incubated और एक कॉम्पैक्ट विश्लेषक में पढ़ रहे हैं। डीसी के चयापचय राज्यों बाह्य प्रवाह एनालाइजर कि मापने ऑक्सीजन की खपत दर, सेलुलर श्वसन का सूचक है, और बाह्य अम्लीकरण दर जो glycolytic दर्शाता का उपयोग कर विश्लेषण कर रहे हैंवृक्ष के समान कोशिकाओं में प्रवाह। इन बायोइनरजेटिक्स दरों का मापन सेलुलर चयापचय में परिवर्तन जो वृक्ष के समान सेल के विकास और समारोह में महत्वपूर्ण हैं ट्रैक करने के लिए एक साधन प्रदान करता है।
इस पत्र monocytes अपरिपक्व moDCs, tolerogenic moDCs और परिपक्व moDCs से उत्पन्न करने के लिए एक विधि का वर्णन है। इस प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण कदम निम्नलिखित पैराग्राफ में विस्तार से चर्चा की गई है। यह ध्यान रखें कि मानव परिधीय रक्त इस प्रोटोकॉल और मानव रक्त से निपटने अभ्यास किया जाना चाहिए के लिए सार्वभौमिक सावधानियों में एक प्रारंभिक सामग्री के रूप में प्रयोग किया जाता है महत्वपूर्ण है। हालांकि यह मनुष्यों के 24 में अस्थि मज्जा से डीसी प्राप्त करने के लिए तकनीकी रूप से संभव है, परिधीय रक्त में पाया कोशिकाओं से इन विट्रो डीसी भेदभाव अस्थि मज्जा की तुलना में परिधीय रक्त की उपलब्धता की वजह से पसंद किया जाता है। कोशिकाओं परिधीय रक्त में पाया बीच, hematopoietic CD34 + स्टेम कोशिकाओं और monocytes आमतौर पर डीसी की इन विट्रो पीढ़ी के लिए उपयोग किया जाता है। Hematopoietic CD34 + स्टेम कोशिकाओं जीएम- CSF और TNF-α के साथ सुसंस्कृत CD1a + और CD14 + सबसेट जो फिर आगे आइलेट्स में भेदभाव कर रहे हैं प्राप्त करने के लिए कर रहे हैंकोशिकाओं और वृक्ष के समान कोशिकाओं की तरह। इसके विपरीत, monocytes जीएम- CSF और आईएल -4 में संवर्धित अपरिपक्व moDCs उत्पन्न करने के लिए कर रहे हैं। कई प्रोटोकॉल परिधीय रक्त से monocytes के संवर्धन के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं; उदाहरण के लिए, प्लास्टिक के बर्तन, धावन और अलगाव किट 25, 26 के पालन से पालन प्रोटोकॉल के फायदे कोशिकाओं को कम से कम नुकसान कर रहे हैं और अपेक्षाकृत हालांकि सेल शुद्धता से समझौता किया जा सकता है लागत प्रभावी। और एक अतिरिक्त कदम आगे के प्रयोगों के लिए कोशिकाओं को अलग करने के लिए आवश्यक है। धावन एक तकनीक है कि उनके आकार और घनत्व के आधार पर कोशिकाओं को अलग करती है। धावन के फायदे सेल व्यवहार्यता हैं और monocytes आसानी से आगे के प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है; हालांकि इस तकनीक का एक elutriator की उपलब्धता और अक्षमता समान अवसादन मानकों के साथ कोशिकाओं के विभिन्न आबादी (टी कोशिकाओं और monocytes) को अलग करने के द्वारा सीमित है। व्यावसायिक रूप से उपलब्ध अलगाव किट चुंबकीय microbeads का उपयोग या तो सकारात्मक चयन करने के लिए यानकारात्मक monocytic आबादी का चयन करें। कुछ प्रोटोकॉल नकारात्मक चयन का उपयोग एककेंद्रकश्वेतकोशिका अलगाव के प्रति पक्षपाती रहे हैं के रूप में अलग-थलग monocytes "अछूता" (मार्करों या microbeads से बाध्य नहीं) रहते हैं। इस प्रोटोकॉल में, CD14 मोतियों PBMCs से सकारात्मक चुनिंदा मानव monocytes करने के लिए इस्तेमाल किया गया। CD14 एक cytoplasmic डोमेन का अभाव है और CD14 के लिए एंटीबॉडी के बंधन संकेत पारगमन ट्रिगर नहीं करता है। इसके अलावा, microbeads संस्कृति के बाद monocytes से अलग और इसलिए भेदभाव की प्रक्रिया में बाधा नहीं करता है। इसके अलावा, CD14 दृढ़ता से सबसे monocytes पर और कमजोर न्यूट्रोफिल और कुछ माइलॉयड वृक्ष के समान कोशिकाओं, इसलिए अन्य तरीकों 17 से अधिक सेल पवित्रता में अलगाव परिणामों की इस पद्धति पर व्यक्त की है।
रक्त monocytes डीसी या मैक्रोफेज में भेदभाव किया जा सकता है और monocytes के भाग्य का बहुत साइटोकाइन पर्यावरण पर निर्भर करता है। इस पत्र में, moDCs granulocyte बृहतभक्षककोशिका कॉलोनी उत्तेजक कारक (जोड़ने जीएम द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं-CSF) और मानव परिधीय रक्त monocytes के लिए इंटरल्युकिन 4 (आईएल 4)। जीएम- CSF एककेंद्रकश्वेतकोशिका अस्तित्व और आईएल 4 बृहतभक्षककोशिका भेदभाव पर निरोधात्मक गतिविधि डालती लिए आवश्यक है; और monocytes जीएम-SCSF और आईएल -4 के मिश्रित इसके अलावा अलग-अलग साइटोकाइन 27 की तुलना में अपरिपक्व moDCs के एक उच्च प्रतिशत उपज। वहाँ अन्य प्रोटोकॉल है कि परिधीय रक्त monocytes 28, 29, 30 के लिए ट्यूमर परिगलन कारक अल्फा (TNF-α), इंटरफेरॉन अल्फा (IFN-α) और इंटरल्युकिन 13 (आईएल -13) जोड़कर moDCs उत्पन्न कर रहे हैं। जीएम- CSF और आईएल -4 के संयोजन से 1990 के दशक में एक स्वीकृत प्रोटोकॉल है कि immunogenic या tolerogenic moDCs में भेदभाव और Th1, Th2 या Th17 को बढ़ावा देने moDCs में ध्रुवीकरण प्लास्टिक अपरिपक्व डीसी उत्पन्न अनुकूलित किया गया था और अब।
अपरिपक्व moDCs विटामिन डी 3 और dexamethasone के अलावा द्वारा tolerogenic moDCs में भेदभाव कर रहे हैं। वहाँ कई प्रोटोकॉल उदाहरण के लिए tolerogenic डीसी उत्पन्न करने के लिए कर रहे हैं, के माध्यम सेपरमाणु कारक-कापा बी (एनएफ-kB) निषेध, β-catenin सक्रियण, विटामिन डी 3, Dexamethasone और rapamycin 31, 32, 33, 34, 35, 9, 36, 37। हालांकि दोनों विटामिन डी 3 और dexamethasone अकेले डीसी, जब व्यक्ति दवाओं का इस्तेमाल कर रहे हैं की तुलना में विटामिन डी 3 और alloproliferation का एक बड़ा दमन में dexamethasone परिणाम के संयोजन पर एक tolerogenic प्रभाव प्रेरित करने के लिए सूचित किया गया है। इसलिए, tolerogenic डीसी की पीढ़ी के लिए मौजूदा प्रोटोकॉल विटामिन डी 3 और dexamethasone के संयोजन के लिए संशोधित किया गया था। इस विधि वर्तमान में एक चिकित्सीय उपयोगिता के साथ मानव tolerogenic डीसी के लिए एक मॉडल के रूप में स्वीकार किया जा रहा है। यह भी ध्यान दें कि पुनर्गठन विटामिन डी 3 और dexamethasone एक छोटी शैल्फ जीवन है महत्वपूर्ण है।
इस प्रोटोकॉल में, Lipopolysaccharides (एलपीएस) एक डीसी परिपक्वता inducer के रूप में जोड़ा गया है। अपरिपक्व moDCs भी समर्थक भड़काऊ कॉकटेल का उपयोग परिपक्वता के लिए प्रेरित किया जा सकता है:(TNF-α), इंटरल्युकिन 1 बीटा (आईएल 1β), इंटरल्युकिन 6 (आईएल -6) और प्रोस्टाग्लैंडीन E2) या समर्थक भड़काऊ साइटोकिन्स (TNF-α और इंटरफेरॉन गामा (IFN-Γ))। समर्थक भड़काऊ कॉकटेल उच्च सह उत्तेजक और प्रवासी कार्यों के साथ परिपक्व moDCs उत्पन्न करता है, लेकिन वे आईएल 12 38 की अपेक्षाकृत कम स्तर का उत्पादन। TNF-α या IFN-Γ अकेले एक स्थिर वृक्ष के समान phenotype 39 के लिए प्रेरित करने में सक्षम नहीं है। एलपीएस टोल की तरह रिसेप्टर 4 (TLR4) को उत्तेजित करता है, डीसी परिपक्वता प्रेरित करने के लिए एनएफ-केबी और माइटोजन सक्रिय प्रोटीन kinases (MAPKs) की सक्रियता के मध्यस्थता करता है। डीसी परिपक्वता LPS से प्रेरित डीसी परिपक्वता मार्कर (CD83, CD86, एचएलए डीआर) की एक अप-विनियमन पता चलता है और यह भी आईएल 12p70 का उत्पादन करने के लिए नेतृत्व किया। इसके अलावा, इस कदम आगे TLR3 एगोनिस्ट साथ LPS जोड़ी के लिए नैदानिक कैंसर के टीके के लिए परिपक्व डीसी उत्पादन करने के लिए संशोधित किया जा सकता है। इस पत्र में, tolerogenic डीसी LPS उपचार पर परिपक्वता के लिए प्रतिरोधी हो दिखाए जाते हैं। ये अर्द्ध परिपक्व तरह DCs immunogenic नहीं हैं और relea नहीं हैएसई समर्थक भड़काऊ साइटोकिन्स 40।
इस प्रोटोकॉल की सीमाओं भेदभाव प्रक्रिया में झूठ बोलते हैं। प्रक्रिया दिवस 0 से 8 दिन 7 जो एक कठिनाई उच्च throughput विश्लेषण में रूपांतरित किया जा करने के लिए बन गया है लेता है। प्रोटोकॉल में एक संशोधन भेदभाव प्रक्रिया को कम अभी तक अलग-अलग राज्यों में व्यवहार्य डीसी की उच्च संख्या उपज के लिए आवश्यक है। दूसरे, डीसी इस प्रोटोकॉल में साइटोकिन्स के अलावा द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं और इन साइटोकिन्स समय की लंबी अवधि के लिए डीसी आबादी को बनाए रखने के लिए नहीं है। इसके अलावा, साइटोकिन्स सांद्रता में विवो में बहुत अधिक से अधिक उपयोग किया जाता है और रास्ते कि physiologically इन विवो डीसी के समान नहीं हैं की पक्षपातपूर्ण विकास में परिणाम सकता है। डीसी व्यापारियों की इन विट्रो संस्कृतियों में उदाहरण के लिए GM-सीएसएफ, जो विवो 41 में सामान्य डीसी भेदभाव के लिए एक आवश्यक साइटोकाइन नहीं है पर प्रतिक्रिया के लिए दिखाया गया है। फिर भी, साइटोकाइन उत्तेजना जीन के लिए एक उपयोगी तरीका हो सकता हैप्रयोग के लिए इन विट्रो में डीसी के उच्च संख्या दर। , ये ऐसे immunofluorescence धुंधला के रूप में अन्य विश्लेषण करने के लिए इस प्रोटोकॉल से उत्पन्न कोशिकाओं के अधीन प्रवाह cytometry करने की क्षमता, Allo प्रतिक्रिया के अध्ययन और चयापचय के अध्ययन के लिए इस विधि की उपयोगिता बढ़ जाती है। इन विट्रो में डीसी डीसी विकास, परिपक्वता और प्रतिजन प्रस्तुति का ज्ञान है जो इन विवो डीसी की दुर्लभ संख्या के साथ क्या करने के लिए पहले से मुश्किल है सुधार करने के लिए एक अच्छा मॉडल के रूप में सेवा करते हैं।
डीसी 'सहिष्णुता बनाम प्रतिरक्षा प्रतिरक्षा को विनियमित करने की क्षमता उनमें कैंसर और स्व-प्रतिरक्षित बीमारियों 42, 43, 44, 45 के खिलाफ चिकित्सा विज्ञान में आकर्षक उम्मीदवारों बनाता है। Immunogenic इस प्रोटोकॉल में उत्पन्न डीसी संक्रामक रोगों और ट्यूमर के खिलाफ टीकाकरण प्रभावकारिता में सुधार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है; tolerogenic डीसी अवांछित टी सेल प्रतिक्रिया को नियंत्रित करने और प्रत्यारोपण के बाद rejections को रोकने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। जटिलप्रतिरक्षा और सहिष्णुता के बीच संतुलन डीसी भेदभाव की स्थिति पर काफी निर्भर करता है। डीसी भेदभाव एक समन्वित सेलुलर कार्यक्रम है कि कई संकेत दे रास्ते और चयापचय भाग्य द्वारा नियंत्रित किया जाता है। डीसी के विभिन्न राज्यों भेदभाव bioenergetic और जैव संश्लेषण जरूरतों में मतभेद है; उदाहरण के लिए, सक्रिय डीसी राज्य आराम कर रही है पर डीसी की तुलना में अधिक ऊर्जावान चयापचय अस्तित्व और प्रवास के लिए महत्वपूर्ण रूपांतरों की आवश्यकता होती है। यह ध्यान रखें कि विटामिन डी 3, dexamethasone और rapamycin tolerogenic DCs के लिए प्रेरित करने की क्षमता के लिए जाना जाता है के लिए महत्वपूर्ण है, डीसी चयापचय को प्रभावित करने में वर्णित किया गया है। इस पत्र में, अलग-अलग राज्यों से भेदभाव moDCs के ऊर्जावान चयापचय बाह्य प्रवाह एनालाइजर का उपयोग कर विशेषता थे और tolerogenic moDCs उच्चतम चयापचय प्लास्टिसिटी और LPS प्रेरित परिपक्वता इस प्लास्टिसिटी में कमी आई प्रदर्शन किया। जबकि catabolic चयापचय को प्रभावित करती है tolerogenic डीसी में कार्य 46 उपचय चयापचय डीसी परिपक्वता का समर्थन करता है। डीसीइस प्रोटोकॉल से उत्पन्न आकलन करने के लिए चिकित्सा विज्ञान में प्रतिरक्षा और सहिष्णुता को संशोधित करने के लिए महत्वपूर्ण है कि क्या पकड़ डीसी की चयापचय राज्य में फेरबदल किया जा सकता है। अंत में, हम अपरिपक्व, tolerogenic और परिपक्व moDCs की पीढ़ी DCs 'immunoregulatory कार्यों के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया।
The authors have nothing to disclose.
इस काम के विज्ञान, प्रौद्योगिकी और रिसर्च कोर अनुदान (जे ई सी) के लिए एजेंसी द्वारा समर्थित किया गया।
Ficoll | GE Healthcare | 17-1440-03 | PBMC isolation |
Syringe | Becton, Dickinson | 302832 | PBMC isolation |
1.5 mL centrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | PBMC isolation |
15 mL falcon tube | Falcon | 352096 | PBMC isolation |
50 mL falcon tube | Falcon | 352070 | PBMC isolation |
Centrifuge | Eppendorf | 5810R | PBMC isolation |
0.2 µm filter | Sartorius stedim biotech | 17597 | PBMC isolation |
MACs kit | Miltenyi biotec | 130-042-201 | Monocyte enrichment |
MiniMACS Separator | Miltenyi biotec | 130-042-102 | Monocyte enrichment |
Cell culture grade water | Invitrogen, Life Technologies | Cell culture | |
RPMI | Gibco, Life Technologies | 11875-093 | Cell culture |
FBS | Hyclone | SH30070103 | Cell culture |
Penicillin-streptomycin | Gibco, Life Technologies | 15140 | Cell culture |
Phosphate Buffered Saline |
Gibco, Life Technologies | 10010-031 | Cell culture |
NEAA | Gibco, Life Technologies | 11140-040 | Cell culture |
EDTA | Gibco, Life Technologies | 15575 | Cell culture |
HEPES | Gibco, Life Technologies | 15630-080 | Cell culture |
Sodium Pyruvate | Gibco, Life Technologies | 11360-070 | Cell culture |
GM-CSF | Miltenyi biotec | 130-093-868 | Cell culture |
IL-4 | Miltenyi biotec | 130-093-924 | Cell culture |
Vitamin D3 | Sigma | D1530 | Cell culture |
Dexamethasone | Sigma | D2915 | Cell culture |
LPS | Sigma | l2755 | Cell culture |
trypan blue | Gibco, Life Technologies | 15250-061 | Cell culture |
PerCP-conjugated HLADR | BioLegend | 307628 | Cytometry |
PE-conjugated CD80 | BD Biosciences | 557227 | Cytometry |
PE-conjugated CD83 | BD Biosciences | 556855 | Cytometry |
PE-conjugated CD86 | BD Biosciences | 555665 | Cytometry |
APC-conjugated CD11c | BD Biosciences | 340544 | Cytometry |
PE-conjugated CD14 | Miltenyi biotec | 130-091-242 | Cytometry |
PE-conjugated BDCA3 | Miltenyi biotec | 130-090-514 | Cytometry |
APC-conjugated ILT3 | eBioscience | 12-5139-73 | Cytometry |
Isotype matched PerCP- conjugated Mab |
BioLegend | 400250 | Cytometry |
Isotype matched PE- conjugated Mab |
Miltenyi biotec | 130-091-835 | Cytometry |
Isotype matched APC- conjugated Mab |
Miltenyi biotec | 130-091-836 | Cytometry |
BD LSR II Flow Cytometer | BD Pharmingen | BD LSR II | Cytometry |
cytofix/cytoperm | BD Biosciences | 554714 | Cytometry |
APC/CY7-conjugated CD25 | BD pharmingen | 557753 | Cytometry |
PE/CY7-conjugated CD4 | Biolegend | 300512 | Cytometry |
PerCP-conjugated CD3 | Biolegend | 300428 | Cytometry |
EasySep Human CD4+ T cell enrichment kit | STEMCELL Technologies | 19052 | Alloreaction study |
EasySep magnet | STEMCELL Technologies | 18000 | Alloreaction study |
Cell Trace CFSE cell proliferation kit | Molecular probes | C34554 | Alloreaction study |
HBSS | Gibco, Life Technologies | 14025092 | Alloreaction study |
Alexa Fluor 647-conjugated FoxP3 | BD Biosciences | 560889 | |
Milliplex MAP Human Cytokine/Chemokine magnetic bead panel |
Millipore | HCYTOMAG-60K | Cytokine analysis |
5 mL Polystyrene tube | Falcon | 352058 | Cytokine analysis |
Luminex Sheath Fluid | Millipore | SHEATHFLUID | Cytokine analysis |
FLEXMAP 3D system with xPONENT software | Luminex Corporation | FLEXMAP 3D | Cytokine analysis |
MitoTracker Red CMXRos | Cell Signalling | 9082 | Mitochondrial activity |
DMSO | Sigma Aldrich | D2650 | Mitochondrial activity |
XF Assay Medium (OCR) | Seahorse Bioscience | 102352-000 | Metabolic adaptation |
Glucose | Sigma Aldrich | G8769 | Metabolic adaptation |
XF Base Medium (ECAR) | Seahorse Bioscience | 102353-100 | Metabolic adaptation |
L-glutamine | Gibco, Life Technologies | 25030-081 | Metabolic adaptation |
Calibrant | Seahorse Bioscience | 100840-000 | Metabolic adaptation |
XF Cell Mito Stress kit | Seahorse Bioscience | 103015-100 | Metabolic adaptation |
XF Glycolysis Stress kit | Seahorse Bioscience | 103020-100 | Metabolic adaptation |
Seahorse | Seahorse Bioscience | XFe96 | Metabolic adaptation |