Nefrotoxische substantie Micro-injectie in zebravis tot acuut nierfalen Model

Samenvatting

Renal verwondingen opgelopen van nephrotoxins, die drugs, variërend van antibiotica tot chemotherapeutica omvatten, kan leiden tot complexe aandoeningen waarvan de pathogenese blijft onvolledig begrepen. Dit protocol laat zien hoe zebravis kan worden gebruikt voor ziektemodel van deze aandoeningen, die kunnen worden toegepast voor het identificeren van renoprotectieve maatregelen.

Samenvatting

De nieren zijn gevoelig voor schade door blootstelling aan chemische stoffen ze filteren uit de bloedstroom. Dit kan leiden tot orgaanschade tot een snelle afname van de nierfunctie en de ontwikkeling van klinisch syndroom genoemd acuut nierfalen (AKI). Farmacologische middelen gebruikt medische omstandigheden variërend van bacteriële infectie kanker te behandelen wanneer afzonderlijk toegediend of in combinatie met andere geneesmiddelen, kunnen AKI initiëren. Zebravis een bruikbaar diermodel om chemische effecten op de nierfunctie te bestuderen in vivo, aangezien zij een embryonale nier bestaat uit nefron functionele eenheden die zijn geconserveerd met hogere gewervelde dieren, waaronder mensen. Verder kunnen zebravissen worden toegepast voor genetische en chemische schermen, die mogelijkheden om de cellulaire en moleculaire aspecten van AKI helderen en therapeutische strategieën zoals het identificeren van moleculen nefroprotectief ontwikkelen verschaffen voeren. Hier laten we zien hoe micro-injectie in dezebravisembryo kan worden gebruikt als een paradigma voor nefrotoxische substantie studies.

Inleiding

AKI is een abrupt verlies van nierfunctie die kunnen leiden tot verwoestende gevolgen voor de gezondheid ^1. AKI is een belangrijke kwestie in de gezondheidszorg over de hele wereld vanwege de hoge incidentie van ongeveer 20% bij gehospitaliseerde patiënten, met een nog hogere percentages van 30-50% in intensive care gevallen en ouderen, en sterftecijfers van 50-70% ^1-3. Helaas is de prevalentie van AKI is toegenomen en zal naar verwachting verder escaleren de komende tien jaar, mede als gevolg van de diversiteit van de factoren die de AKI kan induceren, die post-operatieve stress, ischemie, en de blootstelling aan nephrotoxins zoals antibiotica ....

Protocol

De procedures voor het werken met de zebravis embryo's beschreven in dit protocol werd goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite aan de Universiteit van Notre Dame.

1. Voorbereiding van de Solutions

1. Wordt 50x voorraadoplossing van E3 embryomedium door mengen van 73,0 g NaCl, 3,15 g KCI, 9,15 g CaCl ₂ en 9,95 g MgSO ₄ in 5 liter gedestilleerd water, en bewaar bij kamertemperatuur.
2. Voor het kweken van zebravis embryo verdunnen 50x voorraadoplossing van E3 embryo afdrukmateriaal een 1x werkoplossing met gedestilleerd water, voeg vervolgens 200 pl 0,05% methyleenblauw elk 1 liter 1x E3 om als fu....

Resultaten

Een micro-injectie station opgezet is voorzien van een stereomicroscoop, micromanipulator en drukregelaar (Figuur 1A). Transilluminatie van de injectieplaat voorkeur om monsters te zien tijdens deze procedure (Figuur 1B). Bereiding van de injectienaald omvat het trekken van de juiste borosilicaatglas, gevolgd door het bereiden van de rand met snijden en tenslotte backloading de naald. Optimaal wordt de naald in plaats schuin dan stomp (figuur 1C).......

Discussie

Een divers aantal therapeutische middelen zijn geassocieerd met AKI ^29. Er zijn aanzienlijke onderzoek vooruitgang in het begrijpen van de schade veroorzaakt door vele afzonderlijke verbindingen, zoals aminoglycoside gentamicine ³⁰ en de gebruikte chemotherapeutische cisplatine ^31,32 geweest. Sommige pathologische veranderingen die betrokken zijn bij deze voorwaarden, blijven echter het onderwerp van lopend onderzoek. Een opkomende uitdaging blijft begrijpen hoe meerdere drugs negatieve .......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Sodium Chloride	American Bioanalytical	AB01915
Potassium Chloride	American Bioanalytical	AB01652
Calcium Chloride	American Bioanalytical	AB00366
N-Phenylthiourea (PTU)	Aldrich Chemistry	P7629
Ethyl 3-aminobenzoate (Tricaine)	Fluka Analytical	A5040
Borosilicate glass	Sutter Instruments Co.	BF100-50-10
Flaming/Brown Micropipette puller	Sutter Instruments Co.	Mo. P097
UltraPure Agarose	Invitrogen	15510-027
Magnesium Sulfate	Sigma-Aldrich	M7506
Methylene Blue	Sigma-Aldrich	M9140
Falcon Diposable Petri Dishes, Sterile, Corning:
60 mm x 15 mm	VWR	25373-085
100 mm x 15 mm	VWR	25373-100
(microinjection tray) 150 mm x 15 mm	VWR	25373-187
Low Temperature Incubator	Fischer Scientific	11 690 516DQ
Micro Dissecting Tweezer	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5010
Micrometer	Ted Pella, Inc.	2280-24