Murine Eksperimentel Model af oprindelige tumor udvikling og Peritoneal Metastase<em> via</em> Orthotopisk Podning med ovariekarcinomceller

Summary

At afklare flertrinsproces af peritoneal udbredelse af ovariecarcinom, den aktuelle undersøgelse præsenterer en murin eksperimentel model for oprindelige tumor udvikling og peritoneal metastase via ortotopisk inokulering med disse tumorceller.

Abstract

Epiteliale ovariecarcinom (EOC) er forbundet med en dårlig prognose, fordi det viser peritoneal formidling. At forbedre prognosen, er det vigtigt at styre peritoneal formidling. Det er dog stadig uklart, hvordan tumorceller løsnes fra primære læsioner og tillægger mesothelium. Etableringen af en passende dyremodel er nødvendig for at få en forståelse af den mekanisme for peritoneal udbredelse in vivo. I den aktuelle undersøgelse, introducerer vi processen fra den lokale injektion af EOC celler i murine æggestokkene overflade til udviklingen af ​​metastaser, herunder peritoneum og fjerntliggende organer. Nøgne hunmus (BALB / c nu / nu) efter 8 uger gamle, blev anvendt. Under en mikroskopisk synsfelt, EOC-celler (1 x 10 ⁵ celler / pl medium-ekstracellulær matrix (ECM) -baseret hydrogel / ensidig ovarie / mus) blev injiceret i murine æggestokkene gennem en retroperitoneal fremgangsmåde fra den dorsale flanke. Denne foreslåede metode er en less invasiv procedure til musen og minimerer skade på ovariet. Her beskriver vi de metodiske skridt i udviklingen af ​​den oprindelige og metastatisk tumor dannelse af EOC.

Introduction

Epiteliale ovariecarcinom (EOC) tegner sig for den højeste sats for kræft-relateret dødelighed blandt gynækologiske maligniteter ^1. EOC er associeret med en dårlig prognose, primært på grund af den sene symptomatologi, og er ofte forbundet med flere intraperitoneale dataudsendelser og fjerne metastaser ^2-4. Peritoneal formidling er en multi-trins proces. For det første tumorceller løsnes fra de primære læsioner, og migrere ind i bughulen. Når tumorcellerne tillægger peritoneal mesothelium, de begynder at invadere væv gennem mesothelium ^5,6. For bedre at forstå tumorbiologi (f.eks cancer progression og terapeutisk respons), musemodeller give et væld af information. En xenograft med humane cancerceller er meget brugt til musemodeller, hvor humane cancerceller inokuleres subkutant, intraperitonealt, intravenøst, og orthotopisk. En dyremodel med en orthotopisk grafted tumor kan mere effektivt og præcist skabe resultater, der afspejler tumoren miljø i mennesker sammenlignet med en dyremodel med en heterotopisk transplanteret tumor. Derfor, for mange humane tumorer, ortotopisk transplantation modeller er blevet etableret ^7-11.

Her beskriver vi den ortotopisk inokulering af humane EOC celler gennem en retroperitoneal fremgangsmåde fra den dorsale flanke, som har begrænset invasionsevne sammenlignet med ventrale inokulering. Denne teknik kan give en række nyttige oplysninger om EOC, især mekanismen for intraperitoneal formidling.

Protocol

Behandlingen protokol følger retningslinjerne for dyreforsøg vedtaget af Nagoya University. 1. Fremstilling af cellesuspensioner Humanovarie clear cell carcinoma-cellelinie. Opretholde ES-2 celler 12 i RPMI-1640-medium med 10% føtalt bovint serum (FBS) og penicillin / streptomycin (penicillin: 100 enheder / ml, streptomycin: 0,1 mg / ml). Dyrke celler ved 37 ° C i en 5% CO2 befugtet inkubator. Indsamle celler i den logaritmiske vækstfa…

Representative Results

Seks nøgne mus havde deres æggestokke podet med den humane clear cell carcinoma-cellelinie ES-2, som beskrevet i denne protokol. Som vist i figur 1A, efter 2 uger, 5 af de 6 mus havde en tumor i æggestokken inokuleret med ES-2 celler, men der var ingen tumor i den kontralaterale ovarie uden podning (anvendt som kontrol). Desuden 2 af de 5 mus viste flere peritoneale dataudsendelser med ascites. Celler metastaserer til leveren (figur 1B). Æggest…

Discussion

Dyremodeller er afgørende for at analysere de mekanismer tumorudvikling, progression, metastase, og drug effektivitet mod cancerceller. Mus, der bærer humane ovariecancerceller også er blevet anvendt som en dyremodel. Her beskriver vi en mindre invasiv procedure for administrationen af ​​ovarietumorceller ved en orthotopisk site. Under anvendelse af denne procedure, inokulering i ovariet gennem en retroperitoneal fremgangsmåde fra den dorsale flanke giver betydelige fordele i forhold til andre almindeligt anvend…

Materials

Matrigel matrix	BD	354234	ECM-based hydrogel
Insulin syringe	TERUMO	SS-05M2913	1/2cc, 29Gx1/2"
Suturing needle with suture			11mm, 3/8, Nylon6-0
Reflex 7mm Wound Clip Applier	CellPoint Scientific	204-1000
Reflex 7mm wound clips	CellPoint Scientific	203-1000