Живая съемка по изучению микротрубочек динамической неустойчивости в таксанов устойчивостью рака молочной железы

Richard Wang; Harris Wang; Zhixiang Wang

doi:10.3791/55027

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Живая съемка по изучению микротрубочек динамической неустойчивости в таксанов устойчивостью рака молочной железы

7.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55027

⸱

20 февраля 2017 г.

Richard Wang¹ , Harris Wang¹ , Zhixiang Wang¹

¹Department of Medical Genetics, Signal Transduction Research Group, Faculty of Medicine and Dentistry, University of Alberta

В этой статье

Краткое содержание

В этой статье мы сообщаем о протоколе, описывающем метод in vivo для измерения динамической нестабильности микротрубочек в клетках рака молочной железы, резистентных к доцетакселу (MCF-7_TXT). В этом методе используется система визуализации деконволюционной микроскопии для обнаружения экспрессии GFP-тубулина в клетках-мишенях.

Аннотация

Таксаны, такие как доцетаксел, относятся к группе агентов, нацеленных на микротрубочки (MTA), которые обычно используются для лечения рака. Тем не менее, резистентность к таксанам в раковых клетках резко снижает эффективность долгосрочного использования препаратов. Накопленные данные свидетельствуют о том, что механизмы, лежащие в основе устойчивости к таксанам, включают как общие механизмы, такие как развитие множественной лекарственной устойчивости из-за сверхэкспрессии белков оттока лекарств, так и специфические механизмы, такие как механизмы, связанные с динамикой микротрубочек.

Поскольку таксаны нацелены на микротрубочки клеток, измерение динамической нестабильности микротрубочек является важным шагом в определении механизмов резистентности таксанов и дает представление о том, как преодолеть эту резистентность. В эксперименте был использован метод in vivo для измерения динамической нестабильности микротрубочек. Меченный GFP α-тубулин экспрессировался и встраивался в микротрубочки в клетках MCF-7, что позволяло регистрировать динамику микротрубочек с помощью покадровой съемки с помощью чувствительной камеры. Результаты показали, что, в отличие от нерезистентных родительских клеток MCF-7_CC, динамика микротрубочек доцетаксел-резистентных клеток MCF-7_TXT нечувствительна к лечению доцетакселом, что вызывает резистентность к доцетаксел-индуцированному митотическому аресту и апоптозу. В этой статье будет описан этот метод измерения динамической нестабильности микротрубочек in vivo.

Введение

Основной причиной смертности от рака молочной железы через метастазирования ^{^1,} ^2. Таксаны , такие как доцетаксел и паклитаксел, в настоящее время используются в качестве лекарства первой линии в лечении метастатического рака молочной железы ^{^2,} ^{^3,} ^{^4,} ^{^5,} ^6. Они являются частью группы микротрубочек таргетирования агентов (MTA), которые нарушают динамику микротрубочек. Тем не менее, одна из самых больших проблем в использовании таксанов в лечебно....