Intraductal Levering til kanin melkekjertlene

Summary

Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.

Abstract

Lokaliserte intraductal behandlinger for brystkreft har potensielle fordeler, blant annet effektiv levering til tumoren og redusert systemisk toksisitet og uønskede bivirkninger ^{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7.} Men flere utfordringer gjenstår før disse behandlingene kan brukes mer allment. Utvikling og validering av intraductal therapeutics i en passende dyremodell rette for utvikling av intraductal terapeutiske strategier for pasientene. Mens musemelkekjertelen har blitt mye brukt som et modellsystem av mammary utvikling og tumorgenese, er det anatomi forskjellig fra det humane kjertel. En større dyremodell, for eksempel kanin, kan tjene som en bedre modell for melkekjertler struktur og intraductal terapeutisk utvikling. i contrast til mus, i hvilket ti ductal trær er romlig fordelt langs kroppens akse, som hver ender i en separat spenen, kanin brystkjertel mer ligner det menneskelige kjertel, med flere overlappende ductal systemer som kan gå ut gjennom separate åpninger i en spene. Her presenterer vi minimalt invasive metoder for levering av reagenser direkte inn i kanin melkekanalen og for visualisering av leveransen selv med høy oppløsning ultralydavbildning.

Introduction

Den intraductal levering av terapeutiske midler har blitt studert i gnagermodeller og i tidlig stadium menneskelige forsøk ^{3, 4, 5, 6, 11, 12.} En fersk fase I-studie demonstrerte sikkerhet og muligheten for intraductal karboplatin eller intraductal pegylert liposomalt doxorubicin hos kvinner venter mastektomi for behandling av invasiv kreft ^to.

Tidligere protokoller for intraductal arrangementet har blitt utviklet for mus og rotte brystkjertler ^{6, 7, 8, 9.} For forskningsformål, intraductal tumorcelle injeksjoner og lentiviral vektor levering av onkogener har også blitt utført i gnagermodellerref "> ^{13, 14, 15, 16.} Imidlertid kan en ideell in vivo-modell av intraductal leveringsprosessen bør tillate utviklingen av nye klasser av terapeutiske forbindelser og lette preklinisk bedømmelse. anatomiske forskjeller mellom gnagere og mennesker har kompliserte translasjonen av disse studier.

I motsetning til mus, i hvilket hver kanal ender ved et separat spene, den humane bryst består av 5 til 9 uavhengige ductal systemer, hver med en separat åpning ender i spenen. Kanin melkekjertler båtplass fire uavhengige duktale systemer, hver for seg tilgjengelig gjennom en av fire åpninger i en enkelt spene. En kanin modell mer samsvarer den menneskelige anatomi og tillater studier av intraductal levering av legemidler i en mer relevant sammenheng.

Her bruker vi to teknikker for å vurdere intraductal levering. Samtidig administrering av envitale fargestoff tillater visualisering gjennom huden og tilveiebringer en enkel og hurtig bekreftelse av fremgangsmåten. For noen anvendelser kan høyere oppløsning kartlegging av kanalene være foretrukket. Vi presenterer her en protokoll for ultralydavbildning av kanalene gjennom intraductal levering av en ikke-målrettede kontrast reagens.

Protocol

Prosedyrer ved hjelp av dyr fag har blitt godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité ved University of Texas i Austin. 1. Preoperativ forberedelse Ta opp kroppsvekten til hver kanin. Som med alle prekliniske studier overvåke dyre vekter jevnlig for å vurdere potensielle toksisitet. Før bedøvelse kaninen, fylle en 50 ml konisk rør med kommersielt tilgjengelige ultralyd gel og spinn ved 500 xg i 30 s; det bør ikke være noen synlige bobler i gelen ved gjen…

Representative Results

Her viser vi at det intraductal levering av kontrast reagenser til melkekanalene i en kanin kan oppnås uten skade på vev (figur 2). Hos kaniner, fire separate duktale systemer samles i en spene, og dermed kan nås og avbildes individuelt ved hjelp av denne metoden. Individuelle duktale åpninger er lett visualisert; oppmerksom på pilspissen markerer en andre ductal åpning ved siden av cannulated kanalen i figur 2B. <p class="jove_content" fo:keep…

Discussion

Denne metoden for intraductal levering til kanin melkekjertelen kan anvendes for ultralydkontrast reagenser og mange andre vandige løsninger, inkludert vitale fargestoffer og terapeutiske midler. Tidligere studier har vist intraductal levering av hormoner ^{17, 18, 19.} I gnager modeller, intraductal levering av nukleinsyrer ⁸ Kjemoterapeutika ^{6, 7}…

Materials

MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Atropine Sulfate 0.5 mg/mL	Animal Health International	15320764	If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate.
Ketamine HCL 100mg/mL	Animal Health International	21250699	http://www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20mg/mL	Animal Health International	20101547
Yohimbine 0.2mg/mL	Animal Health International	14588965
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads
Ultrasound system	VisualSonics	Vevo 2100