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Neuroscience

측정과 남성의 변경 결합 드라이브<em> 노랑 초파리</em

Published: February 15, 2017
doi:
10.3791/55291
, , ,
1F.M. Kirby Neurobiology Center,Boston Children’s Hospital, 2Harvard NeuroDiscovery Center,Harvard Medical School, 3Department of Neurobiology,Harvard Medical School

Summary

이 문서 melanogaste 동기 부여를 공부 r에 초파리에서 남성 짝짓기 드라이브를 사용하는 행동 분석에 대해 설명합니다. 이 방법을 사용하여, 연구자는이 동기를 기초가 유전 적 분자 및 세포 메커니즘을 밝히기 위해 고급 플라이 neurogenetic 기술을 이용할 수있다.

Abstract

조사의 수십 년에도 불구하고, 동기 부여 상태의 신경 세포 및 분자 기지 신비 남아있다. 우리는 최근에 여기에 세부 사항을 우리 방법에있는 남성 노랑 초파리 (Drosophila의)의 결합 드라이브를 사용하여 동기 부여에 대한 심층 조사를위한 소설, 환원 및 확장 가능한 시스템을 개발했다. 행동 패러다임은 남성 짝짓기 드라이브가 반복 교미의 과정을 통해 다산과 함께 감소하고 ~ 3 일에 걸쳐 복구 발견 중심으로. 이 시스템에서, 파리에서 사용할 수있는 강력한 neurogenetic 도구는 유전 적 접근성과 성적 행동에 사용할 추정 배선도 수렴. 이 수렴 신속한 격리 및 특정 동기 부여 기능을 가진 작은 신경 인구의 심문을 할 수 있습니다. 여기에 세부 사항을 측정하고 남성 비행에 구애 의욕을 변경하는 데 사용되는 물림 분석의 설계와 실행을 우리. 사용이분석, 또한 낮은 남성 상대 거리가 도파민 성 신경 자극에 의해 극복 될 수 있다는 것을 보여준다. 포만 분석은 유전 적 배경의 영향으로, 간단한 저렴하고 강력한이다. 우리는 포만감 분석이 동기 부여 상태의 신경 생물학에 많은 새로운 통찰력을 생성 할 전망이다.

Introduction

초파리 작품은 유전자 하나의 성질을 포함한 다수의 생명 현상에 깊은 선구 통찰력을 제공하고, 배아 발달 2 활동 일주기 3 및 신경계 4, 5, 6의 개발 및 배선의 원리. 동기 부여는 아마도 때문에 지금까지 연구 된 시스템의 한계, 훨씬 덜 이러한 현상보다 이해 남아있다. 비행의 동기는 주로 인해 지방 증착의 명백한 징후를 배제 공급 한판 승부와 외골격에 따라 자신의 하고서 음식 섭취에 많은 도전을 제시 기아의 맥락에서 연구되고있다. 따라서, 즉석에서 동기를 연구하기 위해 사용 된 시스템을 확장 할 필요가있다.

우리는 상대 드라이브의 연구를위한 행동 프레임 워크를 설명초파리. 이 시스템은 비행과 접근성 7, 8, 9, 10, 11, 12 및 성적 동종 이형 회로 (8), (13)의 추정에 커 넥톰 neurogenetic 툴을 이용한다. 또한, 많은 선천성 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 및 22, 23, 24 관능 모터 회로 제어 구애 드문 기회를 제공하고, 세부에서 작동되었다 습득동기가 충돌하는시 정확한 회로 노드를 찾습니다. 우리는 최근 파리에서 인간으로, 도파민 수준이 결합 드라이브 25, 26, 27의 중심에 있으며, 보도했다. 우리는 여기에 25을 설명하는 분석을 사용하여이 보존 된 현상 분석 관련 도파민 생산 및 비행에 신경을 수신 촉진 상세한 분자 – 회로 수준에 유전 적 접근을 얻고있다.

우리는 장 등의 등의 행동 분석에 추가 할 수 있습니다. 우리는 2 차원 (2-D) 포만 분석 이전 방법에 비해 중요한 개선 호출 영상 득점을 허용 25 새로운 평면 행동 경기장. 따라서, 새로운 분석은 확장 성 및 정량화, 동기에 관여하는 유전자와 신경 세포의 유전 스크린의 때문에 더 적합하다. 우리는 구애 분석 및 neuroge와 함께,이 새로운 분석을 사용네틱 조작은, 측정하고 즉석에서 짝짓기 드라이브를 변경하는 방법을 설명합니다.

Protocol

참고 :이 프로토콜은 준비 (섹션 1-3) 설명, 실행 (4 절), 및 분석 2-D의 물림 분석 (제 4). 그런 다음, 예를 들어 도파민 자극을 사용하여, 5 장에서는 성욕 과다증을 유발하는 2-D의 물림 분석과 thermogenetic 자극을 결합하는 방법을 보여줍니다. 제 6 절은 2-D의 물림 분석의 결과를 확인하는 3 가지 방법을 설명합니다. 마지막으로, 제 7 남성 파리 짝짓기 드라이브의 복구를 측정하는 방법을 보여줍니다. …

Representative Results

초파리 상대 거리를 특성화하기 위해, 3 일된, WT 캔톤-S 남성은 2-D 포만 분석에서 시험 하였다. 분석 (4.5 시간)에 걸쳐, 수컷 4.8 ± 0.3 평균 정합 시간 (평균, SEM의 ± 표준 오차를 의미한다). 교배는 제 2 시간 (78 %) (도 6A, 6B)에 주로 개시 및 분석법 (도 6A, 6B)에 진행됨에 따라 덜 빈번해진다. 이 감소는 상대 파트너의 부족 (74 %의 여성이 분석을 ?…

Discussion

동기 부여 상태, 만족을 했소 유지, 34을 복구 할 수 있습니다. 우리는 신속하고 견고하게 즉석에서 드라이브 짝짓기의 이러한 측면을 모두 측정하는 2-D의 물림 분석을 제시한다. 이 분석은 동기 동작의 분자 및 회로 부품을 연구 고급 플라이 유전자 조작을 사용할 수있는 가능성을 연다.

포만 분석은 남성의 능력을 성공적으로 법원과 교접하고, 적절한시기?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors thank Mike Crickmore, Dragana Rogulja, and Michelle Frank for comments on the manuscript. Pavel Gorelik provided technical support for manufacturing the behavioral arenas. This work was conducted in Mike Crickmore’s lab and is also supported by the Whitehall Foundation (Principal Investigator: Dragana Rogulja). S.X.Z. is a Stuart H.Q. and Victoria Quan Fellow at Harvard Medical School.

Materials

1/16 inch clear acrylic McMaster-Carr 8589K12 Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.
1/8 inch clear acrylic McMaster-Carr 8589K42 Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.
3/16 inch clear acrylic McMaster-Carr 8560K219 Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.
1/32 inch black delrin McMaster-Carr 8575K132 Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.
Hex screws, 1 inch long (50x) McMaster-Carr 92314A115  Used to make arenas. Can be replaced by 3/4 inch screws (92314A113, McMaster-Carr) for 32-chamber arenas.
Thumb nuts (25x) McMaster-Carr 92741A100 Used to make arenas. Can be replaced by regular hex nuts (90480A005, McMaster-Carr).
Camcorder Canon Vixia HF R700 Can be replaced by any consumer comcorder.
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Boutros, C. L., Miner, L. E., Mazor, O., Zhang, S. X. Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (120), e55291, doi:10.3791/55291 (2017).
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