Dit protocol beschrijft cloaca massage, een niet-invasieve handmatige techniek voor het verzamelen van sperma van vogels, en DNA-extractie van aviaire-sperma met behulp van een commerciële winning kit met wijzigingen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Aviaire-sperma door cloaca Massage en isolatie van DNA van sperma
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Van sperma kan nuttig zijn voor een breed scala aan toepassingen waaronder studies waarbij kwaliteit van het sperma, sperma telomeer dynamiek en epigenetica. Vogels zijn gebruikte onderwerpen in biologisch onderzoek en zijn ideaal voor studies waarbij herhaalde spermastaaltje. Er zijn echter weinig middelen momenteel beschikbaar voor diegenen die willen leren hoe te verzamelen en DNA halen uit aviaire-sperma. Hier beschrijven we cloaca massage, een zachte, niet-invasieve handmatige techniek voor het verzamelen van aviaire-sperma. Hoewel deze techniek is gevestigd in de literatuur, kan het moeilijk zijn om te leren van de beschrijvingen van de beschikbare. We bieden ook informatie voor de extractie van DNA van aviaire-sperma met behulp van een commerciële winning kit met wijzigingen. Cloaca massage kan gemakkelijk worden gebruikt op elke kleine tot middelgrote mannelijke zangvogels reproductieve voorwaarde. Na collectie, het sperma kan worden onmiddellijk gebruikt voor beweeglijkheid testen of bevroren voor DNA-extractie volgens het protocol hierin beschreven. Dit extractie-protocol werd verfijnd voor aviaire-sperma en met succes heeft geweest tweedehands voort monsters verzameld uit verschillende uit de orde zangvogels soorten (Passer domesticus, Spizella passerina Haemorhous mexicanusen Turdus migratorius ) en een columbid (Columba livia).
Inleiding
Vogels zijn ideale onderwerpen voor studies waarbij kwaliteit van het sperma en competitie1, sperma telomeer dynamics2epigenetica3en soortgelijke onderwerpen, zoals ze veel in biologisch onderzoek gebruikt worden en sperma kan gemakkelijk worden bemonsterd met behulp van cloaca Massage. Cloaca massage is een zachte, niet-invasieve handmatige techniek voor het verzamelen van sperma van vogels4,5,6. Herhaalde monsters kunnen gemakkelijk worden verkregen en geen speciaal gereedschap nodig, waardoor het eenvo....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Dit protocol omvat gewervelde dieren onderwerpen en is goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) in North Dakota State University.
1. sperma uit een zangvogel met behulp van cloaca massage
Opmerking: Cloaca massage is een effectieve sperma collectie techniek op reproductief actieve vogels alleen, maar kan met succes worden uitgevoerd buiten het broedseizoen in passende gevangenschap situaties. Reproductieve activiteit moet worden bepaald voor de doelsoort voorafgaand aan het gebruiken van cloaca massage. Deze techniek kan worden gebruikt op wilde vogels op vangen of in gevangenschap g....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Cloaca massage en DNA extractie met behulp van die het protocol beschreven heeft verricht voor verschillende uit de orde zangvogels soorten en een columbid (tabel 1). De aanwezigheid van zaadcellen in sperma monsters verzameld door cloaca massage werd bevestigd door het bekijken van een kleine hoeveelheid van de verdunde monsters onder een samengestelde microscoop op 400 X vergroting (Figuur 3). Na extractie van DNA van sperma monsters verzam.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Beschrijven we een eenvoudige en betrouwbare methode voor het verzamelen van sperma van kleine en middelgrote zangvogels reproductief actieve toestand en extractie van DNA van aviaire-sperma.
Het protocol van de extractie van het DNA van omschreven sperma is aangepast ten opzichte van een kit voor eenvoud, maar werd verfijnd voor gebruik op aviaire-sperma. Sperma resistent zijn tegen lysis door standaard extractie chemicaliën9,13, en s.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.
Dankbetuigingen
Wij danken Jose Noguera voor vroege hulp bij cloaca massage, en Jeffrey Kittilson voor lab ondersteunen. Dit werk werd gesteund door een award ND EPSCoR FAR0022429 te BJH. Publicatiekosten waren genereus ondersteund door de NDSU afdeling biologische wetenschappen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Microhematocrit capillaire buizen | Fisherbrand | 22-362566 | Elke leverancier kan worden gebruikt. Kleinere buizen kunnen effectiever zijn voor het verzamelen van kleine zaadmonsters, zoals van zeer kleine zangvogels zoals de chipping sparrow. |
| Microcentrifugebuizen | Elke | ||
| 1x PBS | Elke | Gebaat voor het bewaren van zaadmonsters voorafgaand aan DNA-extractie. | |
| DL-Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D0632 | |
| Tris base | Sigma-Aldrich | 10708976001 | Elke leverancier kan worden gebruikt. |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 1233508 | Elke leverancier kan worden gebruikt. |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 793566 | Elke leverancier kan worden gebruikt. |
| SDS | Sigma-Aldrich | 1614363 | Elke leverancier kan worden gebruikt. |
| QIAamp DNA micro kit | Qiagen | 56304 | Qiagen QIAamp DNA micro kit wordt specifiek aanbevolen. Dit DNA-extractieprotocol is geprobeerd met andere commerciële kits, maar met weinig succes. De redenen hiervoor zijn ons onbekend. |
Referenties
- Briskie, J. V., Montgomerie, R. Sperm size and sperm competition in birds. Proc. R. Soc. B. 247, 89-95 (1992).
- Monaghan, P. Telomeres and life histories: the long and the short of it. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1206, 130-142 (2010).
- Carrell, D. T.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
