Vogelgrippe Samengewinnung von Blasenekstrophie Massage und Isolierung von DNA aus Spermien
Summary
Dieses Protokoll beschreibt Blasenekstrophie Massage, eine nicht-invasive manuelle Technik zum Sammeln von Samen von Vögel und DNA-Extraktion aus Vogelgrippe Spermien mit einem kommerziellen Extraktion Kit mit Modifikationen.
Abstract
Sammlung des Samens möglicherweise nützlich für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich Studien, die Qualität der Spermien, Sperma Telomere Dynamik und Epigenetik. Vögel sind weit verbreitete Themen in der biologischen Forschung und sind ideal für Studien mit wiederholter Spermaproben. Einige Ressourcen sind jedoch derzeit für diejenigen, die lernen, wie man sammeln und Vogelgrippe Samenzellen DNA extrahieren. Hier beschreiben wir Blasenekstrophie Massage, eine sanfte, nicht-invasive manuelle Technik zur Vogelgrippe Sperma zu sammeln. Obwohl diese Technik in der Literatur hergestellt ist, kann es schwierig, aus den verfügbaren Beschreibungen zu lernen sein. Wir bieten auch Informationen zur Extraktion von DNA aus Vogelgrippe Samen mit einem kommerziellen Extraktion Kit mit Modifikationen. Blasenekstrophie Massage kann leicht auf jede kleine bis mittlere männliche Vogel in reproduktive Zustand verwendet werden. Nach Sammlung kann das Sperma sofort für Motilität Assays verwendet oder eingefroren für DNA-Extraktion nach dem hier beschriebenen Protokoll. Diese Extraktion-Protokoll wurde für Vogelgrippe Sperma verfeinert und auf Proben von mehreren Sperlingsvögel (Passer Domesticus, Spizella Passerina Haemorhous Mexicanusund Turdus Migratorius erfolgreich eingesetzt ) und eine Columbid (Columba Livia).
Introduction
Vögel sind ideale Motive für Studien mit Spermien-Qualität und Wettbewerb1, Sperma Telomere Dynamik2Epigenetik3und ähnliche Themen, wie sie weit in der biologischen Forschung verbreitet sind und Spermien leicht entnommen werden können, mit Blasenekstrophie Massage. Blasenekstrophie Massage ist eine sanfte, nichtinvasive manuelle Technik zum Sammeln von Samen von Vögel4,5,6. Wiederholte Proben können leicht erhalten werden und sind keine Spezialwerkzeuge erforderlich, so dass es einfach in das Feld oder Labor durchzuführen. Obwohl Blasenekstrophie Massage seit Jahrzehnten im Einsatz gewesen ist, ist es schwierig, aus den verfügbaren Beschreibungen geschrieben zu lernen. Diese Veröffentlichung dient zur Verringerung der Zeit und Unsicherheit Blasenekstrophie Massage lernen.
Samen gesammelt von Vögel mit Blasenekstrophie Massage kann sofort für Motilität Bewertung4,7 oder künstliche Befruchtung8verwendet, oder für andere Nutzungen wie erweiterte Bildgebung und DNA-Extraktion eingefroren. Spermaproben von passerine Vögel sind klein, aber dicht gepackte Spermien enthalten. DNA wird mit einer kommerziellen Extraktion Kit für Einfachheit, mit Modifikationen, die speziellen Schutzfunktionen von Spermien9zu überwinden. Nach der Extraktion können Sperma Telomere mit qPCR10gemessen werden.
Protocol
Representative Results
Discussion
Wir beschreiben eine einfache und zuverlässige Methode für das Sammeln von Samen von kleinen und mittleren Vögel in reproduktiv aktiven Zustand und Extrahieren von DNA aus Vogelgrippe Sperma.
Die beschriebenen Samen DNA Extraktion Protokoll ist aus einem Bausatz für Einfachheit geändert, aber wurde für den Einsatz auf Vogelgrippe Sperma veredelt. Spermien sind resistent gegen lyse von standard-Extraktion Chemikalien9,13, und Sper…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken Jose Noguera für frühe Hilfen mit Blasenekstrophie Massage und Jeffrey Kittilson für Labor zu unterstützen. Diese Arbeit wurde durch einen ND EPSCoR FAR0022429 Award, BJH unterstützt. Publikationskosten waren der NDSU Abteilung der biologischen Wissenschaften großzügig unterstützt.
Materials
| Microhematocrit capillary tubes | Fisherbrand | 22-362566 | Any supplier can be used. Smaller tubes may be more effective for collection of small semen samples, such as from very small passerine birds like chipping sparrow. |
| Microcentrifuge tubes | Any | ||
| 1x PBS | Any | Used for storing semen samples prior to DNA extraction. | |
| DL-Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D0632 | |
| Tris base | Sigma-Aldrich | 10708976001 | Any supplier can be used. |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 1233508 | Any supplier can be used. |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 793566 | Any supplier can be used. |
| SDS | Sigma-Aldrich | 1614363 | Any supplier can be used. |
| QIAamp DNA micro kit | Qiagen | 56304 | Qiagen QIAamp DNA micro kit is recommended specifically. This DNA extraction protocol has been attempted with other commercial kits but with little success. The reasons for this are unknown to us. |
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