ضخ قناة البنكرياس: طريقة فعالة وانتقائية من المخدرات والتسليم الفيروسي
Summary
ضخ قناة البنكرياس هو تقنية هامة يمكن أن تسمح لتتبع النسب، وإدخال الجينات، واستهداف خط الخلية محددة. يتم تقديم تقنية ضخ قناة البنكرياس لتوصيل المخدرات والفيروسية إلى خلايا البنكرياس هنا.
Abstract
البنكرياس هو جهاز ثنائي الوظائف مع كل من مكونات الغدد الصماء والغدد الصماء. يمكن أن يصيب عدد من الأمراض البنكرياس، بما في ذلك مرض السكري والتهاب البنكرياس وسرطان البنكرياس. كل ثلاثة من هذه الأمراض علامة مجالات نشطة من الدراسة، ليس فقط لتطوير العلاج الفوري، ولكن أيضا لفهم أفضل للفيزيولوجيا المرضية. وهناك عدد قليل من الأدوات لتعزيز مجالات الدراسة هذه. ضخ قناة البنكرياس هو تقنية هامة يمكن أن تسمح لتتبع النسب، وإدخال الجينات، واستهداف خط الخلية محددة. تتطلب هذه التقنية تشريحا معقدا للجزء الثاني من الاثني عشر والأمبولة ، يليه انسداد القناة الصفراوية وتكنيس قناة البنكرياس. على الرغم من أن هذه التقنية هي صعبة من الناحية الفنية في البداية، والتطبيقات لا تعد ولا تحصى. 10- وأبرز الغموض في تفاصيل الإجراء بين المجموعات الحاجة إلى بروتوكول موحد. يصف هذا العمل التعبير عن بروتين فلوري أخضر (GFP) داخل البنكرياس بعد ضخ قناة البنكرياس لناقل فيروسي يعبر عن GFP مقابل جراحة صورية. التسريب وبالتالي التعبير محدد للبنكرياس ، دون التعبير موجود في أي نوع آخر من الأنسجة.
Introduction
البنكرياس هو جهاز ثنائي الوظائف ، مع كل من مكونات الغدد الصماء والغدد الصماء. يمكن أن يصيب عدد من الأمراض البنكرياس ، بما في ذلك مرض السكري والتهاب البنكرياس وسرطان البنكرياس1. كل ثلاثة من هذه الأمراض علامة مجالات نشطة من الدراسة، ليس فقط لتطوير العلاج الفوري، ولكن أيضا لفهم أفضل للفيزيولوجيا المرضية.
ومن شأن طريقة التسليم العلاجي المستهدفة أن تكون مفيدة. لقد طورنا تقنية ضخ قناة البنكرياس التي هي طريقة فعالة وانتقائية لتسليم المخدرات والفيروسية إلى خلايا البنكرياس. في هذا النموذج، القناة البنكرياسية يتم تحصينها بشكل انتقائي، والقناة الصفراوية الشائعة محصرة، مما يسمح بالولادة حصرا إلى البنكرياس.
هذه التقنية يمكن أن تسمح لتتبع النسب من أنواع الخلايا المحددة لتوضيح المزيد من مسارات النمو الهامة لتطوير البنكرياس وعلم الأمراض2،3. المروجين مختلفة في ناقلات الفيروسية تسمح لاستهداف محددة من خطوط الخلية وإدخال الجينات في هذه الخطوط الخلية4،5. يوضح هذا العمل التعبير عن بروتين فلوري أخضر (GFP) داخل البنكرياس بعد ضخ قناة البنكرياس لنواقل فيروسي يعبر عن GFP مقابل جراحة صورية.
Protocol
Representative Results
Discussion
يصف هذا العمل بالتفصيل المنهجية وراء ضخ قناة البنكرياس ، وهو نموذج فعال للفأرة لتسليم الجينات والجزيئات الأخرى على وجه التحديد وبشكل فعال إلى البنكرياس. الغموض في تفاصيل الإجراء بين المجموعات المختلفة أبرز الحاجة إلى بروتوكول موحد8و9و10….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ولا يوجد لدى أصحاب البلاغ أي إقرار. تم تلقي التمويل من مؤسسة الصحة وتنظيم الأسرة التابعة لمقاطعة تشجيانغ (منحة 20146242) ومؤسسة مكتب ونتشو للعلوم والتكنولوجيا (المنحة Y20140248).
Materials
| Mice (25-30g, 8-12 weeks old) | Jackson Laboratory | ||
| Ketofen | Henry Schein Inc. | 5487 | |
| Ethanol (70%) | Sigma-Aldrich | 34923 | |
| Sterile Saline Solution | Baxter Healthcare Corp. | 2B-13-00 | |
| Protective Equipment | |||
| Hair Removal Product | Nair or trimmer | ||
| Gauze Pads 2in x 2in | Fisher Healthcare | 22-362-178 | |
| Needles (30.5G and 25G) | Becton Dicksinson and Co. | 305106 and 305122 | |
| Syringe for Ketofen and Saline | Becton Dicksinson and Co. | 309657 | |
| Syringe for Pump | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 | |
| Infusion Pump | Pump Systems Inc. | NE-1000 | |
| Infusion Catheter | World Precision Instruments | CMF31G | |
| Curved Bulldog Clamps (2) | Roboz | RS-7439 | |
| Arruga Forceps | Roboz | RS-5163 | |
| Adson Forcep | Roboz | RS-5234 | |
| Needle Holder | Roboz | RS-7882 | |
| Scissor | Roboz | RS-5982 | |
| Cotton Tip Applicators | Physician Sales and Services | 22-9988 | |
| Dissecting Microscope | |||
| Suture | Owens and Minor | SXMD1B402 |
References
- Gittes, G. K. Developmental biology of the pancreas: a comprehensive review. Dev Biol. 326 (1), 4-35 (2009).
- Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors. Development. 129 (10), 2447-2457 (2002).
- Weinberg, N., Ouziel-Yahalom, L., Knoller, S., Efrat, S., Dor, Y. Lineage tracing evidence for in vitro dedifferentiation but rare proliferation of mouse pancreatic beta-cells. Diabetes. 56 (5), 1299-1304 (2007).
- Raper, S. E., DeMatteo, R. P. Adenovirus-mediated in vivo gene transfer and expression in normal rat pancreas. Pancreas. 12 (4), 401-410 (1996).
- Xiao, X., et al. Pancreatic cell tracing, lineage tagging and targeted genetic manipulations in multiple cell types using pancreatic ductal infusion of adeno-associated viral vectors and/or cell-tagging dyes. Nat Protoc. 9 (12), 2719-2724 (2014).
- Song, Z., et al. EGFR signaling regulates beta cell proliferation in adult mice. J Biol Chem. 291 (43), (2016).
- Xiao, X., et al. M2 macrophages promote beta-cell proliferation by up-regulation of SMAD7. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (13), E1211-E1220 (2014).
- Laukkarinen, J. M., Van Acker, G. J., Weiss, E. R., Steer, M. L., Perides, G. A mouse model of acute biliary pancreatitis induced by retrograde pancreatic duct infusion of Na-taurocholate. Gut. 56 (11), 1590-1598 (2007).
- Lichtenstein, A., et al. Acute lung injury in two experimental models of acute pancreatitis: infusion of saline or sodium taurocholate into the pancreatic duct. Crit Care Med. 28 (5), 1497-1502 (2000).
- Perides, G., van Acker, G. J., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nat Protoc. 5 (2), 335-341 (2010).
- Guo, P., et al. Specific transduction and labeling of pancreatic ducts by targeted recombinant viral infusion into mouse pancreatic ducts. Lab Invest. 93 (11), 1241-1253 (2013).
- Xiao, X., et al. Neurogenin3 activation is not sufficient to direct duct-to-beta cell transdifferentiation in the adult pancreas. J Biol Chem. 288 (35), 25297-25308 (2013).
